第一部分Ski抑制TGF-β/SMAD經(jīng)典信號通路誘導的非小細胞肺癌細胞上皮-間充質轉化和侵襲背景：上皮-間充質轉化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是腫瘤轉移過程中發(fā)生的一項關鍵事件。在此過程中,伴隨著上皮細胞分子標志物E-cadherin的表達減少和間質細胞分子標記物N-cadherin的表達增多,腫瘤細胞向間充質細胞形態(tài)發(fā)生變化,能動性和侵襲能力顯著增強,具有明顯的間充質細胞的特性。在多種癌癥中,TGF-p信號通路都是一個誘發(fā)EMT的關鍵因素。Ski是TGF-β信號通路的一個重要的負調控因子,其可以與SMAD蛋白相互作用來抑制TGF-β信號通路。盡管越來越多的研究證實Ski在人類多種癌癥中扮演著癌基因或抑癌基因的雙重角色,但是在非小細胞肺癌中,Ski能否影響TGF-β誘導的EMT和腫瘤細胞侵潤及其分子機制還沒有研究進行詳細的闡述。方法：(1)檢測Ski在不同非小細胞肺癌細胞株和組織中的表達；(2)構建Ski過表達和敲弱的A549穩(wěn)轉細胞株；(3)在穩(wěn)轉細胞株中外源加入TGF-β1,觀察細胞形態(tài),Western blot檢測EMT分子標...

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【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 Ski基因抑制TGF-β/SMAD信號通路誘導的非小細胞肺癌細胞上皮-間充質轉化和侵襲
    一 引言
    二、材料和方法
        (一) 材料
        (二) 方法和步驟
            (一) 細胞培養(yǎng)
            (二) Western Blot
            (三) Real Time PCR
            (四) PAI-1基因啟動子區(qū)熒光素酶報告載體的構建及活性檢測
            (五) Ski基因過表達慢病毒質粒的構建
            (六) Ski沉默的sh-Ski慢病毒表達質粒的構建
            (七) 慢病毒的包裝,感染以及穩(wěn)轉細胞系的篩選
            (八) Transwell細胞侵襲實驗
            (九) 肺癌組織樣本中Ski的表達分析
            (十) 統(tǒng)計分析
    三 結果
        (一). Ski在非小細胞肺癌細胞株和非小細胞肺癌組織中的表達
        (二). Ski抑制TGF-β1誘導的EMT
        (三). Ski抑制TGF-β1驅動的轉錄應答
        (四). Ski抑制TGF-β1誘導的NSCLC細胞侵襲
        (五). p-SMAD3參與并影響TGF-β1誘導的EMT和細胞侵襲
        (六). Ski抑制TGF-β1誘導的EMT和細胞侵襲主要依賴于經(jīng)典的SMAD通路
    四 討論
    五. 參考文獻
第二部分 非小細胞肺癌中TGF-β調控N-cadherin表達的分子機制研究
    一、前言
    二、材料和方法
        (一) 材料
        (二) 方法
    三 結果
        (一) 在NSCLC細胞中,TGF-β1能夠顯著上調N-cadheirn的表達
        (二) .CDH2基因啟動子區(qū)存在著TGF-β的應答效應元件,該順時作用元件參與并影響TGF-β對CDH2基因的表達調控
        (三) TGF-β激活的SMAD3/4轉錄復合體能夠直接靶向結合到CDH2的啟動子區(qū)并且影響其轉錄活性
        (四) 在NSCLC細胞中,SMAD3/4復合體正向調控TGF-β1誘導的N-cadheim的表達
        (五) 在NSCLC組織里,CDH2的表達與SMAD3和SMAD4的表達呈正相關
    四 討論
    五 參考文獻
全文總結
綜述 TGF-β信號通路介導的細胞上皮-間充質轉化的研究進展
    參考文獻
攻讀博士學位期間發(fā)表論文
附錄：縮略詞表及注釋
致謝



本文編號：3756280