本文關(guān)鍵詞：攜帶ING4和GMCSF的雙基因溶瘤痘苗病毒體外治療癌癥的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Ⅰ.隨著空氣污染加劇促使環(huán)境的不斷惡化,以及飲食、壓力等多方面對機體的威脅,現(xiàn)在,癌癥已經(jīng)成為人類的頭號殺手,是威脅人類健康的最主要疾病。由于治療癌癥的傳統(tǒng)療法受到多種原因限制,治療效果并不理想并且毒副作用明顯。隨著醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展,治療癌癥的手段不斷探索與更新,腫瘤的生物學(xué)療法給患者帶來了曙光。結(jié)合基因治療和病毒治療兩種癌癥療法的優(yōu)勢而提出的“癌癥的靶向基因-病毒治療”策略對選擇病毒載體和治療基因的活性提出了新的靶標。基于此策略,我們利用安全性高、復(fù)制快和包裝容量大等特點的痘苗病毒攜帶ING4和GM-CSF構(gòu)建了一種新的癌癥靶向基因-病毒。已知,ING4基因廣泛參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,其抑癌功能包括抑制HIF-1的活性、增強P53基因的活性,從而促進腫瘤細胞死亡;GM-CSF是一種粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子,能夠激活機體的免疫系統(tǒng)來增強抗腫瘤效果。本研究以痘苗病毒為載體,使其攜帶ING4或GM-CSF兩個治療基因,從而包裝出安全性高且殺傷效果顯著的單基因溶瘤痘苗病毒OncoPox-ING4和Onco PoxGMCSF。重組痘苗病毒的構(gòu)建將ING4和GMCSF兩個基因插入到痘苗病毒pCB質(zhì)粒載體的TK區(qū),隨后病毒和質(zhì)粒在細胞內(nèi)發(fā)生同源重組,目的基因?qū)迦氲揭吧投幻绮《净蚪M,從而獲得攜帶有雙基因的OncoPox-ING4和OncoPoxGMCSF溶瘤痘苗病毒。構(gòu)建的重組痘苗病毒OncoPox-ING4和OncoPox-GMCSF經(jīng)大量擴增、純化和滴度測定后感染細胞,經(jīng)Western blot檢測出有目的基因的蛋白表達。接著用重組痘苗病毒來殺傷肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、胰腺癌和腦膠質(zhì)瘤等細胞,通過觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化、結(jié)晶紫染色分析病理學(xué)效應(yīng)、Hoechst檢測凋亡誘導(dǎo)作用、MTT試驗檢測細胞的存活率以及Western Blot檢測相關(guān)蛋白的表達,結(jié)果表明溶瘤痘病毒OncoPox-ING4對幾種癌細胞的誘導(dǎo)凋亡效果最顯著,同時也驗證了其可能是通過抑制NF-kB信號通路中的某一個環(huán)節(jié)來抑制腫瘤生長。因此,痘病毒OncoPox-ING4對殺傷癌細胞具有廣譜性且抗癌作用顯著,驗證了“靶向基因病毒治療策略”的合理性,為治療癌癥提供了新的方法。Ⅱ.目前,溶瘤腺病毒用于治療癌癥是一個熱點。本課題研究目的是檢測溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac聯(lián)合SNS-032治療胰腺癌的協(xié)同作用。體外試驗表明了SNS-032能夠增強ZD55-TRAIL-IETD-Smac對胰腺癌的殺傷,誘導(dǎo)胰腺癌細胞的凋亡。Western blot試驗表明SNS-032通過影響抗凋亡蛋白如CDK-2、CDK-9、Mcl-1、XIAP和Bcl-2等增強溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac對胰腺癌細胞凋亡作用。體內(nèi)試驗也證明了SNS-032能夠促進ZD55-TRAIL-IETD-Smac對胰腺癌的殺傷。本研究分別通過體內(nèi)和體外試驗證明,SNS-032能夠加強溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac對胰腺癌的殺傷,使其凋亡。試驗數(shù)據(jù)表明,聯(lián)合SNS-032和ZD55-TRAIL-IETD-Smac對于胰腺癌是個合理的治療方法。
【關(guān)鍵詞】：溶瘤痘病毒 溶瘤腺病毒 ING4 GMCSF SNS-032 癌癥
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞8-11
• 第一章 攜帶ING4和GM-CSF雙基因的溶瘤痘病毒體外治療癌癥的研究11-39
• 1.1 引言11-16
• 1.1.1 癌癥治療的研究現(xiàn)狀11-12
• 1.1.2 癌癥的基因治療12
• 1.1.3 癌癥的靶向-基因病毒治療12-13
• 1.1.4 痘苗病毒包裝的介紹13-16
• 1.2 試驗材料與方法16-29
• 1.2.1 試驗材料16-19
• 1.2.2 試驗方法19-29
• 1.3 試驗結(jié)果29-37
• 1.3.1 重組痘苗病毒目的基因的鑒定29-30
• 1.3.2 重組痘苗病毒目的基因和野毒的鑒定30-31
• 1.3.3 蛋白水平鑒定溶瘤痘苗病毒OncoPox-ING4和OncoPox-GMCSF的蛋白表達31-32
• 1.3.4 細胞形態(tài)學(xué)觀察32
• 1.3.5 結(jié)晶紫染色分析重組痘苗病毒對PANC-1 細胞的病理學(xué)效應(yīng)32-33
• 1.3.6 Hoechst33342檢測重組溶瘤痘苗病毒對BxPC-3 的凋亡誘導(dǎo)作用33-34
• 1.3.7 MTT法檢測重組痘病毒對癌細胞的殺傷效果34
• 1.3.8 Western Blot分析表明溶瘤痘病毒OncoPox-ING4可能通過抑制NF-kB信號通路抑制腫瘤生長34-37
• 1.4 討論37-38
• 1.5 結(jié)論38-39
• 第二章 CDK抑制劑SNS-032聯(lián)合溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac協(xié)同抑制胰腺癌的研究39-52
• 2.1 引言39-41
• 2.2 試驗材料41
• 2.2.1 細胞和試劑41
• 2.2.2 病毒41
• 2.3 試驗方法41-43
• 2.3.1 腺病毒ZD55- TRAIL-IETD-Smac的大量純化及病毒滴度測定41
• 2.3.2 MTT檢測細胞存活率41-42
• 2.3.3 Hoechst3334染色觀察腫瘤細胞的凋亡42
• 2.3.4 流式分析細胞凋亡42
• 2.3.5 Western blot分析42-43
• 2.3.6 動物試驗43
• 2.3.7 統(tǒng)計分析43
• 2.4 試驗結(jié)果43-50
• 2.4.1 SNS-032增強溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac對胰腺癌的生長抑制43-46
• 2.4.2 SNS-032增強ZD55-TRAIL-IETD-Smac誘導(dǎo)的胰腺癌細胞凋亡46-48
• 2.4.3 SNS-032聯(lián)合ZD55-TRAIL-IETD-Smac對胰腺癌細胞凋亡有協(xié)同作用48-49
• 2.4.4 SNS-032協(xié)同ZD55-TRAIL-IETD-Smac體內(nèi)抑制胰腺癌細胞的增殖49
• 2.4.5 SNS-032協(xié)同ZD55-TRAIL-IETD-Smac體內(nèi)抗癌效果顯著49-50
• 2.5 討論50-51
• 2.6 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-58
• 研究生期間的研究成果58-59
• 致謝59

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊潔;痘苗病毒的結(jié)構(gòu)特點及應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊;1996年02期

2 ;痘苗病毒治療癌癥效果好[J];大眾科技;2008年02期

3 許滌沙;劉大衛(wèi);;與接種痘苗士兵發(fā)生性接觸后致痘苗病毒感染1例報告[J];中國疫苗和免疫;2010年05期

4 朱蓉;黃維金;嚴子林;溫智恒;王文波;周艷;王佑春;俞永新;;痘苗病毒弱毒株廣9株對動物的致病力研究[J];中國病毒病雜志;2011年03期

5 郝明強;田厚文;;溶瘤痘苗病毒的研究進展[J];生物技術(shù)通訊;2012年03期

6 劉強;齊香榮;朱蓉;黃維金;阮力;李保衛(wèi);邵榮光;王佑春;;利用活體成像術(shù)對痘苗病毒小鼠體內(nèi)生物分布和表達的研究[J];中國病毒病雜志;2013年04期

7 ;為什么種痘 后不發(fā)痘?[J];赤腳醫(yī)生雜志;1973年03期

8 方繼明;痘苗病毒作為真核載體的研究現(xiàn)狀及展望[J];病毒學(xué)報;1986年01期

9 宇文鎬,侯云德,黎志良;利用大腸桿菌質(zhì)粒檢測與分離痘苗病毒的啟動子[J];病毒學(xué)報;1987年03期

10 郭斐,陸柔劍,許洪林,李軍,張穎妹,馬大龍,阮力;表達粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的非復(fù)制痘苗病毒的抗腫瘤效果[J];病毒學(xué)報;2001年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 闞式紱;金寧一;李霄;劉妍;高鵬;徐曉紅;賈鵬;溫中梅;;實驗室內(nèi)痘苗病毒的危險性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

2 俞永新;;痘苗病毒廣9株作為重組疫苗載體的研究[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

3 朱蓉;黃維金;王佑春;俞永新;;痘苗病毒弱毒株廣9株的免疫原性分析[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

4 丁明孝;于文斗;于勤;翟中和;;痘苗病毒復(fù)制與中間纖維的關(guān)系[A];海峽兩岸電子顯微學(xué)研討會論文專集[C];1992年

5 杜壽文;李昌;王宇航;劉存霞;任大勇;李沂;秦艷青;張軒源;金寧一;;新型痘苗病毒穿梭載體的構(gòu)建及評價[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會論文集[C];2012年

6 王宇航;李霄;闞式紱;王卓越;齊延新;杜壽文;金寧一;;E3L缺失型天壇株痘苗病毒減毒載體的構(gòu)建及篩選[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 朱立新;劉晶;李迎春;孔玉英;STAIB Caroline;SUTTER Gerd;汪垣;李光地;;HCV E2的復(fù)雜糖化依賴于全長核心蛋白序列[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 記者 常麗君;痘苗病毒治療癌癥效果好[N];科技日報;2007年

2 趙立;痘苗病毒有助于治療癌癥[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 杜壽文;干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白抑制痘苗病毒作用及其機制研究[D];吉林大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 葛云;攜帶ING4和GMCSF的雙基因溶瘤痘苗病毒體外治療癌癥的研究[D];浙江理工大學(xué);2016年

2 盛媛;基因缺失天壇株痘苗病毒弱毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 王宇航;TE3L/TE4L缺失型天壇株痘苗病毒的構(gòu)建及免疫原性分析[D];吉林大學(xué);2012年

4 杜壽文;HIV復(fù)合表位核酸和痘苗病毒載體疫苗構(gòu)建及免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2012年

5 段雪梅;溶瘤痘苗病毒攜帶SPL/PPA凝集素基因的抗癌研究[D];浙江理工大學(xué);2015年

6 陳勇毅;攜帶TRAIL-IETD-IL24雙基因的溶瘤痘苗病毒靶向治療癌癥的研究[D];浙江理工大學(xué);2013年

7 王金禮;新型腫瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VV_△TK_△N1L-RFP對小鼠4T1乳腺癌模型的治療作用[D];鄭州大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：攜帶ING4和GMCSF的雙基因溶瘤痘苗病毒體外治療癌癥的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：375862