近年來,惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率日益增長,成為威脅人類健康的重要原因之一。以自由基為基礎(chǔ)的腫瘤治療已廣泛應(yīng)用于臨床,自由基主要包括過氧化物、超氧化物、羥基自由基和單線態(tài)氧等,可對脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA造成損傷,引起氧化應(yīng)激,具有強(qiáng)細(xì)胞毒性,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。常用的自由基治療有放射治療(RT)和光動(dòng)力治療(PDT)等。其中光動(dòng)力治療(PDT)因其治療的非侵入性、高選擇性、低毒副作用等特點(diǎn)被臨床廣泛用于多種腫瘤的治療。然而腫瘤乏氧環(huán)境極大降低了 PDT氧依賴的自由基生成,并且腫瘤細(xì)胞高抗氧化的內(nèi)環(huán)境如過表達(dá)的谷胱甘肽(GSH),也進(jìn)一步削弱了自由基治療的效率。然而對于PDT而言,目前大部分光敏劑光毒性大,激光穿透能力差等均限制了其臨床應(yīng)用。因此構(gòu)建一個(gè)不依賴氧氣同時(shí)可打破腫瘤細(xì)胞還原屏障的治療體系是目前腫瘤高效自由基治療的需求。基于上述分析,本課題構(gòu)建了一種兼具乏氧環(huán)境高效產(chǎn)生及下調(diào)胞內(nèi)還原微環(huán)境的時(shí)空可控的自由基治療體系,該體系主要具備以下特點(diǎn):(1)利用不依賴氧氣的烷基自由基的高效產(chǎn)生治療腫瘤,2,2’-氮雜雙(2-咪唑啉)二鹽酸鹽(2,2’-azobis[2-(2-imidazolin...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 前言
第二章 CuS/AIPH@BSA的制備及表征
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 AIPH化學(xué)性質(zhì)的考察
            2.1.1 烷基自由基測定方法
                2.1.1.1 測定原理
                2.1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.2 不同溫度下AIPH產(chǎn)生自由基能力考察
            2.1.3 不同氧含量下AIPH產(chǎn)生自由基能力考察
        2.2 AIPH含量檢測方法的建立
            2.2.1 AIPH檢測波長的確定
            2.2.2 AIPH標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.2.3 精密度考察
            2.2.4 回收率考察
        2.3 CuS/AIPH@BSA的制備
            2.3.1 CuS納米載體的制備
            2.3.2 CuS/AIPH@BSA的制備
        2.4 最佳投料比的考察及包封率的測定
        2.5 CuS/AIPH@BSA各階段產(chǎn)物的表征
            2.5.1 紫外可見分光光度計(jì)波長掃描
            2.5.2 透射電子顯微鏡
            2.5.3 X射線衍射
            2.5.4 X射線光電子能譜
            2.5.5 粒徑分布及Zeta電位
        2.6 CuS/AIPH@BSA自由基發(fā)生器性質(zhì)考察
            2.6.1 光熱轉(zhuǎn)換效率的考察
            2.6.2 CuS/AIPH@BSA產(chǎn)生自由基能力考察
            2.6.3 電子自旋共振實(shí)驗(yàn)(ESR)
            2.6.4 NIR照射下CuS釋放銅離子考察
            2.6.5 CuS/AIPH@BSA降低GSH水平能力考察
                2.6.5.1 GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
                2.6.5.2 GSH含量測定
        2.7 CuS/AIPH@BSA體外釋放
        2.8 穩(wěn)定性考察
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論
        3.1 AIPH的化學(xué)性質(zhì)
            3.1.1 不同溫度下AIPH產(chǎn)生自由基能力考察
            3.1.2 不同氧含量下AIPH產(chǎn)生自由基能力考察
        3.2 AIPH含量檢測方法
            3.2.1 AIPH檢測波長的確定
            3.2.2 AIPH標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            3.2.3 精密度考察
            3.2.4 回收率考察
        3.3 最佳投料比的確定及包封率的測定
        3.4 CuS/AIPH@BSA的表征結(jié)果
            3.4.1 紫外可見分光光度計(jì)波長掃描
            3.4.2 透射電子顯微鏡
            3.4.3 X射線衍射
            3.4.4 X射線光電子能譜
            3.4.5 粒徑分布及Zeta電位的考察
        3.5 CuS/AIPH@BSA的性質(zhì)考察
            3.5.1 光熱轉(zhuǎn)換效率考察
            3.5.2 CuS/AIPH@BSA產(chǎn)生自由基能力考察
            3.5.3 電子自旋共振實(shí)驗(yàn)(ESR)
            3.5.4 NIR照射下CuS釋放銅離子實(shí)驗(yàn)
            3.5.5 CuS/AIPH@BSA降低GSH水平能力考察
                3.5.5.1 GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
                3.5.5.2 GSH含量測定
        3.6 體外釋放
        3.7 穩(wěn)定性考察
    4 本章小結(jié)
第三章 CuS/AIPH@BSA體外抗腫瘤活性的研究
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
            2.1.2 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.1.3 細(xì)胞傳代
            2.1.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.1.5 細(xì)胞凍存
        2.2 細(xì)胞攝取考察
            2.2.1 CuS/RB@BSA的制備
            2.2.2 共聚焦顯微鏡用于定性細(xì)胞攝取
            2.2.3 流式細(xì)胞儀用于定量細(xì)胞攝取
        2.3 細(xì)胞內(nèi)的光熱轉(zhuǎn)換考察
        2.4 細(xì)胞內(nèi)GSH含量檢測
        2.5 細(xì)胞內(nèi)自由基的測定
            2.5.1 熒光顯微鏡下細(xì)胞內(nèi)自由基的測定
            2.5.2 流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)自由基
        2.6 細(xì)胞毒性考察
        2.7 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        2.8 Calcein-AM/PI試劑盒檢測細(xì)胞活力
        2.9 單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        2.10 Western blot
            2.10.1 蛋白樣品的提取及制備
            2.10.2 實(shí)驗(yàn)步驟
    3 結(jié)果與討論
        3.1 細(xì)胞攝取的測定結(jié)果
            3.1.1 共聚焦顯微鏡下細(xì)胞攝取的測定結(jié)果
            3.1.2 流式細(xì)胞儀細(xì)胞攝取的測定結(jié)果
        3.2 細(xì)胞內(nèi)光熱轉(zhuǎn)換考察
        3.3 細(xì)胞內(nèi)GSH含量檢測
        3.4 細(xì)胞內(nèi)自由基考察
            3.4.1 熒光顯微鏡下細(xì)胞內(nèi)自由基的測定結(jié)果
            3.4.2 流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)自由基結(jié)果
        3.5 細(xì)胞毒性考察
        3.6 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.7 Calcein-AM/PI試劑盒檢測細(xì)胞活力結(jié)果
        3.8 單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.9 Western blot實(shí)驗(yàn)
    4 本章小結(jié)
第四章 CuS/AIPH@BSA體內(nèi)抗腫瘤活性的研究
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 荷瘤小鼠模型的建立
        2.3 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠的體內(nèi)組織分布研究
            2.3.1 CuS/IR783@BSA的制備
            2.3.2 CuS/IR783@BSA在荷瘤小鼠體內(nèi)的組織分布
        2.4 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠體內(nèi)的光熱成像
        2.5 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠體內(nèi)自由基的考察
        2.6 CuS/AIPH@BSA體內(nèi)抗腫瘤活性研究
            2.6.1 腫瘤生長抑制的藥效學(xué)考察
            2.6.2 H&E染色切片分析
            2.6.3 TUNEL凋亡考察
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果與討論
        3.1 CuS/AIPH@BSA在4T1荷瘤小鼠的體內(nèi)組織分布
        3.2 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠體內(nèi)的光熱成像
        3.3 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠體內(nèi)自由基的考察
        3.4 CuS/AIPH@BSA體內(nèi)抗腫瘤活性研究
            3.4.1 荷瘤小鼠相對腫瘤體積變化
            3.4.2 荷瘤小鼠腫瘤組織重量
            3.4.3 荷瘤小鼠腫瘤體重變化
            3.4.4 H&E染色切片分析
            3.4.5 TUNEL凋亡考察
    4 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
致謝



本文編號：3811844