目的MicroRNA芯片顯示miR-551b-3p在胃癌組織中表達(dá)下調(diào),但是其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制尚不明確。本研究以miR-551b-3p為焦點(diǎn),深入探討miR-551b-3p在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及在胃癌分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中所處位置。方法1.采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)miR-551b-3p在胃癌細(xì)胞和胃正常粘膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平,胃癌和癌旁組織中miR-551b-3p的表達(dá)差異,并分析其與胃癌臨床病理特征之間的相關(guān)性。2.采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和慢病毒感染技術(shù)建立miR-551b-3p過(guò)表達(dá)胃癌細(xì)胞模型。通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定、平板集落形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡測(cè)定、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)、裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)等分析上調(diào)miR-551b-3p表達(dá)后對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響。3.聯(lián)合RNA-seq、生物信息學(xué)方法篩選mi R-551b-3p的靶基因,利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-551b-3p上游lncRNA。通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-551b-3p和靶基因、上游lncRNA和miR-551b-3p的相互作用。采用Western blot技術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 miR-551b-3p在胃癌中的表達(dá)及臨床意義
    1 材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 胃癌組織標(biāo)本
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞和組織總RNA的提取
        2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞和組織中miR-551b-3p的表達(dá)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 miR-551b-3p在胃癌細(xì)胞中低表達(dá)
        3.2 miR-551b-3p在胃癌組織中低表達(dá)
        3.3 miR-551b-3p表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性
    4 討論
第二部分 miR-551b-3p對(duì)胃癌生物學(xué)行為的調(diào)控作用
    1 材料
        1.1 慢病毒載體
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 主要試劑
        1.5 主要儀器
        1.6 主要溶液的配制方法
    2 方法
        2.1 構(gòu)建miR-551b-3p功能獲得的細(xì)胞模型
        2.2 過(guò)表達(dá)miR-551b-3p后的體外功能實(shí)驗(yàn)
        2.3 過(guò)表達(dá)miR-551b-3p后的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 胃癌細(xì)胞miR-551b-3p過(guò)表達(dá)模型的構(gòu)建
        3.2 miR-551b-3p抑制胃癌細(xì)胞體外增殖
        3.3 miR-551b-3p促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡
        3.4 miR-551b-3p抑制胃癌細(xì)胞體外遷移和侵襲
        3.5 miR-551b-3p抑制胃癌細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)
    4 討論
第三部分 miR-551b-3p參與胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究
    1 材料
        1.1 質(zhì)粒
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 主要溶液的配制方法
    2 方法
        2.1 miR-551b-3p靶基因的篩選
        2.2 熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)miR-551b-3p與TMPRSS4的結(jié)合
        2.3 Westernblot檢測(cè)miR-551b-3p對(duì)胃癌細(xì)胞中TMPRSS4表達(dá)的影響
        2.4 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-551b-3p相關(guān)的lncRNA
        2.5 熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)lncRNASMARCC2與miR-551b-3p的結(jié)合
        2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞中l(wèi)ncRNASMARCC2的表達(dá)..
        2.7 Westernblot檢測(cè)lncRNASMARCC2對(duì)胃癌細(xì)胞TMPRSS4表達(dá)的影響
        2.8 LncRNASMARCC2對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移的影響
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 miR-551b-3p的可能靶基因-TMPRSS
        3.2 TMPRSS4是miR-551b-3p的靶基因
        3.3 miR-551b-3p負(fù)性調(diào)控TMPRSS4的表達(dá)
        3.4 生物信息學(xué)篩選miR-551b-3p相關(guān)的lncRNA
        3.5 LncRNASMARCC2在胃癌細(xì)胞中高表達(dá)
        3.6 LncRNASMARCC2與miR-551b-3p相互結(jié)合
        3.7 LncRNASMARCC2負(fù)性調(diào)控miR-551b-3p的表達(dá)
        3.8 LncRNASMARCC2調(diào)控TMPRSS4的表達(dá)
        3.9 LncRNASMARCC2促進(jìn)胃癌細(xì)胞體外增殖和遷移
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
英文縮略詞索引
在學(xué)期間主要科研工作
文獻(xiàn)回顧
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-551b-3p在胰腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 郭欣,呂小慧,呂行,陳勇,陳蘆斌.  國(guó)際消化病雜志. 2016(06)
[2]miR-551b-3p在胃癌組織中低表達(dá)并抑制胃癌細(xì)胞系HGC-27的增殖、遷移和侵襲[J]. 溫馨,翟頔,王芳,余佳.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2016(05)
[3]Evolutionary annotation of conserved long non-coding RNAs in major mammalian species[J]. BU DeChao,LUO HaiTao,JIAO Fei,FANG ShuangSang,TAN ChengFu,LIU ZhiYong,ZHAO Yi.  Science China（Life Sciences）. 2015(08)
[4]中國(guó)胃癌發(fā)病率及死亡率研究進(jìn)展[J]. 鄒文斌,李兆申.  中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志. 2014(04)
[5]我國(guó)胃癌防治研究三十年回顧[J]. 季加孚.  中國(guó)腫瘤臨床. 2013(22)
[6]DNA and histone methylation in gastric carcinogenesis[J]. Danielle Queiroz Calcagno,Carolina Oliveira Gigek,Elizabeth Suchi Chen,Rommel Rodriguez Burbano,Marília de Arruda Cardoso Smith.  World Journal of Gastroenterology. 2013(08)
[7]利用芯片技術(shù)篩選肝癌早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)的microRNA[J]. 黃冠群,孫建,簡(jiǎn)志祥,區(qū)應(yīng)亮,侯寶華,區(qū)鑫銳.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2011(10)

博士論文
[1]miR-107基因遺傳變異與胃癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)聯(lián)性研究及其分子機(jī)制探討[D]. 王適之.南京醫(yī)科大學(xué) 2012

碩士論文
[1]胃癌發(fā)生相關(guān)的miRNA的篩選及miR-196a的功能學(xué)研究[D]. 徐冬云.第二軍醫(yī)大學(xué) 2015
[2]原發(fā)性肝癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)microRNA的篩選及應(yīng)用[D]. 鄧治亮.南方醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3605314