研究背景熱休克蛋白90(Hsp90)是一種高度保守、廣泛分布于真核細(xì)胞的同型二聚體分子伴侶,其對于維持其客戶蛋白的構(gòu)象成熟與穩(wěn)定有重要作用,而Hsp90的客戶蛋白包括了信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子和細(xì)胞周期調(diào)控中的關(guān)鍵分子。目前認(rèn)為,人類的Hsp90包括4種亞型：Hsp90α、Hsp90β、腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白(TRAP)1以及糖相關(guān)蛋白(Grp)94。其中Hsp90α易受熱誘導(dǎo),在腫瘤細(xì)胞增殖中發(fā)揮著重要作用,與生物學(xué)行為、腫瘤發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后有較密切關(guān)系,因此它是本次研究的重點(diǎn)。Hsp90對于細(xì)胞周期的正常進(jìn)程有著十分重要的意義,其中涉及到G2/M期的有周期蛋白依賴性激酶(CDK1)、Myt1、Weel和cyclin B1等。G2/M期阻滯的關(guān)鍵周期蛋白是cyclin B1和CDK1, cyclin B1和CDKl復(fù)合體又稱有絲分裂促進(jìn)因子(MPF),該復(fù)合體的失活可聯(lián)合DNA損傷應(yīng)答反應(yīng)(DDR)導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯。已有研究報道,Hsp90對于cyclin B1在中心體和紡錘體的定位和正確折疊發(fā)揮著重要作用。此外,據(jù)研究表明,Hsp90抑制劑17-AAG可使細(xì)胞阻滯在有絲分裂期并伴隨著cycl...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
    1. 氧化應(yīng)激與食管癌的角化珠形成
    2. 熱休克蛋白90
    3. G2/M期阻滯與cyclin B1
    4. 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)
    5. Hsp90與周期蛋白cyclin B1
    6. 本研究的目的和意義
材料與方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要試劑及配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 藥物處理
        2.3 CCK-8法檢測細(xì)胞活力
        2.4 流式細(xì)胞術(shù)
        2.5 Western blotting檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)
        2.6 熒光定量PCR檢測cyclin B1 mRNA水平
        2.7 ROS探針法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS含量
        2.8 蛋白酶體活性的測定
        2.9 免疫共沉淀
        2.10 細(xì)胞免疫熒光檢測
        2.11 siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.12 免疫組化
    3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1. 用過氧化氫(H₂O₂)建立食管癌細(xì)胞TE-1氧化損傷模型
    2. 500μMH₂O₂誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對TE-1細(xì)胞周期的影響
    3. 500μMH₂O₂誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對TE-1細(xì)胞內(nèi)可溶性Hsp90α的影響
    4. 500μMH₂O₂誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對TE-1糜蛋白酶活性的影響
    5. Hsp90抑制劑17-DMAG與蛋白酶體抑制劑MG132對TE-1細(xì)胞周期的影響
    6. Hsp90抑制劑17-DMAG對TE-1糜蛋白酶活性的影響
    7. cylin B1RNA干擾對H₂O₂導(dǎo)致的cyclin B1蓄積和G2/M期阻滯的影響
    8. Hsp90抑制劑17-DMAG對TE-1細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響
    9. 500μMH₂O₂誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對Hsp90α與cyclin B1相互作用以及對cyclin B1泛素化水平的影響
    10. Hsp90a和cyclin B1在高分化人食管鱗癌組織中不同程度角化狀態(tài)下的表達(dá)特征與相互關(guān)系變化
    11. 人食管鱗癌組織中HO-1和磷酸化H2A.X的表達(dá)情況
討論
結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
中英文縮略詞表
攻讀碩士學(xué)位期間成果
致謝



本文編號：3784852