目的觀察NF-κB活化因子受體（RANK）及其配體（RANKL）通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞耐藥性的影響,并研究其機(jī)制。方法培養(yǎng)人乳腺癌野生型細(xì)胞系MCF-7及其同源的阿霉素耐藥細(xì)胞系MCF7/ADR,用免疫熒光技術(shù)及Western blot檢測(cè)MCF-7及MCF7/ADR中RANK蛋白表達(dá)情況;分別用50ng/ml和100ng/ml的RANKL作用于兩種細(xì)胞,用Western blot檢測(cè)作用前后兩種細(xì)胞中乙醛脫氫酶1（ALDH1）蛋白表達(dá)情況;在100ng/ml RANKL作用下的MCF-7細(xì)胞中加入500ng/ml骨保護(hù)素OPG,用Western blot檢測(cè)作用前后MCF-7細(xì)胞中乙醛脫氫酶1（ALDH1）蛋白表達(dá)情況。應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)三種濃度的RANKL作用前后MCF-7細(xì)胞在阿霉素作用下的細(xì)胞存活率。構(gòu)建RANK過(guò)表達(dá)慢病毒載體并感染MCF-7細(xì)胞,同時(shí)感染無(wú)義序列作為陰性對(duì)照,空白對(duì)照組不作處理。結(jié)果免疫熒光技術(shù)及Western blot結(jié)果顯示,RANK蛋白在MCF7/ADR中的表達(dá)較MCF-7均明顯增強(qiáng)（P<0.05）;且MCF7/ADR細(xì)胞中ALDH1蛋白表達(dá)量明顯高... 

【文章來(lái)源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫熒光顯微實(shí)驗(yàn)中MCF-7與MCF7/ADR的RANK蛋白表達(dá)

2.1 CCK-8法檢測(cè)不同濃度的RANKL作用前后對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響K-8法檢測(cè)不同濃度的RANKL干預(yù)作用前后MCF-7細(xì)胞增殖的影響結(jié)果，如圖3（左示，在阿霉素作用48小時(shí)后，隨著阿霉素濃度的升高，RANKL作用后的MCF-7細(xì)胞存較未干預(yù)組明顯升高。而隨著RANKL濃度的升高，表現(xiàn)出明顯的劑量依賴性，細(xì)胞存越高。在阿霉素濃度為2.5μmol/L和5μmol/L時(shí)，RANKL50ng/ml組和100ng/ml組較未組的細(xì)胞存活率具有明顯差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2.2 加入RANKL的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑OPG作用前后對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響入RANKL的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑OPG作用進(jìn)行對(duì)比（圖3右），在阿霉素作用48小時(shí)后，同霉素濃度下，加入RANKL100ng/ml及OPG500ng/ml的雙重作用組與RANKL100ng/m較，MCF-7細(xì)胞的存活率明顯下降，當(dāng)阿霉素濃度為2.5μmol/L和5μmol/L時(shí)，差異具計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且RANKL100ng/ml及OPG 500ng/ml雙重作用組與未干預(yù)組存并無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]人乳腺癌多耐藥細(xì)胞株中ALDH1,P-gp及CD44v6的表達(dá)研究[J]. 洪理泉,柯衛(wèi)鋒,潘峰,陳兆軍,劉玉華.  中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2012(02)



本文編號(hào)：3630228