背景結(jié)直腸癌是消化道系統(tǒng)常見(jiàn)腫瘤之一,近幾年發(fā)展中國(guó)家發(fā)病率越來(lái)越高,50歲以下發(fā)病率也越來(lái)越高,其發(fā)病率和死亡率之高嚴(yán)重威脅人類的健康。結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,從腸道環(huán)境因素到多種基因突變都參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展,其中,膽汁酸在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用也越來(lái)越明確,特別是次級(jí)膽汁酸,能夠促使結(jié)直腸癌上皮細(xì)胞中的DNA發(fā)生損傷,進(jìn)而變異,最后導(dǎo)致癌變。人類回腸脂肪酸結(jié)合蛋白（Fatty Acid Binding Protein 6,FABP6）是腸道上皮細(xì)胞內(nèi)唯一結(jié)合膽汁酸的蛋白,參與膽汁酸的消化吸收、代謝和肝腸循環(huán),能夠減輕膽汁酸對(duì)腸道上皮的毒性作用,但人類的脂肪酸結(jié)合蛋白有兩種同工型蛋白-1型和2型,已往的研究表明2型脂肪酸結(jié)合蛋白在結(jié)直腸癌中高表達(dá),參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展,但最近的研究表明在結(jié)直腸癌中高表達(dá)的是1型脂肪酸結(jié)合蛋白,這種蛋白較典型的短亞型在N端多49個(gè)氨基酸,因此又稱為長(zhǎng)片段亞型,在本文中為區(qū)分兩種亞型蛋白,稱長(zhǎng)片段為FABP6-L。兩者在細(xì)胞中的分布,脂質(zhì)的流動(dòng)性,還有結(jié)構(gòu)方面有很大不同。本課題針對(duì)兩種同工型蛋白在結(jié)腸癌中的作用及可能的分子機(jī)制進(jìn)行研究,以期為揭示結(jié)... 

【文章來(lái)源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

正常結(jié)腸上皮細(xì)胞及9種結(jié)腸癌細(xì)胞系中FABP6的mRNA水平的相對(duì)含量，按照順序依次為NCM460、SW480、Caco2、HCT8、LOVO、HT29、LS174、THCT116、RKO、SW620

圖 2 FABP6 在 9 中結(jié)腸癌細(xì)胞系中蛋白水平的相對(duì)表達(dá)含量2.3 重組質(zhì)粒 pEGFP-FABP6 構(gòu)建結(jié)果利用 Primer 5 軟件設(shè)計(jì)能夠特異性擴(kuò)增 FABP6 轉(zhuǎn)錄本的引物，并經(jīng)過(guò) BLAST比對(duì)，由上海生工生物工程有限公司合成，培養(yǎng) HCT116 細(xì)胞，用 TRIzol 提取細(xì)胞

述步驟進(jìn)行質(zhì)粒提取。過(guò)表達(dá)質(zhì)粒 pEGFP-FABP6 經(jīng)上海生工測(cè)序鑒定，與 FABP6Transcript2 基因堿基序列比對(duì)之后，結(jié)果正確，見(jiàn)圖 3。圖3 質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果 A為經(jīng)上海生工測(cè)序后的pEGFP-FABP6質(zhì)粒圖譜；B為以HCT116 cDNA為模板擴(kuò)增的 FABP6 產(chǎn)物，大小為 386bp；C 為雙酶切后連接產(chǎn)物 pEGFP-FABP6 質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果，大小為 386bp；D 為 pEGFP-FABP6 質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果。2.4 CCK8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) FABP6 對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖情況的影響在 HCT116 和 HCT8 結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染兩組質(zhì)粒，設(shè)置空白細(xì)胞組，過(guò)表達(dá)組為實(shí)驗(yàn)組，NC 組為對(duì)照組。利用倒置熒光顯微鏡觀察熒光蛋白 GFP 的表達(dá)情況，轉(zhuǎn)染效率在 80%左右，證明轉(zhuǎn)染成功（見(jiàn)圖 4）。利用紫外分光光度計(jì)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞在 450nm 處的吸光度值來(lái)判斷細(xì)胞的增殖情況。與對(duì)照組相比

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3560916