背景:肺癌是肺部最常見的原發(fā)性惡性腫瘤,因其發(fā)病率高、發(fā)現(xiàn)晚、預(yù)后差,成為死亡率增長(zhǎng)最快,對(duì)人類生命健康構(gòu)成最大威脅的惡性腫瘤之一。其中,非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常見的肺癌類型,占肺癌的80%-85%。在過(guò)去的幾年,免疫療法的使用顯著的提高了NSCLC患者的存活率,然而,NSCLC的總體治愈率和存活率仍然非常低,特別是對(duì)于那些在轉(zhuǎn)移性疾病階段的患者。因此靶向減弱NSCLC的轉(zhuǎn)移,抑制其發(fā)展成為臨床治療的重要舉措。Cathepsin K是屬于木瓜蛋白酶家族的半胱氨酸蛋白酶,主要存在于溶酶體中,是哺乳動(dòng)物體內(nèi)最有活性的蛋白水解酶。Cathepsin K與人類多種疾病相關(guān),在骨質(zhì)疏松中研究得較為透徹,此外密切關(guān)聯(lián)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。有研究表明Cathepsin K與肺癌術(shù)后存活率具有顯著相關(guān)性,但其在NSCLC中的具體作用研究尚少,因此通過(guò)探索Cathepsin K對(duì)NSCLC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的影響及作用機(jī)制,以期為NSCLC的靶向醫(yī)治提供參考。方法:1.培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5,人NSCLC細(xì)胞A549、H1299,提取...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 肺癌概述
        1.1.1 肺癌危害
        1.1.2 肺癌病因
        1.1.3 肺癌治療方法
    1.2 Cathepsin K概述
        1.2.1 Cathepsin K家族
        1.2.2 Cathepsin K簡(jiǎn)述
        1.2.3 Cathepsin K與癌癥
    1.3 研究目的和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料、儀器和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        2.3.2 細(xì)胞總RNA提取實(shí)驗(yàn)
        2.3.3 cDNA的合成實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 轉(zhuǎn)化克隆實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 去內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取實(shí)驗(yàn)
        2.3.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 蛋白提取實(shí)驗(yàn)
        2.3.9 BCA蛋白定量實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        2.3.11 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.3.12 細(xì)胞增殖能力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.3.13 細(xì)胞遷移能力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.3.14 細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.3.15 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 提取總RNA濃度、純度及完整性檢測(cè)
        3.1.1 提取總RNA濃度和純度的檢測(cè)
        3.1.2 提取總RNA完整性的檢測(cè)
    3.2 細(xì)胞形貌示意圖
    3.3 MRC-5、A549和H1299中Cathepsin K的差異性表達(dá)
    3.4 MRC-5、A549細(xì)胞中Cathepsin K細(xì)胞定位及表達(dá)
    3.5 重組質(zhì)粒的檢測(cè)
    3.6 Cathepsin K過(guò)表達(dá)模型構(gòu)建
    3.7 Cathepsin K沉默模型構(gòu)建
    3.8 細(xì)胞行為功能學(xué)檢測(cè)
        3.8.1 細(xì)胞增殖
        3.8.2 細(xì)胞遷移
        3.8.3 細(xì)胞侵襲
    3.9 mTOR信號(hào)通路檢測(cè)
    3.10 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號(hào)：3737038