發(fā)布時(shí)間：2022-11-07 17:12

　　目的:胰腺癌是一種惡性程度極高,早期篩查與診斷以及治療都很有難度的消化道惡性腫瘤。胰腺癌的不良預(yù)后與其特殊的解剖位置、發(fā)病隱匿、缺乏早期特殊癥狀以及缺少有效的早期診療手段有著密切聯(lián)系。超過80%的患者在確診為胰腺癌時(shí)已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移或處于進(jìn)展期而無法接受手術(shù)切除,因此只能采取包括化療、放療及營(yíng)養(yǎng)支持等綜合治療。然而,綜合治療對(duì)這部分患者的生存率并沒有較好的改善,總體5年生存率僅為5%左右。即使是手術(shù)治療的患者,其5年生存率也低于20%。為改善胰腺癌患者的預(yù)后差的情況,挖掘新的腫瘤生物標(biāo)志物以及尋找有意義的分子治療靶點(diǎn)成為目前研究的熱點(diǎn)。以往的研究證據(jù)表明,長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lncRNA）可以在表觀遺傳水平上調(diào)節(jié)基因表達(dá),并在調(diào)節(jié)癌細(xì)胞行為（包括增殖、侵襲、凋亡和轉(zhuǎn)移等）發(fā)揮關(guān)鍵作用。大量的研究證實(shí),lncRNA可以同通過結(jié)合特定的microRNA（miRNA）來激活靶基因表達(dá),影響腫瘤的惡性生物學(xué)行為。AGR2是與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)、增殖及耐藥相關(guān)的重要基因,被認(rèn)為是早期檢測(cè)和治療的一個(gè)有前景的標(biāo)志。因此,AGR2在胰腺癌中的功能及其在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程... 

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :LINC01207 通過結(jié)合miR-326-3p靶向調(diào)控AGR2在胰腺癌中的表達(dá)
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對(duì)象和分組
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 檢索GEO數(shù)據(jù)庫
            2.3.2 免疫組織化學(xué)法
            2.3.3 胰腺癌及癌旁組織總RNA提取
            2.3.4 樣品cDNA合成
            2.3.5 qRT-PCR反應(yīng)
            2.3.6 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.7 培養(yǎng)細(xì)胞總RNA提取
            2.3.8 瓊脂糖凝膠電泳
            2.3.9 細(xì)胞總蛋白提取
            2.3.10 BCA法測(cè)定蛋白濃度
            2.3.11 Western blot
            2.3.12 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
            2.3.13 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.3.14 RNA pull down
            2.3.15 RIP實(shí)驗(yàn)
            2.3.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 GEO數(shù)據(jù)庫篩選結(jié)果
        3.2 胰腺癌和癌旁組織中LINC01207、miR-143-5p和 AGR2 的表達(dá)
            3.2.1 胰腺癌和癌旁組織中AGR2的表達(dá)
            3.2.2 胰腺癌和癌旁組織中LINC01207、miR-143-5p和 AGR2 的表達(dá)
        3.3 RT-PCR和 Western Blot篩選AGR2 高表達(dá)細(xì)胞系
        3.4 miR-143-5p可與LINC01207和AGR2 特異性結(jié)合
            3.4.1 RNA22 網(wǎng)站預(yù)測(cè)miR-143-5p與 LINC01207和AGR2 存在結(jié)合位點(diǎn)
            3.4.2 雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-143-5p與 LINC01207和AGR2 靶向關(guān)系
            3.4.3 RNA pull-down和 RIP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-143-5p與 LINC01207 特異性結(jié)合
        3.5 qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染后LINC01207、miR-143-5p和 AGR2 的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :LINC01207 通過調(diào)控miR-143-5p/AGR2 通路對(duì)胰腺癌細(xì)胞自噬與凋亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對(duì)象和分組
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.3.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖
            2.3.4 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況
            2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            2.3.6 吖啶橙染色檢測(cè)自噬酸性囊泡
            2.3.7 免疫熒光檢測(cè)LC3Ⅱ表達(dá)
            2.3.8 BCA法測(cè)定蛋白濃度
            2.3.9 Western blot
            2.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 沉默LINC01207 和過表達(dá)miR-143-5p抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)
        3.2 沉默LINC01207 和過表達(dá)miR-143-5p促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞凋亡
            3.2.1 TUNEL法檢測(cè)LINC01207和miR-143-5P對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡的影響
            3.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LINC01207和miR-143-5P對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        3.3 沉默LINC01207 和過表達(dá)miR-143-5p促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞自噬
            3.3.1 吖啶橙檢測(cè)LINC01207和miR-143-5P對(duì)胰腺癌細(xì)胞自噬的影響
            3.3.2 免疫熒光檢測(cè)LINC01207和miR-143-5P對(duì)自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ表達(dá)的影響
        3.4 LINC01207 通過結(jié)合miR-143-5p調(diào)控AGR2 影響自噬與凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Circular RNA ciRS-7 promotes the proliferation and metastasis of pancreatic cancer by regulating miR-7-mediated EGFR/STAT3 signaling pathway[J]. Lei Liu,Fu-Bao Liu,Mei Huang,Kun Xie,Qing-Song Xie,Chen-Hai Liu,Min-Jing Shen,Qiang Huang.  Hepatobiliary ＆ Pancreatic Diseases International. 2019(06)
[2]Analysis of status and countermeasures of cancer incidence and mortality in China[J]. Chunchun Wu,Mengna Li,Hanbing Meng,Yukun Liu,Weihong Niu,Yao Zhou,Ran Zhao,Yumei Duan,Zhaoyang Zeng,Xiaoling Li,Guiyuan Li,Wei Xiong,Ming Zhou.  Science China（Life Sciences）. 2019(05)
[3]Circular RNA circ-LDLRAD3 as a biomarker in diagnosis of pancreatic cancer[J]. Fan Yang,Dong-Yan Liu,Jin-Tao Guo,Nan Ge,Ping Zhu,Xiang Liu,Sheng Wang,Guo-Xin Wang,Si-Yu Sun.  World Journal of Gastroenterology. 2017(47)
[4]Pancreatic cancer stem cell markers and exosomes- the incentive push[J]. Sarah Heiler,Zhe Wang,Margot Z?ller.  World Journal of Gastroenterology. 2016(26)
[5]Advancement in treatment and diagnosis of pancreatic cancer with radiopharmaceuticals[J]. Yu-Ping Xu,Min Yang.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(02)
[6]Noncoding RNAs and pancreatic cancer[J]. Juan-Fei Peng,Yan-Yan Zhuang,Feng-Ting Huang,Shi-Neng Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)
[7]Novel therapeutic targets for pancreatic cancer[J]. Shing-Chun Tang,Yang-Chao Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2014(31)



本文編號(hào)：3704076