磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/m TOR）是腫瘤細(xì)胞存活及凋亡重要的信號(hào)通路,骨肉瘤以及許多其它人類癌癥出現(xiàn)PI3K/Akt/m TOR信號(hào)通路失調(diào)。NVP-BEZ235,作為一種新的PI3K/m TOR雙重抑制劑,表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性。自噬是一種細(xì)胞溶酶體降解途徑,在維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和死亡方面至關(guān)重要。然而,PI3K/AKT/m TOR信號(hào)還可以負(fù)調(diào)控自噬過程,抑制細(xì)胞自噬的發(fā)生,而自噬可能保護(hù)凋亡,可減少化療藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制自噬可能提高NVP-BEZ235誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。因此在本研究中,我們考察了自噬在NVP-BEZ235引起骨肉瘤細(xì)胞凋亡過程中的作用,并探討了相關(guān)分子機(jī)制。方法:（1）MTT方法檢測(cè)NVP-BEZ235和（或）自噬抑制劑3-MA對(duì)U2OS骨肉瘤細(xì)胞存活率的影響。（2）免疫印跡（western blot）的方法檢測(cè)PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路蛋白相關(guān)蛋白（AKT和p70S6K）、凋亡通路相關(guān)蛋白（Cytochrome C、caspase-3和PARP）以及自噬相關(guān)蛋白（LC3,Beclin... 

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
主要英文縮寫詞表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 骨肉瘤的發(fā)病機(jī)制及治療進(jìn)展
        1.1.1 發(fā)病機(jī)制
        1.1.2 目前的治療方法
        1.1.3 新興的治療方法和新的治療靶點(diǎn)
    1.2 PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路與腫瘤
        1.2.1 PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路
        1.2.2 癌細(xì)胞PI3K-Akt-m TOR通路失調(diào)
        1.2.3 在臨床開發(fā)階段的抑制劑
        1.2.4 PI3K、AKT、m TOR抑制劑在腫瘤臨床應(yīng)用中的問題
    1.3 自噬與腫瘤
        1.3.1 自噬的分子機(jī)制
        1.3.2 自噬過程
        1.3.3 自噬的調(diào)控
        1.3.4 自噬在腫瘤中作用
第2章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 骨肉瘤標(biāo)本采集
        2.1.4 細(xì)胞
        2.1.5 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.2.3 Western blot方法檢測(cè)蛋白表達(dá)
        2.2.4 Atg5 si RNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)
        2.2.5 線粒體膜電位分析
        2.2.6 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路蛋白在骨肉瘤組織和骨肉瘤瘤旁正常骨組織中表達(dá)差異
    3.2 NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞存活率的影響
    3.3 NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞凋亡的影響
        3.3.1 不同濃度NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞凋亡率的影響
        3.3.2 不同濃度NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響
        3.3.3 線粒體凋亡信號(hào)通路參與了NVP-BEZ235誘導(dǎo)的U2OS細(xì)胞凋亡
    3.4 NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3，Beclin 1 和p62表達(dá)水平的影響
        3.4.1 NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin表達(dá)水平的影響
        3.4.2 NVP-BEZ235對(duì)U2OS細(xì)胞p62表達(dá)水平的影響
    3.5 抑制自噬可以明顯的增加NVP-BEZ235引起的細(xì)胞毒性
        3.5.1 ATG5 si RNA可以明顯的增加NVP-BEZ235引起的細(xì)胞生存率的下降和凋亡
        3.5.2 自噬抑制劑可以增加NVP-BEZ235引起的細(xì)胞毒性
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3681222