背景及目的:肺癌源于肺部惡性腫瘤細胞生長增殖失控,是發(fā)病率和死亡率增長最快、對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。按照病理學(xué)分類,肺癌可以分為小細胞肺癌（Small Cell Lung Cancer,SCLC）和非小細胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）。其中,85%的病例為NSCLC患者。非小細胞肺癌發(fā)生的根本原因是腫瘤細胞中頻繁地發(fā)生腫瘤驅(qū)動基因EGFR或Ras突變。雙氫青嵩素（Dihydroartemisinin,DHA）是青蒿素的衍生物,屬于倍半萜類化合物,對惡性瘧原蟲具有強大快速的殺傷作用。研究發(fā)現(xiàn),除了具有抗瘧疾、抗炎癥、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗糖尿病等功效外,DHA對肺癌、腸癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、頭頸部鱗狀細胞癌等不同類型的腫瘤細胞和動物模型腫瘤有一定的抑制作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)DHA在抗腫瘤作用方面具有毒副作用小、多靶點、優(yōu)先選擇腫瘤細胞等優(yōu)點,但是DHA單獨用藥處理在很多腫瘤類型中抑制腫瘤生長效果有限,聯(lián)合用藥治療NSCLC似乎是一個更有前景的方案。ABT-263（Navitoclax）是針對于Bcl-2家族抗凋亡蛋... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 英文縮略詞表 第1章 引言
1.1 肺癌及其治療現(xiàn)狀
    1.1.1 肺癌發(fā)生及分類
    1.1.2 肺癌的治療
    1.1.3 靶向藥物
1.2 雙氫青蒿素概述
    1.2.1 雙氫青蒿素簡介
    1.2.2 雙氫青蒿素抗腫瘤作用
1.3 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)與腫瘤發(fā)生
    1.3.1 JAK2-STAT3信號通路
    1.3.2 STAT3與腫瘤發(fā)生 第2章 課題立論依據(jù)、技術(shù)路線、研究意義
立論依據(jù)
技術(shù)路線
研究意義 第3章 雙氫青蒿素協(xié)同增強ABT-263抗腫瘤作用
3.1 引言
3.2 實驗材料
    3.2.1 細胞來源與細胞培養(yǎng)
    3.2.2 試劑與配置
    3.2.3 主要儀器設(shè)備
3.3 實驗方法
    3.3.1 細胞凋亡測定
    3.3.2 高內(nèi)涵成像及細胞生長率測定
    3.3.3 協(xié)同指數(shù)的測定
    3.3.4 克隆形成實驗
    3.3.5 免疫印跡檢測蛋白表達水平
    3.3.6 慢病毒包裝
    3.3.7 sh-ctrl、sh-Bax穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的構(gòu)建
    3.3.8 數(shù)據(jù)分析
3.4 實驗結(jié)果
    3.4.1 高內(nèi)涵觀察DHA、ABT或Comb處理下細胞生長情況
    3.4.2 DHA、ABT雙藥處理的時間、劑量效應(yīng)探究
    3.4.3 DHA、ABT雙藥聯(lián)合具有協(xié)同作用
    3.4.4 雙藥聯(lián)合顯著抑制細胞生長
    3.4.5 DHA、ABT雙藥聯(lián)合在EGFR或Ras突變的NSCLC中顯著引起凋亡
    3.4.6 蛋白免疫印跡結(jié)果顯示雙藥聯(lián)合上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白表達
    3.4.7 敲低Bax顯著保護了雙藥引起的凋亡
3.5 小結(jié)與討論 第4章 DHA協(xié)同增強ABT-263引起細胞凋亡的分子機制探究
4.1 引言
4.2 材料
    4.2.1 細胞來源與細胞培養(yǎng)
    4.2.2 試劑與配制
    4.2.3 主要儀器設(shè)備(同3.2.3)
4.3 實驗方法
    4.3.1 A549細胞瞬時轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-survivin
    4.3.2 蛋白免疫印跡、流式技術(shù)檢測細胞凋亡、結(jié)果統(tǒng)計(同3.2)
4.4 結(jié)果
    4.4.1 蛋白免疫印跡檢測Mcl-1在DHA處理后的表達水平
    4.4.2 基因敲減Mcl-1后ABT、Comb處理后細胞死亡率上升
    4.4.3 免疫印跡篩選抗凋亡和促凋亡蛋白成員及其表達變化
    4.4.4 持續(xù)激活Survivin后細胞死亡率下降
    4.4.5 敲低Bim后細胞死亡率下降
4.5 小結(jié)與討論 第5章 STAT3功能缺失促進ABT-263引起細胞凋亡
5.1 引言
5.2 材料
    5.2.1 細胞來源與細胞培養(yǎng)(同3.2.1)
    5.2.2 試劑與配制
    5.2.3 主要儀器設(shè)備(同3.2.3)
5.3 方法
    5.3.1 蛋白質(zhì)磷酸化激酶芯片
    5.3.2 免疫印跡檢測相關(guān)蛋白表達水平(同3.3.5)
    5.3.3 數(shù)據(jù)分析
5.4 結(jié)果
    5.4.1 蛋白激酶芯片結(jié)果顯示DHA顯著抑制STAT3的活化磷酸化
    5.4.2 DHA抑制p-STAT3具有時間和劑量依賴效應(yīng)
    5.4.3 其他相關(guān)蛋白激酶在雙藥聯(lián)合中的作用
5.5 小結(jié)與討論 第6章 DHA通過抑制JAK2/STAT3下調(diào)Mcl-1、Survivin的表達增強ABT-263誘導(dǎo)的細胞凋亡
6.1 引言
6.2 實驗材料、試劑及儀器設(shè)備
    6.2.1 細胞來源及細胞培養(yǎng)(同3.2.1)
    6.2.2 實驗試劑及配置
    6.2.3 主要儀器設(shè)備
6.3 實驗方法
    6.3.1 免疫印跡實驗方法(同3.3.5)
    6.3.2 慢病毒包裝實驗方法(同3.2.6)
    6.3.3 克隆形成實驗方法(同3.3.4)
    6.3.4 雙熒光素酶報告基因檢測STAT3轉(zhuǎn)錄活性
    6.3.5 實時定量PCR實驗方法
    6.3.6 pGreen-STAT3質(zhì)粒構(gòu)建
6.4 實驗結(jié)果
    6.4.1 STAT3功能缺失后顯著增強ABT-263的細胞毒性
    6.4.2 STAT3功能增益后保護了聯(lián)合用藥引起的細胞凋亡
    6.4.3 敲低、過表達STAT3后克隆形成數(shù)變化
    6.4.4 JAK2是STAT3的上游分子
    6.4.5 Mcl-1、Survivin與STAT3變化呈正相關(guān)
    6.4.6 DHA抑制STAT3的轉(zhuǎn)錄活性
    6.4.7 DHA在轉(zhuǎn)錄水平抑制Mcl-1、Survivin的表達
6.5 小結(jié)與討論 第7章 DHA、ABT-263在體內(nèi)的抗腫瘤作用及機制研究
7.1 引言
7.2 材料
    7.2.1 細胞來源與裸鼠來源
    7.2.2 試劑與配制
    7.2.3 實驗分組
7.3 方法
    7.3.1 裸鼠腫瘤模型構(gòu)建
    7.3.2 裸鼠灌胃
    7.3.3 免疫印跡
    7.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
7.4 結(jié)果
    7.4.1 雙藥聯(lián)合抑制小鼠體內(nèi)腫瘤生長
    7.4.2 雙藥聯(lián)合抑制腫瘤生長的分子機制探究
7.5 小節(jié)與討論 第8章 總結(jié) 參考文獻 致謝 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Artemisinin-Second Career as Anticancer Drug?[J]. Thomas Efferth.  World Journal of Traditional Chinese Medicine. 2015(04)
[2]Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記與Hoechst33342/PI雙標(biāo)記流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡的比較[J]. 張偉,梁智輝.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(11)



本文編號：3668743