目的:膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,其高發(fā)病率和易復(fù)發(fā)特征使死亡率呈逐年上升趨勢(shì)。雖然外科技術(shù)在不斷地更新與發(fā)展,輔助治療也在推陳出新,但晚期膀胱癌的5年生存率仍然不理想。膀胱癌的治療策略仍然是全世界研究者面臨的一大嚴(yán)峻課題。膀胱癌的發(fā)病因素十分復(fù)雜,具體分子機(jī)制目前尚不清楚。大量證據(jù)表明,環(huán)狀RNA（circ RNAs）在癌癥的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。然而,在膀胱癌中circ RNAs作用機(jī)制的相關(guān)研究較少。本文通過探究circ FAM114A2在膀胱癌中的作用機(jī)制,旨在為膀胱癌的治療提供新的方向。方法:從RNA測(cè)序數(shù)據(jù)中篩選出差異表達(dá)的circ RNAs,通過q RT-PCR從膀胱癌組織和細(xì)胞中驗(yàn)證其表達(dá)量,將差異性表達(dá)最明顯的circ RNA確定為候選研究目標(biāo)。并用q RT-PCR檢測(cè)目標(biāo)circ RNA相關(guān)的mi RNAs和m RNAs在人體組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平。用FISH實(shí)驗(yàn)檢測(cè)circ RNA和mi RNA的表達(dá)位置。用RNA pull-down實(shí)驗(yàn)和luciferase reporter實(shí)驗(yàn)研究特異性circ RNA、mi RNA和m RNA之間的相互作用。通過... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

膀胱癌的發(fā)病率與死亡率

南京大學(xué)碩士學(xué)位論文10膀胱癌的分期與其他腫瘤不同，根據(jù)腫瘤浸潤深度可將膀胱癌分為兩種類型：非肌肉浸潤性膀胱癌(Tis、Ta、T1)和肌肉浸潤性膀胱癌(T2、T3、T4)[4]（圖2）。圖2膀胱癌分期。Tis是發(fā)生于膀胱黏膜層的扁平腫瘤，即原位癌；Ta期是腫瘤呈乳頭狀突起，基地部未突破黏膜層；T1期腫瘤基地深入固有層；T2期腫瘤浸潤深度達(dá)膀胱逼尿�。═2a腫瘤浸潤深度為淺肌層（內(nèi)1/2）；T2b腫瘤浸潤深度為深肌層（外1/2）；T3期腫瘤浸潤深度超過膀胱全層達(dá)膀胱周圍脂肪組織（T3a顯微鏡下發(fā)現(xiàn)膀胱周圍組織浸潤；T3b肉眼可見膀胱周圍組織浸潤）；T4期腫瘤侵犯膀胱外組織或器官（T4a腫瘤侵犯前列腺、精囊、子宮或陰道；T4b腫瘤侵犯盆壁或腹壁）。膀胱癌的侵襲深度對(duì)手術(shù)方式的選擇具有重要指導(dǎo)意義。按照國際指南推薦，早期非肌肉浸潤性膀胱癌采用經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)（transurethralresectionofbladdertumor,TURBT）輔以膀胱灌注化療。其中，雖然原位癌(Tis)是非肌肉浸潤性膀胱癌，但一般分化較差，屬于高度惡性腫瘤，向肌層浸潤進(jìn)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高，因此，應(yīng)將原位癌與其他非肌肉浸潤性膀胱癌（Ta、T1）相區(qū)別。而肌肉浸潤性膀胱癌采用根治性全膀胱切除術(shù)。雖然70%-80%的患者初診為非肌肉浸潤性膀胱癌，但約50%-70%病人將在5年內(nèi)復(fù)發(fā)，其中10%-30%可進(jìn)展為肌肉浸潤性膀胱癌，從而導(dǎo)致較差的預(yù)后和較低的5年生存率[5]。即使在那些接受手術(shù)和化療等最佳治療的肌肉浸潤性膀胱癌患者中，由于腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年

南京大學(xué)碩士學(xué)位論文11總生存率也只有60%[6]。因此，闡明膀胱癌進(jìn)展的分子機(jī)制，將有助于開發(fā)更有效的治療方案，對(duì)提高患者總體生存率具有重要的臨床意義。環(huán)狀RNA(circRNA)是一種新型的非編碼小RNA，其特征是不具有3"端和5"末端，首尾相連形成共價(jià)閉環(huán)結(jié)構(gòu)[7]。1976年Sanger等科學(xué)家在植物類病毒中首次發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了circRNA的存在及共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)[8]。隨后Hus等[9]在真核生物中也發(fā)現(xiàn)了circRNA的存在，但最初這些新的發(fā)現(xiàn)并沒有引起足夠的重視。在接下來的20多年中科學(xué)家們相繼從酵母線粒體及哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了大量circRNA，才逐步認(rèn)識(shí)到廣泛存在的circRNA并非是分子剪接過程中偶然產(chǎn)生的“分子垃圾”，而可能具有某些潛在作用[10-12]。在探索其產(chǎn)生機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，與線性RNA不同，circRNA通常起源于外顯子或內(nèi)含子的反向剪接事件，反向互補(bǔ)序列（包括反向重復(fù)的Alu對(duì)和外顯子跳躍）是circRNA形成的關(guān)鍵因素[13-14]（圖3）[15]。圖3環(huán)狀RNA的剪切形成過程。根據(jù)形成組分不同，circRNA可分為4種類型：外顯子circRNA（ecircRNA）、內(nèi)含子circRNA（ciRNA）、外顯子-內(nèi)含子的circRNA（EIciRNA）以及基因間區(qū)環(huán)狀RNA[16]（圖4）[17]。


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