癌癥已成為當(dāng)前人類死亡的主要疾病,而全球癌癥發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢(shì),世界衛(wèi)生組織發(fā)布的報(bào)告顯示2012年全球有1400萬(wàn)人被診斷患癌,罹患人數(shù)最多的3大癌癥分別是肺癌（180萬(wàn)）、乳癌（170萬(wàn)）、大腸癌（140萬(wàn)）。每年全球有420萬(wàn)人死于癌癥。在2012年,全球新增癌癥病例中超過(guò)50%的患者,來(lái)自亞洲,而他們中的大部分發(fā)生在中國(guó)。此外,中國(guó)也是新增肝癌病例的主要國(guó)家,由乙型肝炎引起的肝癌中國(guó)排在全球首位。因此,深入揭示癌癥發(fā)病機(jī)制顯得越來(lái)越重要而緊迫,這將有助于開(kāi)發(fā)更多而有效的癌癥治療藥物。PPARα屬于過(guò)氧化物酶體增殖劑激活受體（PPARs）家族中的一員,它在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、腫瘤發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用。惡性腫瘤的主要特征是細(xì)胞異常增生并抑制細(xì)胞凋亡。Bcl2家族蛋白包括促進(jìn)細(xì)胞存活蛋白（Bcl2,Bcl-xl,Mcl-1）及促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白（Bax,Bad,Bim）�；诖�,PPARα與抗凋亡Bcl2家族蛋白相關(guān)性機(jī)制依然不清楚。本研究發(fā)現(xiàn):PPARα具有E3泛素化連接酶新功能并誘導(dǎo)底物Bcl2蛋白泛素化、降解,從而增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡并降低其存活率。顯著性發(fā)現(xiàn)... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章緒論
    1.1 過(guò)氧化物酶體增殖劑激活受體 Α（PPAR�。�
        1.1.1 PPARα 概論
        1.1.2 PPARα 和腫瘤
    1.2 E3泛素化連接酶
        1.2.1 E3泛素化連接酶概論
        1.2.2 指環(huán)結(jié)構(gòu)域（RING）的一般特征
        1.2.3 大多數(shù)指環(huán)結(jié)構(gòu)域蛋白調(diào)節(jié)泛素的轉(zhuǎn)移
        1.2.4 鑒定E3泛素化連接酶是非常重要的
        1.2.5 鑒定出E3泛素化連接酶的底物是非常重要的
    1.3 B淋巴細(xì)胞瘤-2 基因（BCL2）
        1.3.1 Bcl2概論
        1.3.2 Bcl2和腫瘤
    1.4 本研究的意義
    1.5 主要研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第二章 PPARα 降低Bcl2蛋白水平
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系以及質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增和提取
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.4 細(xì)胞加藥物處理
        2.2.5 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.6 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核分離提取
        2.2.7 細(xì)胞蛋白濃度的測(cè)定
        2.2.8 蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)目標(biāo)蛋白含量變化
        2.2.9PPARα 對(duì)Bcl2基因水平的影響
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 PPARα 在不同細(xì)胞系中的表達(dá)
        2.3.2 PPARα 基因沉默增加Bcl2蛋白水平
        2.3.3 PPARα 基因沉默后，Bcl2的半衰期顯著延長(zhǎng)
        2.3.4 過(guò)表達(dá)PPARα 顯著降低內(nèi)源性和外源性Bcl2蛋白水平
        2.3.5 PARs家族中只有PPARα 降低Bcl2蛋白水平
        2.3.6 PARα 對(duì)Bcl2的基因表達(dá)無(wú)影響
        2.3.7 PPARα 依賴蛋白酶體信號(hào)降解Bcl2蛋白
        2.3.8 PPARα 誘導(dǎo)Bcl2降解，縮短其半衰期
        2.3.9 PPARα 激活劑對(duì)Bcl2蛋白水平基本無(wú)影響
    2.4 本章小結(jié)
第三章 PPARα 作為泛素化連接酶誘導(dǎo)Bcl2泛素化降解
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和質(zhì)粒
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增和提取
        3.2.2 構(gòu)建PPARα/C102A點(diǎn)突變質(zhì)粒
        3.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        3.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.5 細(xì)胞加藥物處理
        3.2.6 細(xì)胞總蛋白提取
        3.2.7 變性免疫共沉淀
        3.2.8 LC/MS/MS分析PPARα 誘導(dǎo)Bcl2泛素化位點(diǎn)
        3.2.9 體外泛素化
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 PPARα 顯著增加內(nèi)源性和外源性Bcl2的泛素化
        3.3.2 PPARα 沉默抑制Bcl2的泛素化
        3.3.3 PPARα 蛋白結(jié)構(gòu)中包含RING結(jié)構(gòu)域
        3.3.4 LC/MS/MS分析PPARα 誘導(dǎo)K48-連接的多聚泛素形成
        3.3.5 PPARα 體外泛素化Bcl2
        3.3.6 PPARα/C102A突變體對(duì)Bcl2蛋白的半衰期無(wú)影響
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PPARα 和Bcl2相互作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)所需質(zhì)粒
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增和提取
        4.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.4 細(xì)胞總蛋白提取
        4.2.5 免疫共沉淀
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 PPARα 與Bcl2生理上相互綁定
        4.3.2 PPARα 與Bcl2的BH3結(jié)構(gòu)域相互綁定
        4.3.3 PPARα/C102是PPARα 與Bcl2相互綁定的關(guān)鍵位點(diǎn)
    4.4 本章小結(jié)
第五章 Bcl2的22位賴氨酸殘基是泛素化關(guān)鍵位點(diǎn)
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和質(zhì)粒
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增和提取
        5.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.2.4 細(xì)胞處理
        5.2.5 細(xì)胞總蛋白提取
        5.2.6 Western blot，免疫沉淀分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.3.1 PPARα 不能夠泛素化降解Bcl2/K22R突變體
        5.3.2 PPARα 對(duì)Bcl2/K22R突變體半衰期基本無(wú)影響
    5.4 本章小結(jié)
第六章 PPARα/Bcl2信號(hào)增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和質(zhì)粒
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增和提取
        6.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        6.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        6.2.4 篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
        6.2.5 MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率
        6.2.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        6.2.7 細(xì)胞總蛋白提取
        6.2.8 Western blot分析
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        6.3.1 在化療藥物刺激下，PPARα 基因沉默增加細(xì)胞存活率
        6.3.2 C102位點(diǎn)對(duì)PPARα 降低細(xì)胞存活率是十分關(guān)鍵的
        6.3.3 在化療藥物刺激下， PPARα 激活下游凋亡信號(hào)
        6.3.4 在化療藥物刺激下，PPARα 基因沉默降低細(xì)胞凋亡
        6.3.5 C102位點(diǎn)是PPARα 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵位點(diǎn)
    6.4 本章小結(jié)
第七章 總結(jié)
    7.1 PPARΑ 誘導(dǎo)BCL2蛋白水平的降低
    7.2 PPARΑ 作為泛素化連接酶誘導(dǎo)BCL2泛素化降解
    7.3 PPARΑ 和BCL2相互作用
    7.4 BCL2的22位賴氨酸殘基是PPARΑ 誘導(dǎo)BCL2泛素化的關(guān)鍵位點(diǎn)
    7.5 PPARΑ/BCL2信號(hào)增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間的學(xué)術(shù)成果
參與課題



本文編號(hào)：3574591