發(fā)布時(shí)間：2022-12-05 22:23

　　目的本研究在構(gòu)建肥胖伴骨髓腔前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）荷瘤裸鼠模型的基礎(chǔ)上,明確肥胖狀態(tài)下游離脂肪酸（Free Fatty Acid,FFA）含量增加,是否會(huì)引起骨髓微環(huán)境改變（脂肪細(xì)胞增多,增加環(huán)氧合酶2（Cyclooxygenase 2,COX2）的表達(dá),成骨細(xì)胞減少,降低骨保護(hù)素（Osteoprotegerin,OPG）的表達(dá)）,是否會(huì)促進(jìn)PCa細(xì)胞在骨髓腔中的生長和定殖,并明確二者的相關(guān)性;在體外培養(yǎng)人源骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（human Marrow Mesenchymal Stem Cells,h MSCs）的基礎(chǔ)上,明確高濃度FFA（辛酸）對(duì)h MSCs向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化的影響,以及對(duì)分化關(guān)鍵因子表達(dá)的影響;將辛酸（FFA C8:0）聯(lián)合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分別與人前列腺癌細(xì)胞PC3及22RV1間接共培養(yǎng),明確辛酸（FFA C8:0）對(duì)PCa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。通過以上研究,嘗試闡明肥胖相關(guān)PCa發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的可能分子機(jī)制,為臨床治療提供新的分子靶標(biāo)。方法（1）在石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科,采集非癌個(gè)體（n=16）前列腺... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 人體血清樣本來源及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 細(xì)胞系
    1.3 相關(guān)試劑及儀器
        1.3.1 相關(guān)試劑和耗材
        1.3.2 相關(guān)儀器
    1.4 各種引物序列表
實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 PCa患者與非癌個(gè)體血清樣本采集
        2.1.1 一般資料及血液樣本的收集
        2.1.2 血脂及FFA含量檢測(cè)
    2.2 肥胖伴骨髓腔PCa荷瘤小鼠模型建立及標(biāo)本采集
    2.3 骨組織免疫組化、HE染色及脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分布觀察
        2.3.1 骨組織切片
        2.3.2 骨組織免疫組化
        2.3.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果分析
        2.3.4 骨組織H&E染色
        2.3.5 骨髓腔中脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分布觀察
    2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.1 辛酸(FFA C8:0)母液的配置
        2.4.2 成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.3 前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.4 細(xì)胞復(fù)蘇及換液
        2.4.5 細(xì)胞傳代
        2.4.6 細(xì)胞的凍存
    2.5 成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化及染色
        2.5.1 脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)劑
        2.5.2 誘導(dǎo)分化
        2.5.3 油紅O染色
    2.6 成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化及染色
        2.6.1 成骨細(xì)胞誘導(dǎo)劑
        2.6.2 誘導(dǎo)分化
        2.6.3 茜素紅染色
    2.7 細(xì)胞RNA提取
    2.8 cDNA合成及逆轉(zhuǎn)錄
    2.9 實(shí)時(shí)定量PCR
    2.10 細(xì)胞系的蛋白提取
    2.11 蛋白濃度測(cè)定(BCA法)
    2.12 Western Blot
    2.13細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    2.14細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
    2.15細(xì)胞的侵襲實(shí)驗(yàn)
    2.16 ELISA
    2.17 統(tǒng)計(jì)方法
結(jié)果
    3.1 PCa患者血清中FFA含量測(cè)定及骨轉(zhuǎn)移特異性相關(guān)的FFA篩選
        3.1.1 PCa骨轉(zhuǎn)移患者血清FFA含量顯著高于無骨轉(zhuǎn)移患者及非癌個(gè)體
        3.1.2 篩選出辛酸(FFA C8:0)在PCa患者血清中顯著高表達(dá)
    3.2 構(gòu)建肥胖伴骨髓腔PCa荷瘤裸鼠模型,并檢測(cè)一般指標(biāo)
        3.2.1 構(gòu)建肥胖伴骨髓腔PCa荷瘤裸鼠模型
        3.2.2 活體成像
        3.2.3 裸鼠血脂及FFA水平檢測(cè)
    3.3 高脂喂養(yǎng)裸鼠骨髓腔中脂肪細(xì)胞與成骨細(xì)胞分布,及COX2和OPG表達(dá)水平檢測(cè)
        3.3.1 高脂喂養(yǎng)裸鼠骨髓腔中,脂肪細(xì)胞分布增多
        3.3.2 高脂喂養(yǎng)裸鼠骨髓腔中,成骨細(xì)胞分布減少
        3.3.3 高脂喂養(yǎng)裸鼠骨髓腔中,COX2 高表達(dá)
        3.3.4 高脂喂養(yǎng)裸鼠骨髓腔中,OPG低表達(dá)
    3.4 辛酸(FFA C8:0)誘導(dǎo)hMSCs細(xì)胞,促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化、抑制成骨細(xì)胞生成
        3.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)
        3.4.2 辛酸(FFA C8:0)聯(lián)合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)hMSCs生成更多的脂肪細(xì)胞,促進(jìn)COX2/PGE2 高表達(dá)
        3.4.3 辛酸(FFA C8:0)聯(lián)合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)hMSCs減少向成骨細(xì)胞的分化,OPG表達(dá)降低
    3.5 辛酸(FFA C8:0)刺激下脂肪細(xì)胞/成骨細(xì)胞上清液對(duì)PCa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
        3.5.1 辛酸(FFA C8:0)刺激下脂肪細(xì)胞上清液與PCa細(xì)胞間接共培養(yǎng),不促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞(PC-3/22RV1)增殖,但可促進(jìn)PC-3 細(xì)胞侵襲和遷移能力
        3.5.2 辛酸(FFA C8:0)刺激下脂肪細(xì)胞上清液促進(jìn)PCa細(xì)胞中癌基因表達(dá)
        3.5.3 辛酸(FFA C8:0)刺激下成骨細(xì)胞上清液與PCa細(xì)胞間接共培養(yǎng),不促進(jìn)PCa細(xì)胞(PC-3/22RV1)的增殖、遷移與侵襲能力
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師評(píng)閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]初選階段知識(shí)聯(lián)盟成員評(píng)價(jià)與選擇模型[J]. 石書玲.  科技進(jìn)步與對(duì)策. 2007(09)



本文編號(hào)：3710469