第一部分Ski抑制TGF-β/SMAD經(jīng)典信號(hào)通路誘導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲背景：上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)生的一項(xiàng)關(guān)鍵事件。在此過(guò)程中,伴隨著上皮細(xì)胞分子標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)減少和間質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)記物N-cadherin的表達(dá)增多,腫瘤細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,能動(dòng)性和侵襲能力顯著增強(qiáng),具有明顯的間充質(zhì)細(xì)胞的特性。在多種癌癥中,TGF-p信號(hào)通路都是一個(gè)誘發(fā)EMT的關(guān)鍵因素。Ski是TGF-β信號(hào)通路的一個(gè)重要的負(fù)調(diào)控因子,其可以與SMAD蛋白相互作用來(lái)抑制TGF-β信號(hào)通路。盡管越來(lái)越多的研究證實(shí)Ski在人類(lèi)多種癌癥中扮演著癌基因或抑癌基因的雙重角色,但是在非小細(xì)胞肺癌中,Ski能否影響TGF-β誘導(dǎo)的EMT和腫瘤細(xì)胞侵潤(rùn)及其分子機(jī)制還沒(méi)有研究進(jìn)行詳細(xì)的闡述。方法：(1)檢測(cè)Ski在不同非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株和組織中的表達(dá)；(2)構(gòu)建Ski過(guò)表達(dá)和敲弱的A549穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；(3)在穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中外源加入TGF-β1,觀察細(xì)胞形態(tài),Western blot檢測(cè)EMT分子標(biāo)...

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 Ski基因抑制TGF-β/SMAD信號(hào)通路誘導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲
    一 引言
    二、材料和方法
        (一) 材料
        (二) 方法和步驟
            (一) 細(xì)胞培養(yǎng)
            (二) Western Blot
            (三) Real Time PCR
            (四) PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建及活性檢測(cè)
            (五) Ski基因過(guò)表達(dá)慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建
            (六) Ski沉默的sh-Ski慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
            (七) 慢病毒的包裝,感染以及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的篩選
            (八) Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            (九) 肺癌組織樣本中Ski的表達(dá)分析
            (十) 統(tǒng)計(jì)分析
    三 結(jié)果
        (一). Ski在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株和非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)
        (二). Ski抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EMT
        (三). Ski抑制TGF-β1驅(qū)動(dòng)的轉(zhuǎn)錄應(yīng)答
        (四). Ski抑制TGF-β1誘導(dǎo)的NSCLC細(xì)胞侵襲
        (五). p-SMAD3參與并影響TGF-β1誘導(dǎo)的EMT和細(xì)胞侵襲
        (六). Ski抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EMT和細(xì)胞侵襲主要依賴于經(jīng)典的SMAD通路
    四 討論
    五. 參考文獻(xiàn)
第二部分 非小細(xì)胞肺癌中TGF-β調(diào)控N-cadherin表達(dá)的分子機(jī)制研究
    一、前言
    二、材料和方法
        (一) 材料
        (二) 方法
    三 結(jié)果
        (一) 在NSCLC細(xì)胞中,TGF-β1能夠顯著上調(diào)N-cadheirn的表達(dá)
        (二) .CDH2基因啟動(dòng)子區(qū)存在著TGF-β的應(yīng)答效應(yīng)元件,該順時(shí)作用元件參與并影響TGF-β對(duì)CDH2基因的表達(dá)調(diào)控
        (三) TGF-β激活的SMAD3/4轉(zhuǎn)錄復(fù)合體能夠直接靶向結(jié)合到CDH2的啟動(dòng)子區(qū)并且影響其轉(zhuǎn)錄活性
        (四) 在NSCLC細(xì)胞中,SMAD3/4復(fù)合體正向調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的N-cadheim的表達(dá)
        (五) 在NSCLC組織里,CDH2的表達(dá)與SMAD3和SMAD4的表達(dá)呈正相關(guān)
    四 討論
    五 參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
綜述 TGF-β信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文
附錄：縮略詞表及注釋
致謝



本文編號(hào)：3756280