胃癌是世界上常見的惡性疾病,也是全球癌癥死亡的第二大原因。雖然胃癌的診斷程序和治療策略有所改善,但是胃癌患者依然存在轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、預(yù)后不良的危險(xiǎn)。因此,研究胃癌發(fā)生的分子機(jī)制尤為重要。miRNAs是一類長度約20個(gè)核苷酸的高度保守的非編碼RNA分子,可以特異性結(jié)合靶基因mRNA的3’-非翻譯區(qū)(3’-UTR),使mRNA被降解、翻譯抑制。MiR-149作為癌基因或者抑癌基因在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用,但是miR-149在胃癌中的作用機(jī)理仍然不清楚。本課題主要研究了 miR-149在胃癌細(xì)胞中的作用機(jī)理,miR-149對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控。在胃癌細(xì)胞SGC7901中過表達(dá)miR-149之后,從細(xì)胞中提取mRNA、逆轉(zhuǎn)錄、并通過Real-Time PCR檢測Akt信號通路下游基因的表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)miR-149可以有效地抑制PHLPP2、Bim、Foxo1、Bid、p21等基因的表達(dá),并且對Bcl-2家族部分基因有顯著效果。通過MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)50nMmiR-149可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖,并且轉(zhuǎn)染不同濃度的miR-149對細(xì)胞的影響不同。通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 胃癌研究進(jìn)展
        1.1.1 胃癌的概述
        1.1.2 與胃癌相關(guān)信號通路的研究
    1.2 MicroRNA相關(guān)研究
        1.2.1 MicroRNA概述
        1.2.2 MicroRNA在胃癌中的作用
        1.2.3 MiR-149與腫瘤的研究
    1.3 PHLPP的研究進(jìn)展
        1.3.1 PHLPP的概述
        1.3.2 MicroRNA對PHLPP2的調(diào)控
        1.3.3 PHLPP2在腫瘤中的研究
    1.4 MicroRNA與GPCR的關(guān)系
第二章 MiR-149對胃癌細(xì)胞SGC7901增殖遷移的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 試劑及配制
        2.1.3 儀器及耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞凍存
        2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 細(xì)胞中microRNA的提取
        2.2.7 cDNA的合成
        2.2.8 microRNA的定量分析
        2.2.9 細(xì)胞中RNA的提取
        2.2.10 cDNA的合成
        2.2.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.12 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.2.13 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 胃癌細(xì)胞SGC7901中miR-149的表達(dá)量
        2.3.2 過表達(dá)miR-149檢測目的基因的表達(dá)
        2.3.3 MiR-149對胃癌細(xì)胞增殖的影響
        2.3.4 MiR-149對胃癌細(xì)胞遷移的影響
    2.4 結(jié)果與討論
第三章 MiR-149在胃癌細(xì)胞中靶向調(diào)控PHLPP2
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.1.2 試劑及配制
        3.1.3 儀器及耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 質(zhì)粒突變
        3.2.3 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 MiR-149靶基因的預(yù)測
        3.3.2 報(bào)告基因載體質(zhì)粒的制備
        3.3.3 質(zhì)粒突變
        3.3.4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
    3.4 結(jié)果與討論
第四章 MiR-149對胃癌細(xì)胞內(nèi)Akt磷酸化活性的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.1.2 試劑及配制
        4.1.3 儀器及耗材
    4.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        4.2.1 細(xì)胞中蛋白的提取
        4.2.2 測定蛋白濃度
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 MiR-149促進(jìn)Akt的磷酸化
        4.3.2 MiR-149促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的Akt磷酸化活化
        4.3.3 MiR-149能夠促進(jìn)被LY294002抑制的Akt磷酸化活化
    4.4 結(jié)果與討論
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者及導(dǎo)師簡介
附件



本文編號：3744886