前列腺癌是全球男性第二大常見癌癥。在中國,國家癌癥中心發(fā)布的最新全國癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告明確指出,男性前列腺癌近年來的上升趨勢明顯,已位居男性發(fā)病第六位,在未來的腫瘤防控中應(yīng)該重點(diǎn)關(guān)注。放療具有療效好、適應(yīng)癥廣且并發(fā)癥少等特點(diǎn),是一種最常見的、療效明確的前列腺癌治療方法。然而,大約有三分之一的前列腺癌患者最終會(huì)出現(xiàn)放療后復(fù)發(fā)。因此,如何提高前列腺癌的放射治療效果,有效殺傷腫瘤細(xì)胞,仍然是目前臨床醫(yī)生和科研人員亟待解決的問題。重離子是國際上公認(rèn)的21世紀(jì)最理想的放療用射線,特別適宜于外科手術(shù)、化療、常規(guī)放療無效或易復(fù)發(fā)的難治病例。我們的研究也發(fā)現(xiàn)在前列腺癌細(xì)胞中,碳離子輻照與傳統(tǒng)的X射線輻照相比,表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢,包括造成更嚴(yán)重的DNA損傷,對(duì)細(xì)胞的活力具有更強(qiáng)的抑制作用,導(dǎo)致更高水平的細(xì)胞周期阻滯以及細(xì)胞凋亡等,為碳離子在前列腺癌臨床治療中的應(yīng)用提供了一些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。MicroRNAs(MiRNAs)可以通過調(diào)控多種靶基因的表達(dá),進(jìn)而在細(xì)胞電離輻射應(yīng)答的各個(gè)階段發(fā)揮作用。因此,我們通過mi RNA探針雜交芯片技術(shù)對(duì)碳離子和X射線輻射后前列腺癌細(xì)胞中的miRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),碳離子及X...

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 前列腺癌現(xiàn)狀與放射治療
        1.1.1 前列腺癌現(xiàn)狀
        1.1.2 前列腺癌放射治療進(jìn)展
    1.2 MicroRNA與前列腺癌輻射應(yīng)答
        1.2.1 MicroRNA在前列腺癌中的作用
        1.2.2 MicroRNA在前列腺癌輻射應(yīng)答中的作用
    1.3 MicroRNA與前列腺癌輻射敏感性
        1.3.1 MicroRNA通過DDR調(diào)節(jié)前列腺癌輻射敏感性
        1.3.2 MicroRNA通過細(xì)胞周期檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)前列腺癌輻射敏感性
        1.3.3 MicroRNA通過凋亡和自噬調(diào)節(jié)前列腺癌輻射敏感性
        1.3.4 MicroRNA通過缺氧反應(yīng)調(diào)節(jié)前列腺癌輻射敏感性
        1.3.5 MicroRNA通過EMT調(diào)節(jié)前列腺癌輻射敏感性
        1.3.6 MicroRNA通過腫瘤干細(xì)胞調(diào)節(jié)前列腺癌輻射敏感性
    1.4 MicroRNA作為前列腺癌放射治療的標(biāo)志物與靶點(diǎn)
        1.4.1 MicroRNA作為前列腺癌放射治療的標(biāo)志物
        1.4.2 MicroRNA作為前列腺癌放射治療的靶點(diǎn)
    1.5 本文的研究目的及意義
第二章 重離子及X射線輻照對(duì)前列腺癌細(xì)胞輻射應(yīng)答的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.3.1.2 細(xì)胞傳代
            2.3.1.3 細(xì)胞凍存
        2.3.2 輻照處理
            2.3.2.1 重離子輻照
            2.3.2.2 X射線輻照
        2.3.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 細(xì)胞周期檢測
        2.3.7 Hoechst33258 染色實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 細(xì)胞凋亡檢測
        2.3.9 Western Blot蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 不同前列腺癌細(xì)胞的輻射敏感性具有差異
        2.4.2 碳離子輻照誘導(dǎo)更嚴(yán)重的DNA雙鏈斷裂(DSB)損傷
        2.4.3 碳離子輻照引起DNA的團(tuán)簇性損傷
        2.4.4 碳離子及X射線輻照對(duì)前列腺癌細(xì)胞生存活力的影響
        2.4.5 碳離子及X射線輻照對(duì)前列腺癌細(xì)胞周期分布的影響
        2.4.6 碳離子及X射線輻照對(duì)前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        2.4.7 碳離子及X射線輻照對(duì)前列腺癌細(xì)胞micro RNA表達(dá)的影響
    2.5 討論
第三章 MicroRNA-16-5p通過靶向AKT3 在前列腺癌細(xì)胞中發(fā)揮抑癌作用
    3.1 引言
    3.2 材料與試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 細(xì)胞周期檢測
        3.3.5 細(xì)胞凋亡檢測
        3.3.6 細(xì)胞總RNA提取
        3.3.7 MicroRNA反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcript PCR,RT-PCR)
        3.3.8 MicroRNA實(shí)時(shí)定量q RT-PCR(Quantitative Real Time PCR)
        3.3.9 mRNA反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcript PCR,RT-PCR)
        3.3.10 mRNA實(shí)時(shí)定量q RT-PCR(Quantitative Real Time PCR)
        3.3.11 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        3.3.12 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        3.3.13 Western Blot蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        3.3.14 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.3.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 Mir-16-5p在前列腺癌中低表達(dá)
        3.4.2 過表達(dá)miR-16-5p抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖
        3.4.3 過表達(dá)miR-16-5p抑制前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能力
        3.4.4 過表達(dá)miR-16-5p誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞的凋亡
        3.4.5 過表達(dá)miR-16-5p調(diào)控前列腺癌細(xì)胞的周期分布
        3.4.6 過表達(dá)miR-16-5p對(duì)細(xì)胞遷移的影響
        3.4.7 AKT3是mi R-16-5p的靶基因
        3.4.8 Mi R-16-5p靶向抑制AKT3 的表達(dá)并參與調(diào)控PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路
        3.4.9 運(yùn)用si RNAs敲低AKT3 的表達(dá)
        3.4.10 敲低AKT3抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖能力
        3.4.11 敲低AKT3抑制前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能力
        3.4.12 敲低AKT3影響前列腺癌細(xì)胞的周期分布
        3.4.13 敲低AKT3對(duì)前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響
    3.5 討論
第四章 MicroRNA-16-5p通過調(diào)節(jié)Cyclin D1/E1-p Rb-E2F1信號(hào)通路增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞的輻射敏感性
    4.1 引言
    4.2 材料與試劑
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.2.2 主要試劑
        4.2.3 主要儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 輻照處理
        4.3.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        4.3.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        4.3.5 細(xì)胞周期檢測
        4.3.6 細(xì)胞凋亡檢測
        4.3.7 細(xì)胞總RNA提取
        4.3.8 MicroRNA反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcript PCR,RT-PCR)
        4.3.9 MicroRNA實(shí)時(shí)定量q RT-PCR(Quantitative Real Time PCR)
        4.3.10 m RNA反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcript PCR,RT-PCR)
        4.3.11 m RNA實(shí)時(shí)定量q RT-PCR(Quantitative Real Time PCR)
        4.3.12 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.3.13 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        4.3.14 Western Blot蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        4.3.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 X射線輻照顯著誘導(dǎo)miR-16-5p的表達(dá)
        4.4.2 過表達(dá)miR-16-5p增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞的輻射敏感性
        4.4.3 敲低miR-16-5p增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞的輻射抗性
        4.4.4 過表達(dá)mi R-16-5p誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞G0/G1 期的周期阻滯
        4.4.5 Cyclin D1/E1是mi R-16-5p的靶點(diǎn)
        4.4.6 Mi R-16-5p調(diào)節(jié)Cyclin D1/E1-p Rb-E2F1 信號(hào)通路
    4.5 討論
第五章 前列腺癌細(xì)胞中MicroRNA-16-5p輻射應(yīng)答的機(jī)制研究
    5.1 引言
    5.2 材料與試劑
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5.2.2 主要試劑
        5.2.3 主要儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        5.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.3.2 輻照處理
        5.3.3 細(xì)胞總RNA提取
        5.3.4 MicroRNA反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcript PCR,RT-PCR)
        5.3.5 MicroRNA實(shí)時(shí)定量q RT-PCR(Quantitative Real Time PCR)
        5.3.6 m RNA反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcript PCR,RT-PCR)
        5.3.7 m RNA實(shí)時(shí)定量q RT-PCR(Quantitative Real Time PCR)
        5.3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.3.9 Western Blot蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        5.3.10 免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)
        5.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 X射線輻照對(duì)mi R-16-5p的轉(zhuǎn)錄即pri-mi R-16 的影響
        5.4.2 X射線輻照對(duì)mi R-16-5p的核內(nèi)加工pre-mi R-16 的影響
        5.4.3 X射線輻照對(duì)miR-16-5p的核外加工成熟的影響
        5.4.4 X射線輻照對(duì)mi RNA生物合成關(guān)鍵蛋白的影響
        5.4.5 X射線輻照對(duì)前列腺癌細(xì)胞翻譯后修飾的影響
        5.4.6 X射線輻照后p53與mi RNA加工蛋白Drosha結(jié)合
        5.4.7 構(gòu)建p53敲除的穩(wěn)定細(xì)胞株
        5.4.8 敲除p53影響miR-16-5p的輻射誘導(dǎo)表達(dá)
    5.5 討論
第六章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
    作者簡歷
    獲獎(jiǎng)情況
    參加的研究項(xiàng)目
    已發(fā)表(或正式接受)的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3776672