發(fā)布時間：2023-02-07 15:01

　　背景:肺癌是肺部最常見的原發(fā)性惡性腫瘤,因其發(fā)病率高、發(fā)現(xiàn)晚、預后差,成為死亡率增長最快,對人類生命健康構成最大威脅的惡性腫瘤之一。其中,非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常見的肺癌類型,占肺癌的80%-85%。在過去的幾年,免疫療法的使用顯著的提高了NSCLC患者的存活率,然而,NSCLC的總體治愈率和存活率仍然非常低,特別是對于那些在轉移性疾病階段的患者。因此靶向減弱NSCLC的轉移,抑制其發(fā)展成為臨床治療的重要舉措。Cathepsin K是屬于木瓜蛋白酶家族的半胱氨酸蛋白酶,主要存在于溶酶體中,是哺乳動物體內(nèi)最有活性的蛋白水解酶。Cathepsin K與人類多種疾病相關,在骨質(zhì)疏松中研究得較為透徹,此外密切關聯(lián)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。有研究表明Cathepsin K與肺癌術后存活率具有顯著相關性,但其在NSCLC中的具體作用研究尚少,因此通過探索Cathepsin K對NSCLC細胞的增殖、遷移和侵襲的影響及作用機制,以期為NSCLC的靶向醫(yī)治提供參考。方法:1.培養(yǎng)人胚肺成纖維細胞MRC-5,人NSCLC細胞A549、H1299,提取...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 肺癌概述
        1.1.1 肺癌危害
        1.1.2 肺癌病因
        1.1.3 肺癌治療方法
    1.2 Cathepsin K概述
        1.2.1 Cathepsin K家族
        1.2.2 Cathepsin K簡述
        1.2.3 Cathepsin K與癌癥
    1.3 研究目的和意義
第二章 實驗材料、儀器和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)實驗
        2.3.2 細胞總RNA提取實驗
        2.3.3 cDNA的合成實驗
        2.3.4 實時熒光定量PCR實驗
        2.3.5 轉化克隆實驗
        2.3.6 去內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取實驗
        2.3.7 細胞轉染實驗
        2.3.8 蛋白提取實驗
        2.3.9 BCA蛋白定量實驗
        2.3.10 蛋白免疫印跡實驗
        2.3.11 免疫熒光實驗
        2.3.12 細胞增殖能力檢測實驗
        2.3.13 細胞遷移能力檢測實驗
        2.3.14 細胞侵襲能力檢測實驗
        2.3.15 統(tǒng)計分析
第三章 實驗結果與討論
    3.1 提取總RNA濃度、純度及完整性檢測
        3.1.1 提取總RNA濃度和純度的檢測
        3.1.2 提取總RNA完整性的檢測
    3.2 細胞形貌示意圖
    3.3 MRC-5、A549和H1299中Cathepsin K的差異性表達
    3.4 MRC-5、A549細胞中Cathepsin K細胞定位及表達
    3.5 重組質(zhì)粒的檢測
    3.6 Cathepsin K過表達模型構建
    3.7 Cathepsin K沉默模型構建
    3.8 細胞行為功能學檢測
        3.8.1 細胞增殖
        3.8.2 細胞遷移
        3.8.3 細胞侵襲
    3.9 mTOR信號通路檢測
    3.10 討論
第四章 結論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間的研究成果



本文編號：3737038