本文關(guān)鍵詞：攜帶ING4和GMCSF的雙基因溶瘤痘苗病毒體外治療癌癥的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Ⅰ.隨著空氣污染加劇促使環(huán)境的不斷惡化,以及飲食、壓力等多方面對(duì)機(jī)體的威脅,現(xiàn)在,癌癥已經(jīng)成為人類的頭號(hào)殺手,是威脅人類健康的最主要疾病。由于治療癌癥的傳統(tǒng)療法受到多種原因限制,治療效果并不理想并且毒副作用明顯。隨著醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展,治療癌癥的手段不斷探索與更新,腫瘤的生物學(xué)療法給患者帶來了曙光。結(jié)合基因治療和病毒治療兩種癌癥療法的優(yōu)勢(shì)而提出的“癌癥的靶向基因-病毒治療”策略對(duì)選擇病毒載體和治療基因的活性提出了新的靶標(biāo)�；诖瞬呗�,我們利用安全性高、復(fù)制快和包裝容量大等特點(diǎn)的痘苗病毒攜帶ING4和GM-CSF構(gòu)建了一種新的癌癥靶向基因-病毒。已知,ING4基因廣泛參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,其抑癌功能包括抑制HIF-1的活性、增強(qiáng)P53基因的活性,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡;GM-CSF是一種粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子,能夠激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)來增強(qiáng)抗腫瘤效果。本研究以痘苗病毒為載體,使其攜帶ING4或GM-CSF兩個(gè)治療基因,從而包裝出安全性高且殺傷效果顯著的單基因溶瘤痘苗病毒OncoPox-ING4和Onco PoxGMCSF。重組痘苗病毒的構(gòu)建將ING4和GMCSF兩個(gè)基因插入到痘苗病毒pCB質(zhì)粒載體的TK區(qū),隨后病毒和質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生同源重組,目的基因?qū)?huì)插入到野生型痘苗病毒基因組,從而獲得攜帶有雙基因的OncoPox-ING4和OncoPoxGMCSF溶瘤痘苗病毒。構(gòu)建的重組痘苗病毒OncoPox-ING4和OncoPox-GMCSF經(jīng)大量擴(kuò)增、純化和滴度測(cè)定后感染細(xì)胞,經(jīng)Western blot檢測(cè)出有目的基因的蛋白表達(dá)。接著用重組痘苗病毒來殺傷肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、胰腺癌和腦膠質(zhì)瘤等細(xì)胞,通過觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、結(jié)晶紫染色分析病理學(xué)效應(yīng)、Hoechst檢測(cè)凋亡誘導(dǎo)作用、MTT試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的存活率以及Western Blot檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá),結(jié)果表明溶瘤痘病毒OncoPox-ING4對(duì)幾種癌細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡效果最顯著,同時(shí)也驗(yàn)證了其可能是通過抑制NF-kB信號(hào)通路中的某一個(gè)環(huán)節(jié)來抑制腫瘤生長(zhǎng)。因此,痘病毒OncoPox-ING4對(duì)殺傷癌細(xì)胞具有廣譜性且抗癌作用顯著,驗(yàn)證了“靶向基因病毒治療策略”的合理性,為治療癌癥提供了新的方法。Ⅱ.目前,溶瘤腺病毒用于治療癌癥是一個(gè)熱點(diǎn)。本課題研究目的是檢測(cè)溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac聯(lián)合SNS-032治療胰腺癌的協(xié)同作用。體外試驗(yàn)表明了SNS-032能夠增強(qiáng)ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)胰腺癌的殺傷,誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞的凋亡。Western blot試驗(yàn)表明SNS-032通過影響抗凋亡蛋白如CDK-2、CDK-9、Mcl-1、XIAP和Bcl-2等增強(qiáng)溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡作用。體內(nèi)試驗(yàn)也證明了SNS-032能夠促進(jìn)ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)胰腺癌的殺傷。本研究分別通過體內(nèi)和體外試驗(yàn)證明,SNS-032能夠加強(qiáng)溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)胰腺癌的殺傷,使其凋亡。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,聯(lián)合SNS-032和ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)于胰腺癌是個(gè)合理的治療方法。
【關(guān)鍵詞】：溶瘤痘病毒 溶瘤腺病毒 ING4 GMCSF SNS-032 癌癥
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞8-11
• 第一章 攜帶ING4和GM-CSF雙基因的溶瘤痘病毒體外治療癌癥的研究11-39
• 1.1 引言11-16
• 1.1.1 癌癥治療的研究現(xiàn)狀11-12
• 1.1.2 癌癥的基因治療12
• 1.1.3 癌癥的靶向-基因病毒治療12-13
• 1.1.4 痘苗病毒包裝的介紹13-16
• 1.2 試驗(yàn)材料與方法16-29
• 1.2.1 試驗(yàn)材料16-19
• 1.2.2 試驗(yàn)方法19-29
• 1.3 試驗(yàn)結(jié)果29-37
• 1.3.1 重組痘苗病毒目的基因的鑒定29-30
• 1.3.2 重組痘苗病毒目的基因和野毒的鑒定30-31
• 1.3.3 蛋白水平鑒定溶瘤痘苗病毒OncoPox-ING4和OncoPox-GMCSF的蛋白表達(dá)31-32
• 1.3.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察32
• 1.3.5 結(jié)晶紫染色分析重組痘苗病毒對(duì)PANC-1 細(xì)胞的病理學(xué)效應(yīng)32-33
• 1.3.6 Hoechst33342檢測(cè)重組溶瘤痘苗病毒對(duì)BxPC-3 的凋亡誘導(dǎo)作用33-34
• 1.3.7 MTT法檢測(cè)重組痘病毒對(duì)癌細(xì)胞的殺傷效果34
• 1.3.8 Western Blot分析表明溶瘤痘病毒OncoPox-ING4可能通過抑制NF-kB信號(hào)通路抑制腫瘤生長(zhǎng)34-37
• 1.4 討論37-38
• 1.5 結(jié)論38-39
• 第二章 CDK抑制劑SNS-032聯(lián)合溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac協(xié)同抑制胰腺癌的研究39-52
• 2.1 引言39-41
• 2.2 試驗(yàn)材料41
• 2.2.1 細(xì)胞和試劑41
• 2.2.2 病毒41
• 2.3 試驗(yàn)方法41-43
• 2.3.1 腺病毒ZD55- TRAIL-IETD-Smac的大量純化及病毒滴度測(cè)定41
• 2.3.2 MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率41-42
• 2.3.3 Hoechst3334染色觀察腫瘤細(xì)胞的凋亡42
• 2.3.4 流式分析細(xì)胞凋亡42
• 2.3.5 Western blot分析42-43
• 2.3.6 動(dòng)物試驗(yàn)43
• 2.3.7 統(tǒng)計(jì)分析43
• 2.4 試驗(yàn)結(jié)果43-50
• 2.4.1 SNS-032增強(qiáng)溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)胰腺癌的生長(zhǎng)抑制43-46
• 2.4.2 SNS-032增強(qiáng)ZD55-TRAIL-IETD-Smac誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞凋亡46-48
• 2.4.3 SNS-032聯(lián)合ZD55-TRAIL-IETD-Smac對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡有協(xié)同作用48-49
• 2.4.4 SNS-032協(xié)同ZD55-TRAIL-IETD-Smac體內(nèi)抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖49
• 2.4.5 SNS-032協(xié)同ZD55-TRAIL-IETD-Smac體內(nèi)抗癌效果顯著49-50
• 2.5 討論50-51
• 2.6 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 研究生期間的研究成果58-59
• 致謝59

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