研究目的:探討Pin1在黑色素瘤干細(xì)胞中的作用及Pin1靶向藥物治療的潛在作用,為黑色素瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和開(kāi)拓新的思路。研究方法:1.通過(guò)包裝PIN1 shRNA慢病毒、感染黑色素瘤細(xì)胞及藥物篩選,獲得穩(wěn)定敲減Pin1基因的黑色素瘤細(xì)胞株。用Western Blot和流式細(xì)胞術(shù)探索敲減黑色素瘤細(xì)胞Pin1基因后干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)水平。2.敲減黑色素瘤細(xì)胞Pin1基因,利用軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)探索黑色素瘤細(xì)胞克隆增殖和采用黑色素瘤干細(xì)胞微球形成方法探討干細(xì)胞微球形成能力。3.在裸鼠后翼一側(cè)皮下注射1*10^6個(gè)敲減Pin1基因的黑色素瘤細(xì)胞,另一側(cè)注射同數(shù)量的對(duì)照細(xì)胞,探討敲減Pin1基因的黑色素瘤細(xì)胞裸鼠體內(nèi)致瘤性。4.敲減Pin1基因的黑色素瘤細(xì)胞梯度稀釋行裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)探討黑色素瘤干細(xì)胞的致瘤性。5.裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組裸鼠尾靜脈注射2*10^6個(gè)敲減Pin1基因的黑色素瘤細(xì)胞,對(duì)照組注射同數(shù)量的對(duì)照細(xì)胞,探討黑色素瘤細(xì)胞Pin1基因敲減后裸鼠肺部轉(zhuǎn)移能力。6.黑色素瘤細(xì)胞注射裸鼠皮下,成瘤后隨機(jī)分組,單藥處理分2組,聯(lián)合用藥處理分4組,用Pin1抑制劑ATRA或... 

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
附錄
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1.材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要試劑及試劑盒
        1.3 主要抗體
        1.4 主要試劑溶液及配制
        1.5 慢病毒表達(dá)系統(tǒng)
    2.方法
        2.1 普通細(xì)胞培養(yǎng)及黑色素瘤干細(xì)胞成球培養(yǎng)
        2.2 慢病毒的制備
        2.3 慢病毒感染黑色素瘤細(xì)胞及篩選
        2.4 軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.5 Westernblot
        2.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物
        2.7 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
        2.8 動(dòng)物模型的構(gòu)建
        2.9 數(shù)據(jù)分析
結(jié)果
    1.Pin1基因干擾對(duì)黑色素瘤干細(xì)胞的影響
        1.1 敲減Pin1基因下調(diào)NANOG干性標(biāo)志物和上調(diào)MITF分化相關(guān)標(biāo)志物
        1.2 敲減Pin1基因同時(shí)下調(diào)CD271和ALDH干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)
        1.3 敲減Pin1基因抑制黑色素瘤細(xì)胞克隆增殖及干細(xì)胞的微球形成
    2.黑色素瘤細(xì)胞敲減Pin1基因抑制腫瘤生長(zhǎng)
    3.敲減Pin1基因的黑色素瘤細(xì)胞梯度稀釋裸鼠致瘤的研究
    4.黑色素瘤細(xì)胞敲減Pin1基因抑制裸鼠肺部轉(zhuǎn)移
    5.Pin1抑制劑ATRA抑制裸鼠黑色素瘤細(xì)胞皮下荷瘤的生長(zhǎng)
    6.Pin1抑制劑ATRA聯(lián)合Vemurafenib治療黑色素瘤的研究
    7.人黑色素瘤組織芯片檢測(cè)Pin1的表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3664633