發(fā)布時(shí)間：2022-02-18 18:30

　　槐耳醇提取物聯(lián)合西侖吉肽調(diào)控整合素β5抑制胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究目的建立從槐耳醇粗提取物中富集有效成分的方法,并評(píng)估槐耳醇提取物（TMTF）有效成分的藥物毒性和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移效果。重點(diǎn)圍繞TMTF抑制胃癌轉(zhuǎn)移作用靶點(diǎn),聚焦其聯(lián)合西侖吉肽調(diào)控整合素β5阻滯細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)信號(hào)通路的機(jī)制。為中藥聯(lián)合整合素類抑制劑的抗腫瘤原理提供理論基礎(chǔ)。方法1.槐耳醇粗提取物純化實(shí)驗(yàn):通過(guò)柱層析方法和超聲-乙醇萃取法,富集黃酮類化合物,并以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品,采用NaNO2-Al（NO3）3法測(cè)定含量。2.急性毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn):選取野生型AB品系斑馬魚(yú)一次性給予TMTF 25μg/mL,第3天觀察斑馬魚(yú)各器官的反應(yīng)情況,以確定毒性發(fā)生率。3.胃癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移抑制實(shí)驗(yàn):顯微注射CM-Dil標(biāo)記的人胃癌細(xì)胞至2dpf正常野生型AB品系斑馬魚(yú)卵黃囊內(nèi),同急性毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)給藥,培養(yǎng)至5 dpf,熒光強(qiáng)度評(píng)價(jià)槐耳提取物對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移抑制的作用。4.細(xì)胞克隆形成、增殖、遷移、侵襲實(shí)驗(yàn):借助CCK8試劑、劃痕插件和細(xì)胞小室,觀察胃癌細(xì)胞在TMTF藥物作用下的細(xì)胞克隆大小和數(shù)量、細(xì)胞增殖速度、遷移距離和細(xì)胞穿膜數(shù)... 

【文章來(lái)源】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 槐耳醇提取物(TMTF)的提取工藝優(yōu)化
    一、材料與方法
        (一) 實(shí)驗(yàn)材料
            1. 槐耳醇粗提物
            2. 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            3. 主要儀器
            4. 主要實(shí)驗(yàn)試劑和耗材以及配制試劑
        (二) 實(shí)驗(yàn)方法
            1. TMTF的樣本制備
            2. TMTF的純化方法
            3. TMTF液質(zhì)聯(lián)用前樣本處理
            4. 總黃酮含量測(cè)定方法
            5. 急性毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)
            6. 胃癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移抑制實(shí)驗(yàn)
            7. 統(tǒng)計(jì)分析
    二、結(jié)果
        (一) 槐耳正丁醇提取物有效部位-TMTF的純化
        (二) TMTF的液質(zhì)聯(lián)用分析
        (三) TMTF的藥物毒性實(shí)驗(yàn)及對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制作用
    三、分析與討論
        (一) 槐耳醇提取物的純化及藥物毒性分析
        (二) 不足與展望
第二部分 槐耳醇提取物聯(lián)合西侖吉肽調(diào)控整合素β5抑制胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究
    一、材料與方法
        (一) 實(shí)驗(yàn)材料
            1. 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            2. 主要儀器
            3. 主要實(shí)驗(yàn)試劑和耗材以及配制試劑
        (二) 實(shí)驗(yàn)方法
            1. 細(xì)胞培養(yǎng)
            2. 細(xì)胞活力檢測(cè)
            3. 免疫印跡
            4. mRNA表達(dá)水平測(cè)定
            5. 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            6. 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            7. 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
    二、結(jié)果
        (一)TMTF對(duì)整合素家族蛋白的影響
        (二) 整合素家族在胃癌數(shù)據(jù)庫(kù)中的表達(dá)分析及預(yù)后意義
        (三) 整合素β5在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)差異及其在胃癌細(xì)胞中的作用
        (四) 整合素β5與整合素家族及EMT相關(guān)蛋白的互作關(guān)系
        (五) TMTF聯(lián)合西侖吉肽抑制胃癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)
    三、分析與討論
        (一) 整合素β5是影響胃癌轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素
        (二) TMMF聯(lián)合西侖吉肽協(xié)同調(diào)控整合素β5及EMT相關(guān)蛋白抑制胃癌轉(zhuǎn)移
        (三) 不足與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附圖
附表
致謝
文獻(xiàn)綜述 槐耳提取物抗腫瘤的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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