發(fā)布時間：2022-11-04 21:18

　　目的:結(jié)直腸癌是位于全球腫瘤發(fā)病率第三位的惡性腫瘤,也是導致腫瘤患者死亡的第四大癌種。結(jié)直腸癌發(fā)病率在逐年升高,預計到2035年該病的發(fā)病率是現(xiàn)在的一倍。目前,外科手術(shù)仍然是治療結(jié)直腸癌的主要手段,化療是輔助手段。隨著藥物研究的進展,靶向治療藥物如抗血管內(nèi)皮生長因子抗體以及表皮生長因子抗體已經(jīng)被美國食品及藥品管理局（FDA）批準用于治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌,但靶向治療往往存在局限性,比如有的藥物需要在治療前進行基因檢測,以及普遍有費用高、療程長的缺點。PD-1單抗和CTL-A4抑制劑的聯(lián)合治療,也顯示出療效,但只在基因微衛(wèi)星不穩(wěn)定的患者中效果明顯。納曲酮（naltrexone,NTX）又稱為鹽酸納曲酮,最早由美國杜邦公司1963年研發(fā),并于1984年通過FDA的審查、上市,主要用于阿片藥物成癮、酒精依賴和毒品戒斷等方面的治療,常用劑量為50-100mg/d,而低于5mg/d的劑量,稱為低劑量納曲酮（low dose naltrexone,LDN）。研究發(fā)現(xiàn),當應(yīng)用LDN時,可以緩解免疫相關(guān)性疾病如多發(fā)性硬化、炎癥性肌纖維痛、克羅恩病等的癥狀,并且在多種腫瘤細胞系中抑制其生長。LDN與化療藥物... 

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :LDN體外抑制人結(jié)直腸癌細胞的惡性生物學行為
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 材料與試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 試劑
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 分組
            2.2.4 CCK-8檢測細胞增殖能力
            2.2.5 克隆形成實驗
            2.2.6 觀察細胞形態(tài)
            2.2.7 Hoechst33258 染色檢測
            2.2.8 凋亡檢測
            2.2.9 RT-PCR檢測OGFr、Ki67的m RNA水平
            2.2.10 Western Blot檢測OGFr蛋白表達水平
            2.2.11 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 LDN抑制人結(jié)直腸癌細胞的增殖
        3.2 LDN對結(jié)腸粘膜正常上皮細胞無明顯影響
        3.3 LDN對人結(jié)直腸癌細胞克隆形成能力的影響
        3.4 LDN對人結(jié)直腸癌細胞形態(tài)的影響
        3.5 LDN對人結(jié)直腸癌細胞凋亡的影響
        3.6 LDN對人結(jié)直腸癌OGFr表達的影響
        3.7 LDN對人結(jié)直腸癌細胞中Ki67的m RNA表達水平影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :LDN體內(nèi)可以抑制結(jié)直腸癌的增殖及有可能通過增加M1型巨噬細胞的活性增加抗腫瘤作用
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細胞系和實驗動物
            2.1.2 相關(guān)試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 試劑配制
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 實驗分組
            2.2.4 裸鼠結(jié)直腸癌皮下移植瘤模型
            2.2.5 HE染色
            2.2.6 免疫組織化學
            2.2.7 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 LDN抑制裸鼠結(jié)直腸癌皮下移植瘤的增殖
        3.2 裸鼠結(jié)直腸癌皮下移植瘤的病理形態(tài)
        3.3 LDN對結(jié)直腸癌移植瘤組織中Ki67的表達影響
        3.4 LDN通過增加M1型TAMs活性發(fā)揮抑制結(jié)直腸癌增殖的作用
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :LDN誘導結(jié)直腸癌凋亡的機制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細胞系
            2.1.2 細胞培養(yǎng)相關(guān)試劑
            2.1.3 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 試劑
            2.2.2 細胞培養(yǎng)操作
            2.2.3 RT-PCR檢測Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-9、caspase-3、survivin的mRNA水平
            2.2.4 Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白表達水平
            2.2.5 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 LDN對人結(jié)腸癌細胞中Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-9、caspase-3和survivin的mRNA表達水平的影響
        3.2 LDN對人結(jié)直腸癌細胞中凋亡相關(guān)蛋白表達的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3701351