目的:胃癌(Gastric cancer,GC)是全球范圍內(nèi)嚴重威脅人類健康的癌癥之一,占全球癌癥發(fā)生率的第三位,癌癥相關(guān)死亡原因中位居第二位。盡管外科手術(shù)治療和其它輔助治療手段不斷提高,胃癌的預(yù)后仍不滿意。因此,探尋胃癌發(fā)生發(fā)展中復(fù)雜的分子機制,發(fā)現(xiàn)高效的胃癌早期診斷、預(yù)后評價的分子標志物和尋找靶向治療的位點具有重要的臨床意義。在生物體內(nèi)轉(zhuǎn)運RNA(transfer RNA,tRNA)是細胞蛋白質(zhì)合成機器的一個重要元件,攜帶氨基酸進入核糖體內(nèi)進行蛋白質(zhì)的翻譯。盡管已經(jīng)進行了幾十年深入細致的研究,但對于其功能的認識尚未完全明確,特別是其衍生的小分子RNA片段(tRNA-derived fragment,tRF)作為一種潛在的基因表達調(diào)控分子引起了研究者們的興趣和關(guān)注,其功能正逐漸被人們所認識。越來越多的證據(jù)顯示,來源于tRNA的小分子片段具有重要的生物學(xué)作用并引起國內(nèi)外研究者的極大關(guān)注。但目前在胃癌中的生物學(xué)功能及機制仍不清楚。因此,我們探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的復(fù)雜的分子機制,為胃癌的治療提供新思路和靶標。研究方法:第一部分,我們通過芯片數(shù)據(jù)分析差異表達的tRNA衍生片段,根據(jù)芯片結(jié)果...

【文章頁數(shù)】：142 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 轉(zhuǎn)運RNA衍生片段tRF-3019a在胃癌中表達與臨床意義
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細胞系
            2.1.2 臨床標本采集
            2.1.3 臨床病理特征及隨訪信息收集
            2.1.4 MINTbase數(shù)據(jù)庫
            2.1.5 主要試劑
            2.1.6 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞復(fù)蘇
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 細胞傳代
            2.2.4 細胞凍存
            2.2.5 RNA提取
            2.2.6 RNA的濃度和純度檢測
            2.2.7 反轉(zhuǎn)錄
            2.2.8 加尾反轉(zhuǎn)錄
            2.2.9 實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qRT-PCR)
            2.2.10 瓊脂糖凝膠電泳
            2.2.11 臨床病理特征及預(yù)后隨訪信息的評估
            2.2.12 芯片分析
            2.2.13 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 tRFs&ti RNAs芯片結(jié)果分析
        3.2 tRF-3019a基本信息
        3.3 tRFs&ti RNAs芯片結(jié)果驗證
        3.4 tRF-3019a在胃癌組織中的表達
        3.5 tRF-3019a與胃癌病人病理資料的關(guān)系
        3.6 tRF-3019a與胃癌病人的預(yù)后關(guān)系
            3.6.1 tRF-3019a與總體胃癌病人預(yù)后的關(guān)系
            3.6.2 tRF-3019a在胃癌病人亞組人群中的預(yù)后價值分析
            3.6.3 影響胃癌病人生存的風(fēng)險因素分析
        3.7 tRF-3019a在胃癌中的診斷價值
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 轉(zhuǎn)運RNA衍生片段3019a在胃癌中的功能與機制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞復(fù)蘇
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 細胞傳代
            2.2.4 細胞凍存
            2.2.5 RNA提取
            2.2.6 RNA的濃度和純度檢測
            2.2.7 普通反轉(zhuǎn)錄
            2.2.8 加尾反轉(zhuǎn)錄
            2.2.9 實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qRT-PCR)
            2.2.10 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.11 細胞增殖實驗(CCK-8實驗)
            2.2.12 細胞周期檢測實驗
            2.2.13 細胞凋亡檢測實驗
            2.2.14 Transwell細胞遷移和侵襲實驗
            2.2.15 劃痕實驗
            2.2.16 蛋白提取
            2.2.17 BCA法蛋白濃度測定
            2.2.18 Western blot實驗
            2.2.19 雙熒光素酶實驗
            2.2.20 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗
    3 結(jié)果
        3.1 tRF-3019a模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染效率
        3.2 過表達tRF-3019a促進胃癌細胞增殖
        3.3 抑制tRF-3019a減少胃癌細胞增殖
        3.4 抑制tRF-3019a對胃癌細胞周期的影響
        3.5 抑制tRF-3019a對胃癌細胞凋亡的影響
        3.6 過表達tRF-3019a促進胃癌細胞遷移和侵襲
        3.7 抑制tRF-3019a減少胃癌細胞遷移和侵襲
        3.8 過表達tRF-3019a促進胃癌細胞遷移運動能力
        3.9 抑制tRF-3019a減弱胃癌細胞遷移運動能力
        3.10 生物信息學(xué)預(yù)測tRF-3019a的靶基因
        3.11 驗證tRF-3019a的靶基因FBXO47
        3.12 熒光素酶實驗驗證直接作用關(guān)系
        3.13 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀實驗
        3.14 FBXO47敲除效率
        3.15 沉默F(xiàn)BXO47促進胃癌細胞增殖
        3.16 沉默F(xiàn)BXO47促進胃癌細胞遷移和侵襲
        3.17 沉默F(xiàn)BXO47促進胃癌細胞遷移運動
        3.18 tRF-3019a通過FBXO47抑制胃癌的增殖、遷移和侵襲
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學(xué)期間科研業(yè)績
致謝
個人簡歷



本文編號：3782902