目的:肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的癌癥,患者的5年生存率僅15%-20%,主要分為小細胞和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。其中,肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是NSCLC的一種主要亞型。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類長度超過200個核苷酸的功能性RNA分子的總稱,它們不編碼蛋白質,但能調控基因表達,進而影響多種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。lncRNA MYU(c-Myc-upregulated lncRNA)與結腸癌和前列腺癌發(fā)生發(fā)展有關,但其在NSCLC中的功能及作用機制仍不清楚。本論文旨在研究MYU在LUAD中的功能和可能的作用機制。方法:通過下載腫瘤基因圖譜數據庫(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中的LUAD臨床組織樣本數據、采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應,檢測收集到的24例LUAD患者的腫瘤組織及20例癌旁非腫瘤組織,以及人LUAD細胞系與正常人支氣管上皮細胞系中MYU的表達量,考察MYU的表達與LUAD的臨床相關性。采用MTT法、克隆...

【文章頁數】：95 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 肺癌簡介
        1.1.1 肺癌概況
        1.1.2 肺癌的治療方法
    1.2 長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)
        1.2.1 非編碼RNA及分類
        1.2.2 lncRNA的分類及特性
        1.2.3 lncRNA分子的功能
    1.3 lncRNA與癌癥
    1.4 lncRNA與肺癌
        1.4.1 lncRNA作為非小細胞肺癌的生物標志物
        1.4.2 lncRNA調控非小細胞肺癌的生物學行為
    1.5 lncRNA MYU
    1.6 本課題的研究內容及意義
第二章 MYU在肺腺癌中的表達及相關性研究
    2.1 實驗儀器、材料與試劑
        2.1.1 樣本收集
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 材料與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 生物信息學分析
        2.2.2 qRT-PCR檢測MYU在肺腺癌組織中的表達量
        2.2.3分子生物學實驗
        2.2.4 細胞復蘇、培養(yǎng)
        2.2.5 細胞傳代
    2.3 實驗結果
        2.3.1 MYU在肺腺癌臨床組織樣本統(tǒng)計數據中高表達
        2.3.2 MYU在肺腺癌組織及細胞中含量異常增高
        2.3.3 組織樣本情況
    2.4 討論與小結
第三章 敲減MYU對肺腺癌細胞增殖、遷移及周期凋亡的影響
    3.1 實驗儀器、材料與試劑
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 材料與試劑
    3.2 方法
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 細胞復蘇、傳代
        3.2.3 siRNA序列設計與合成
        3.2.4 細胞轉染及qRT-PCR實驗
        3.2.5 MTT實驗
        3.2.6 克隆形成實驗
        3.2.7 BrdU實驗
        3.2.8 細胞劃痕實驗
        3.2.9 細胞周期實驗
        3.2.10 細胞凋亡實驗
        3.2.11 Western blot實驗
        3.2.12 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 敲減MYU可抑制肺腺癌細胞增殖能力
        3.3.2 敲減MYU可抑制肺腺癌細胞遷移
        3.3.3 敲減MYU可引起細胞周期阻滯并促進細胞凋亡
        3.3.4 敲減MYU通過調控c-Myc及其周期相關的下游效應分子的表達誘導LUAD細胞周期阻滯
    3.4 討論與小結
第四章 MYU過表達對肺腺癌細胞增殖及遷移的影響
    4.1 實驗儀器、材料與試劑
        4.1.1 實驗儀器
        4.1.2 材料與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 目的基因的獲取
        4.2.2 過表達載體的構建
        4.2.3 MYU過表達對細胞存活率及增殖能力的影響
        4.2.4 統(tǒng)計學分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 MYU在肺腺癌細胞中成功過表達
        4.3.2 MYU過表達促進肺腺癌細胞的增殖能力
        4.3.3 MYU過表達促進肺腺癌細胞的遷移能力
    4.4 討論與小結
第五章 敲減MYU對小鼠體內腫瘤的影響
    5.1 實驗儀器、材料與試劑
        5.1.1 實驗儀器
        5.1.2 材料與試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 試劑配制
        5.2.2 小鼠腫瘤模型的建立
        5.2.3 制作石蠟切片
        5.2.4 免疫組織化學(Immunohistochemistry,IHC)
        5.2.5 MYU定位
        5.2.6 統(tǒng)計學分析
    5.3 實驗結果
        5.3.1 敲減MYU抑制了PC9 細胞在裸鼠體內的腫瘤生長
        5.3.2 敲減MYU調控c-Myc及其周期相關的下游效應分子CDK6和p27蛋白的表達
        5.3.3 MYU在肺腺癌細胞中主要定位于細胞核
    5.4 討論與小結
第六章 總結與展望
    6.1 工作總結
    6.2 工作展望
參考文獻
致謝
在學期間發(fā)表的學術論文及其他科研成果



本文編號：3764252