目的觀察沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（silent information regulator2 homolog 1,SIRT1）基因沉默對人甲狀腺乳頭狀癌（thyroid papillary carcinoma,TPC）細胞株TPC-1生物學功能的影響。本研究以人甲狀腺乳頭狀癌細胞株TPC-1為模型,通過SIRT1siRNA干擾SIRT1基因的表達,使SIRT1在TPC-1細胞中表達沉默。同時通過檢測細胞增殖、衰老、凋亡及周期的改變,從而研究SIRT1對人甲狀腺乳頭狀癌細胞株TPC-1生物學功能的影響,以進一步探索SIRT1在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用機制。方法1.首先利用SIRT1siRNA技術(shù)下調(diào)SIRT1在甲狀腺乳頭狀癌細胞株TPC-1中的表達:分別利用多個不同濃度、不同序列的SIRT1siRNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人甲狀腺乳頭狀癌細胞株TPC-1中,干擾SIRT1在TPC-1中的表達,同時應(yīng)用qRT-PCR方法檢測SIRT1siRNA的干擾效率,篩選出干擾效率最強的SIRT1siRNA,并用Western blot驗證SIRT1蛋白的表達情況。2.各實驗分成3組:利用SIRT1siRN... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學福建省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

β半乳糖苷酶染色檢測細胞衰老

A：TPC-1 組（×400）；B：NCsiRNA 組（×400）；C：SIRT1siRNA 組（×400）；D：SIRT1 沉默對TPC-1 細胞凋亡的影響（×400）。** P＜0.05 vs.空白組或陰性對照組。圖 5 Hoechst 染色法檢測細胞凋亡Fig.5 Hoechst staining was used to detect apoptosis5 流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染組 TPC-1 的細胞凋亡及周期變化5.1 細胞凋亡本實驗進一步利用了流式細胞技術(shù)檢測了細胞凋亡的變化。各組細胞亡比例結(jié)果如圖 6 所示，SIRT1siRNA 處理組的總凋亡細胞比例（65.22%±0.41%，圖 6C）較 TPC-1 組（5.84%±0.16%，圖 6A）及 NCsiRNA 組（5.50.05%，圖 6B）的總凋亡細胞比例明顯升高（P<0.05，圖 6D）。

A:TPC-1 組；B:NCsiRNA 組；C:SIRT1siRNA 組；D:SIRT1 沉默對 TPC-1 細胞凋亡的影響。** P＜0.vs.空白組或陰性對照組。圖 6 流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡Fig.6 Flow cytometry was used to detect apoptosis5.2 細胞周期利用了流式細胞技術(shù)對細胞周期變化檢測后，其結(jié)果顯示，SIRT1siR處理組的 G1 期細胞比例（67.99%±0.87%，圖 7C）較 TPC-1 組（64.39%±0.77%，圖 7A）及 NCsiRNA 組（64.08%±0.53%，圖 7B）的 G1 期細胞比例顯升高（P<0.05，圖 7D），提示 SIRT1siRNA 處理組的細胞出現(xiàn)了 G1 期阻滯。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及其意義[J]. 吳文藝,張麗婷,傅德強,黃種心,王朝陽,邱建龍.  中華實驗外科雜志. 2015 (04)

博士論文
[1]SIRT1表達對大鼠胰島β細胞凋亡及非酒精性脂肪肝病形成的影響[D]. 鄧向群.華中科技大學 2007



本文編號：3629829