順鉑(Cisplatin)是肺癌臨床治療中較為常用的一種化療藥物,尤其對小細(xì)胞肺癌效果明顯。然而,在一段時間的治療后,由于癌細(xì)胞的產(chǎn)生的耐藥性限制了Cisplatin的應(yīng)用。本研究利用梯度增加Cisplatin濃度的方式誘導(dǎo)得到了3株肺癌細(xì)胞耐藥株—-H446/DDP、H460/DDP及A549/DDP細(xì)胞。在獲得耐藥株后,通過MTT法、CCK8法、流式細(xì)胞術(shù)及Westemblot技術(shù)深入的研究了PI3K/Akt信號通路與肺癌細(xì)胞Cisplatin間的關(guān)系,并從細(xì)胞水平上證明抑制PI3K/Akt信號通路能有效的逆轉(zhuǎn)肺癌細(xì)胞的Cisplatin耐藥。經(jīng)過研究得到以下結(jié)果：1)結(jié)果顯示,3株細(xì)胞均獲得了cisplatin耐藥的特性。cisplatin對H446/DDP. H460/DDP及A549/DDP等3株耐藥細(xì)胞的IC50值分別為27.0±1.3 μmol/L、 53.0±5.2 pmol/L及70.7±3.5μmol/L,而cisplatin對其親本細(xì)胞的IC50值分別為2.4μmol/L、8.8±1.5 μmol/L及11.4±2.8μmol/L,耐藥指數(shù)分別為1I.3、6.1及...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstracts
縮略詞對照表
1 前言
    1.1、肺癌的研究概況
        1.1.1 肺癌
        1.1.2 肺癌治療的研究現(xiàn)狀
            1.1.2.1 外科治療
            1.1.2.2 放射治療
            1.1.2.3 化學(xué)治療
            1.1.2.4 靶向治療
            1.1.2.5 免疫治療
    1.2 PI3K/Akt信號通路與肺癌
        1.2.1 PI3K/Akt信號通路
        1.2.2 PI3K/Akt信號通路與肺癌
        1.2.3 PI3K/Akt通路和肺癌化療耐藥
            1.2.3.1 mTOR的異常激活
            1.2.3.2 Bcl-2家族
            1.2.3.3 IKK/NF-κB通路
            1.2.3.4 PI3K/Akt通路與細(xì)胞周期
    1.3 肺癌治療中的聯(lián)合用藥
        1.3.1 肺癌的Cisplatin耐藥
        1.3.2 肺癌的靶向藥耐藥
        1.3.3 為什么要聯(lián)合用藥
        1.3.4 PI3K/Akt信號通路在聯(lián)合用藥中的應(yīng)用
    1.4 課題的研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 肺癌細(xì)胞株
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 常用培養(yǎng)基及緩沖液的配置
        2.1.4 主要儀器
    2.2 技術(shù)路線及實驗方法
        2.2.1 技術(shù)路線
        2.2.2 實驗方法
            2.2.2.1 肺癌耐藥細(xì)胞系的誘導(dǎo)
            2.2.2.2 Cisplatin耐藥指數(shù)測定
            2.2.2.3 肺癌細(xì)生長曲線的測定
            2.2.2.4 PI3K/Akt通路活性檢測
            2.2.2.5 PI3K抑制劑對Akt活性的影響
            2.2.2.6 PI3K抑制劑逆轉(zhuǎn)細(xì)胞Cisplatin耐藥實驗
            2.2.2.7 caspase-3、caspase-8及caspase-9活性檢測
            2.2.2.8 PI3K抑制劑對PI3K/Akt信號通路的影響
3 結(jié)果與分析
    3.1 肺癌耐藥細(xì)胞系的誘導(dǎo)
        3.1.1 肺癌細(xì)胞Cisplatin耐藥株的誘導(dǎo)
        3.1.2 細(xì)胞的生長曲線
    3.2 肺癌細(xì)胞中的PI3K/Akt信號通路
        3.2.1 Cisplatin對肺癌細(xì)胞中Akt激活的影響
        3.2.2 PI3K抑制劑對肺癌耐藥細(xì)胞中Akt活性的影響
    3.3 PI3K抑制劑逆轉(zhuǎn)細(xì)胞Cisplatin耐藥
        3.3.1 MTT檢測藥物對細(xì)胞增殖的抑制率
        3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物對細(xì)胞凋亡率的影響
        3.3.3 Wortmannin增強caspase家族的活化
    3.4 PI3K/Akt信號通路與細(xì)胞耐藥的分子機制
4 討論
    4.1 肺癌耐藥細(xì)胞株的誘導(dǎo)
    4.2 細(xì)胞的生長速率
    4.3 Cisplatin激活PI3K/Akt信號通路
    4.4 依賴Bcl-2/Bax的線粒體凋亡途徑
    4.5 展望
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述 PI3K/Akt信號通路在肺癌中的研究進展
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3809131