背景:結(jié)直腸癌（Colorectal cancer,CRC）是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,目前,手術(shù)治療和化療仍然是臨床上常用的治療手段。隨著靶向藥物的出現(xiàn),盡管其預(yù)后得到一定改善,但目前生存時(shí)間依舊沒(méi)有突破30個(gè)月。長(zhǎng)鏈非編碼 RNAs（LncRNAs（Long noncoding RNAs））是一種長(zhǎng)度超過(guò) 200nt 的非編碼RNA,一直被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄“噪音”。但近年來(lái)多項(xiàng)研究表明LncRNAs表達(dá)和功能的異常與多種疾病相關(guān),可通過(guò)影響細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥等生物學(xué)行為導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生。目前為止,已有多個(gè)結(jié)直腸癌相關(guān)lncRNA被發(fā)現(xiàn),但仍有很多的表達(dá)、功能及其機(jī)制不完全明確,需要進(jìn)一步深入研究。鑒于LncRNA在細(xì)胞活動(dòng)中的重要作用,對(duì)結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)LncRNA的功能及其與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系的研究,探究其上下游可能的效應(yīng)分子,明確其可能的信號(hào)通路,可為結(jié)直腸癌的生物靶向治療提供新的治療靶點(diǎn),可能改善結(jié)直腸癌的預(yù)后。目的:利用生物信息學(xué)挖掘新的結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)lncRNA,研究候選lncRNA FAM222A-AS1在結(jié)直腸癌中差異表達(dá)的臨床意義,分析其對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
基金資助
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1. 前言
2. 材料與方法
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 試劑
        2.2.2 溶液的配制
    2.3 技術(shù)路線
    2.4 FAM222A-AS1在結(jié)直腸癌中的篩選及預(yù)后價(jià)值
    2.5 FAM83H-AS1和FAM222A-AS1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移的影響
        2.5.1 細(xì)胞株
        2.5.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.5.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.5.4 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)及凍存
        2.5.5 引物及siRNA設(shè)計(jì)及合成
        2.5.6 qRT-PCR檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞株的lncRNA表達(dá)
        2.5.7 RNA干擾實(shí)驗(yàn)
        2.5.8 CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.5.9 Transwell細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)
        2.5.10 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.5.11 FAM222A-AS1細(xì)胞定位
        2.5.12 FAM222A-AS1干擾穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.5.13 FAM222A-AS1過(guò)表達(dá)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染
        2.5.14 FAM222A-AS1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株體內(nèi)體外功能試驗(yàn)
    2.6 結(jié)直腸癌細(xì)胞中FAM222A-AS1的分子機(jī)制探索
        2.6.1 實(shí)驗(yàn)儀器和耗材
        2.6.2 磷酸化抗體芯片
        2.6.3 Werstern Blot驗(yàn)證
        2.6.4 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)相互作用靶基因
    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)差異表達(dá)lncRNA
    3.2 候選lncRNA在結(jié)直腸癌中的差異表達(dá)
    3.3 候選lncRNA與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的相關(guān)性
    3.4 候選lncRNA有效引物和siRNA
    3.5 候選lncRNA在細(xì)胞中的表達(dá)情況
    3.6 FAM83H-AS1和FAM222A-AS1對(duì)細(xì)胞增殖的影響
    3.7 FAM222A-AS1表達(dá)對(duì)細(xì)胞侵襲和遷移的影響
    3.8 FAM222A-AS1細(xì)胞定位
    3.9 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建
    3.10 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株細(xì)胞功能驗(yàn)證
    3.11 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
    3.12 磷酸化抗體芯片實(shí)驗(yàn)和WB實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果
    3.13 生物信息預(yù)測(cè)FAM222A-AS1靶基因
4. 討論
5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 LncRNA在結(jié)直腸癌中的作用機(jī)制研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷及學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Long noncoding RNA RP4 functions as a competing endogenous RNA through miR-7-5p sponge activity in colorectal cancer[J]. Mu-Lin Liu,Qiao Zhang,Xiao Yuan,Long Jin,Li-Li Wang,Tao-Tao Fang,Wen-Bin Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(09)



本文編號(hào)：3669557