Pten（phosphate and tension homology deleted on chromsome ten）基因定位于人第10號(hào)染色體,編碼由403個(gè)氨基酸組成、具有脂質(zhì)磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性的抑癌蛋白PTEN。自1997克隆并鑒定為抑癌基因以來(lái),其一直作為腫瘤研究領(lǐng)域的明星分子。多種腫瘤病人的組織中都發(fā)現(xiàn)了Pten基因的突變與缺失,并且生殖細(xì)胞中PTEN的缺失與突變會(huì)導(dǎo)致一組常染色體顯性遺傳綜合征（PHTS）,包括Cowden疾病和Bannayan–Riley–Ruvalcaba綜合征。PTEN通過發(fā)揮磷酸酶活性能特異性將細(xì)胞質(zhì)中的磷脂酰肌醇3,4,5三磷酸（PIP3）去磷酸化生成磷脂酰肌醇4,5二磷酸（PIP2）,從而抑制PI3K-Akt信號(hào)通路發(fā)揮抑癌功能。PI3K信號(hào)通路的活性與腫瘤的易感性之間存在密切的關(guān)聯(lián),因此研究PTEN蛋白水平和活性的調(diào)控,對(duì)于腫瘤的治療具有重要意義。除此以外,PTEN在細(xì)胞核中還可以通過不依賴PI3K信號(hào)通路的方式,維持基因組穩(wěn)定性、調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程以及基因表達(dá),發(fā)揮抑癌功能。PTEN是繼p53后發(fā)現(xiàn)的另一個(gè)重要的抑癌蛋白,但相對(duì)于p... 

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 抑癌蛋白PTEN的重要性
    1.2 PTEN的精細(xì)調(diào)控與腫瘤的關(guān)系
    1.3 PTEN的泛素化與去泛素化調(diào)控
    1.4 CRISPR/CAS9基因編輯技術(shù)
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 小鼠DNA提取試劑
        2.1.2 細(xì)胞以及組織裂解液
        2.1.3 蛋白免疫印跡試劑
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 鼠尾DNA的提取與基因型鑒定
        2.2.2 質(zhì)粒的提取
        2.2.3 細(xì)胞或組織RNA的提取
        2.2.4 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 MEF細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.2.6 蛋白免疫印跡
        2.2.7 蛋白免疫共沉淀
        2.2.8 間接免疫熒光
        2.2.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)方法
第三章 生理?xiàng)l件下WWP2是PTEN重要的泛素化酶
    3.1 WWP2與CHIP小鼠的基因型鑒定
    3.2 WWP2敲除的小鼠體型變小,體重變輕
    3.3 CHIP敲除后小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育阻滯
    3.4 WWP2敲除后PTEN的蛋白水平上升,AKT通路受到抑制
    3.5 WWP2基因敲除不影響PTEN的轉(zhuǎn)錄水平
    3.6 WWP2敲除后PTEN的泛素化水平增加
    3.7 CHIP 缺失既不影響 PTEN 的蛋白水平，也不影響其泛素化水平
    3.8 小結(jié)
    3.9 討論
第四章 USP10通過去泛素化穩(wěn)定PTEN
    4.1 USP10基因敲除細(xì)胞株的構(gòu)建
        4.1.1 sgRNA序列的設(shè)計(jì)
        4.1.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        4.1.3 病毒的包裝
        4.1.4 USP10基因敲除細(xì)胞株的構(gòu)建與篩選
    4.2 USP10 敲除后細(xì)胞的增殖和遷移能力增強(qiáng)
    4.3 USP10 敲除后，PTEN 的蛋白水平下降，AKT 信號(hào)通路激活
    4.4 USP10敲除后PTEN的泛素化水平明顯增加
    4.5 USP10 敲除后細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 PTEN 蛋白水平都下降
    4.6 小結(jié)
    4.7 討論
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄A 基因型鑒定引物
附錄B 實(shí)驗(yàn)儀器
作者在學(xué)期間取得的學(xué)術(shù)成果
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3702829