目的:肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的癌癥,患者的5年生存率僅15%-20%,主要分為小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。其中,肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是NSCLC的一種主要亞型。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸的功能性RNA分子的總稱,它們不編碼蛋白質(zhì),但能調(diào)控基因表達(dá),進(jìn)而影響多種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。lncRNA MYU(c-Myc-upregulated lncRNA)與結(jié)腸癌和前列腺癌發(fā)生發(fā)展有關(guān),但其在NSCLC中的功能及作用機(jī)制仍不清楚。本論文旨在研究MYU在LUAD中的功能和可能的作用機(jī)制。方法:通過(guò)下載腫瘤基因圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中的LUAD臨床組織樣本數(shù)據(jù)、采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),檢測(cè)收集到的24例LUAD患者的腫瘤組織及20例癌旁非腫瘤組織,以及人LUAD細(xì)胞系與正常人支氣管上皮細(xì)胞系中MYU的表達(dá)量,考察MYU的表達(dá)與LUAD的臨床相關(guān)性。采用MTT法、克隆...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 肺癌簡(jiǎn)介
        1.1.1 肺癌概況
        1.1.2 肺癌的治療方法
    1.2 長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)
        1.2.1 非編碼RNA及分類
        1.2.2 lncRNA的分類及特性
        1.2.3 lncRNA分子的功能
    1.3 lncRNA與癌癥
    1.4 lncRNA與肺癌
        1.4.1 lncRNA作為非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物
        1.4.2 lncRNA調(diào)控非小細(xì)胞肺癌的生物學(xué)行為
    1.5 lncRNA MYU
    1.6 本課題的研究?jī)?nèi)容及意義
第二章 MYU在肺腺癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑
        2.1.1 樣本收集
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 材料與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 生物信息學(xué)分析
        2.2.2 qRT-PCR檢測(cè)MYU在肺腺癌組織中的表達(dá)量
        2.2.3分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)
        2.2.5 細(xì)胞傳代
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 MYU在肺腺癌臨床組織樣本統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)中高表達(dá)
        2.3.2 MYU在肺腺癌組織及細(xì)胞中含量異常增高
        2.3.3 組織樣本情況
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 敲減MYU對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移及周期凋亡的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.2 材料與試劑
    3.2 方法
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代
        3.2.3 siRNA序列設(shè)計(jì)與合成
        3.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 BrdU實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.2.9 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        3.2.10 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        3.2.11 Western blot實(shí)驗(yàn)
        3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 敲減MYU可抑制肺腺癌細(xì)胞增殖能力
        3.3.2 敲減MYU可抑制肺腺癌細(xì)胞遷移
        3.3.3 敲減MYU可引起細(xì)胞周期阻滯并促進(jìn)細(xì)胞凋亡
        3.3.4 敲減MYU通過(guò)調(diào)控c-Myc及其周期相關(guān)的下游效應(yīng)分子的表達(dá)誘導(dǎo)LUAD細(xì)胞周期阻滯
    3.4 討論與小結(jié)
第四章 MYU過(guò)表達(dá)對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖及遷移的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.2 材料與試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 目的基因的獲取
        4.2.2 過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.3 MYU過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞存活率及增殖能力的影響
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 MYU在肺腺癌細(xì)胞中成功過(guò)表達(dá)
        4.3.2 MYU過(guò)表達(dá)促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖能力
        4.3.3 MYU過(guò)表達(dá)促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的遷移能力
    4.4 討論與小結(jié)
第五章 敲減MYU對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤的影響
    5.1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.2 材料與試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 試劑配制
        5.2.2 小鼠腫瘤模型的建立
        5.2.3 制作石蠟切片
        5.2.4 免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)
        5.2.5 MYU定位
        5.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 敲減MYU抑制了PC9 細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)
        5.3.2 敲減MYU調(diào)控c-Myc及其周期相關(guān)的下游效應(yīng)分子CDK6和p27蛋白的表達(dá)
        5.3.3 MYU在肺腺癌細(xì)胞中主要定位于細(xì)胞核
    5.4 討論與小結(jié)
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 工作總結(jié)
    6.2 工作展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他科研成果



本文編號(hào)：3764252