目的探討Rab5a與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展之間的聯(lián)系,揭示Rab5a促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移和侵襲的新機(jī)制,為臨床治療肝細(xì)胞癌提供依據(jù)。方法1.用免疫組化方法和q RT-PCR檢測(cè)人肝癌組織及癌旁組織中Rab5a的表達(dá)水平。2.用q RT-PCR和Western blotting方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞系中Rab5a的表達(dá)量。3.構(gòu)建Rab5a表達(dá)質(zhì)粒（p CMV-Sport6-Rab5a）,合成干擾片段（si-Rab5a）。在SK-Hep1和SMMC7721細(xì)胞系中用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)過表達(dá)和siRNA效率。4.transwell實(shí)驗(yàn)和傷口劃痕實(shí)驗(yàn),在HepG2和SK-Hep1細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染pCMV-Sport6-Rab5a（pCMV-Sport6作為對(duì)照）和siRab5a（Si-NC作為對(duì)照）,檢測(cè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。5.在SK-Hep1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染p CMV-Sport6-Rab5a和si-Rab5a,用q RT-PCR和Western blotting方法檢測(cè)與轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因,如:FOXC2,TP53,VEGF,MMp2,Cdc42等的表達(dá)情況。6.構(gòu)建含有Cdc42基因啟動(dòng)... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 Rab5a在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 肝癌細(xì)胞系以及肝癌組織病理切片
            1.1.2 試劑
            1.1.3 主要儀器及設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代和細(xì)胞換液
            1.2.2 免疫組化、qRT-PCR、蛋白提取和Western Blot
    2 結(jié)果
        2.1 肝癌組織中Rab5a高表達(dá)量
        2.2 肝癌細(xì)胞中Rab5a的表達(dá)量呈上調(diào)趨勢(shì)
    3 討論
第二部分 Rab5a在肝癌發(fā)生發(fā)展中的功能研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 肝癌細(xì)胞系
            1.1.2 質(zhì)粒載體、干擾RNA及細(xì)菌感受態(tài)
            1.1.3 主要儀器及設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 構(gòu)建Rab5a過表達(dá)質(zhì)粒
            1.2.2 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒
            1.2.3 RNA提取
            1.2.4 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)
    2 結(jié)果
        2.1 構(gòu)建Rab5a過表達(dá)質(zhì)粒
        2.2 檢測(cè)Rab5a過表達(dá)和干擾效果
        2.3 Rab5a對(duì)肝癌細(xì)胞遷移、侵襲能力影響的檢測(cè)
    3 討論
第三部分 闡明Raba5在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 細(xì)胞系
            1.1.2 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、慢病毒及293T細(xì)胞株
        1.2 方法
            1.2.1 qRT-PCR
            1.2.2 Western Blot
            1.2.3 雙熒光素酶活性測(cè)定
    2 結(jié)果
        2.1 qRT-PCR篩選預(yù)測(cè)靶基因
        2.2 檢測(cè)Rab5a對(duì)靶基因蛋白質(zhì)水平的影響
        2.3 雙熒光素報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)Rab5a啟動(dòng)子活性
    3 討論
第四部分 動(dòng)物模型中驗(yàn)證Rab5a對(duì)肝癌進(jìn)展的影響
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 細(xì)胞系和裸鼠
            1.1.2 慢病毒質(zhì)粒
        1.2 方法
            1.2.1 Rab5a慢病毒過表達(dá)質(zhì)粒建構(gòu)
            1.2.2 構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的Rab5a穩(wěn)定表達(dá)肝癌細(xì)胞系
            1.2.3 裸鼠異位移植瘤實(shí)驗(yàn)
    2 結(jié)果
        2.1 驗(yàn)證Rab5a穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞系是否構(gòu)建成功
        2.2 裸鼠異位移植瘤模型構(gòu)建成功
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Differential expression of Rab27A/B correlates with clinical outcome in hepatocellular carcinoma[J]. Wei-Wei Dong,Wen-Hua Xiao,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,the General Hospital of Chinese People’s Liberation Army,Beijing 100048,China Quan Mou,Jian Chen,Department of surgery,252 Hospital of Chinese People’s Liberation Army,Baoding 071000,Hebei Province,China Jian-Tao Cui,Wen-Mei Li,Laboratory of Molecular Oncology,Peking University Cancer Hospital/Institute,Beijing 100142,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(15)



本文編號(hào)：3718430