目的:檢測(cè)Twist2在人胃癌細(xì)胞系中mRNA和蛋白的表達(dá)情況。通過(guò)shRNA編碼的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系,從而抑制Twist2的表達(dá),分析轉(zhuǎn)染前后胃癌細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子鈣黏素E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表達(dá)情況。探討Twist2在胃癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用,并觀察Twist2對(duì)胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力的影響。方法:1、培養(yǎng)胃癌SGC-7901、BGC-823、MGC-803細(xì)胞系,提取mRNA和蛋白后,采用q-PCR和Western blot檢測(cè)表達(dá)水平。2、選擇Twist2 mRNA和蛋白表達(dá)水平最高的BGC-823細(xì)胞系進(jìn)行進(jìn)一步的研究。用shRNA編碼的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌BGC-823細(xì)胞系。將實(shí)驗(yàn)分為三組:空白組（Blank）;Twist2陰性對(duì)照組（NC-sh）;Twist2沉默組（Twist2-sh）。使用q-PCR、Western blot檢測(cè)上述三組細(xì)胞中Twist2mRNA和蛋白的表達(dá)情況,以及各組細(xì)胞EMT相關(guān)因子E-cadherin、Vimentin蛋白... 

【文章頁(yè)數(shù)】：41 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 研究方法
        2.2.1 人胃癌細(xì)胞系的培養(yǎng)
        2.2.2 q-PCR檢測(cè)不同人胃癌細(xì)胞系中Twist2 mRNA的表達(dá)水平
        2.2.3 Westernblot檢測(cè)不同人胃癌細(xì)胞系中Twist2蛋白的表達(dá)水平
        2.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染并分組
        2.2.5 q-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中Twist2 mRNA的表達(dá)水平
        2.2.6 Westernblot檢測(cè)各組細(xì)胞中Twist2蛋白的表達(dá)水平
        2.2.7 Westernblot檢測(cè)各組細(xì)胞中EMT相關(guān)分子蛋白的表達(dá)水平
        2.2.8 Transwell小室侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲和遷移能力
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與分析
3 結(jié)果
    3.1 q-PCR檢測(cè)各細(xì)胞系中Twist2 mRNA的表達(dá)水平
    3.2 Westernblot檢測(cè)各細(xì)胞系中Twist2蛋白的表達(dá)水平
    3.3 q-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中Twist2 mRNA的表達(dá)情況
    3.4 Westernblot檢測(cè)各組細(xì)胞中Twist2蛋白的表達(dá)情況
    3.5 Westernblot檢測(cè)各組細(xì)胞EMT相關(guān)分子蛋白的表達(dá)水平
    3.6 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲能力的變化情況
    3.7 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力的變化情況
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Twist2 is a valuable prognostic biomarker for colorectal cancer[J]. Hao Yu,Guang-Zhi Jin,Kai Liu,Hui Dong,Hua Yu,Ji-Cheng Duan,Zhe Li,Wei Dong,Wen-Ming Cong,Jia-He Yang.  World Journal of Gastroenterology. 2013(15)



本文編號(hào)：3704558