目的通過構(gòu)建Twist基因啟動子區(qū)熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)質(zhì)粒,將構(gòu)建成功的質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和人胚腎細(xì)胞株HEK293,用不同濃度的苯并(a)芘處理后,檢測熒光素酶活性,探討苯并(a)芘誘導(dǎo)Twist基因啟動子區(qū)驅(qū)動的報(bào)告基因表達(dá)影響,為苯并(a)芘暴露誘導(dǎo)Twist基因表達(dá)促進(jìn)肺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制理解提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.利用分子克隆技術(shù)根據(jù)NCBI(https://www.ncbi.nim.nih.gov/)網(wǎng)站最新公布的Twist(human)基因啟動子區(qū)序列,設(shè)計(jì)帶有KpnI和XhoI酶切位點(diǎn)的引物,通過PCR技術(shù)擴(kuò)增長度為451 bp的啟動子區(qū)序列,與KpnI和XhoI兩種核酸限制性內(nèi)切酶處理的熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-basic連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒,命名為pGL3-TWIST-promoter-luc。通過菌液PCR和重組質(zhì)粒雙酶切及測序鑒定pGL3-TWIST-promoter-luc重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功。2.利用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù),將構(gòu)建成功的pGL3-TWIST-promoter-luc重組質(zhì)粒和內(nèi)參質(zhì)粒分別瞬時轉(zhuǎn)染至非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和人胚腎細(xì)胞...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
1 引言
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)用主要試劑配制方法
        2.1.4 主要儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Twist基因啟動子熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建
        2.2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.2.3 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
        2.2.4 熒光素酶活性報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)法檢測苯并(a)芘對Twist基因啟動子的影響
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 Twist基因啟動子PCR擴(kuò)增結(jié)果
    3.2 PCR產(chǎn)物與pGL3-basic酶切結(jié)果
    3.3 重組載體的篩選及菌液PCR鑒定
    3.4 重組載體的雙酶切鑒定結(jié)果
    3.5 Twist基因啟動子測序結(jié)果
    3.6 熒光素酶活性測定
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 Twist基因與肺癌關(guān)系研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝



本文編號：3756353