腫瘤干細胞（cancer stem cell）是腫瘤中一小群有干細胞特性的癌細胞,具有自我更新和多細胞分化等能力,是腫瘤發(fā)生、增殖、遷移和抗放化療的重要原因。發(fā)現(xiàn)特異性的腫瘤細胞干細胞表面標志物,分離鑒定腫瘤于細胞,是研究腫瘤發(fā)生機制及其治療方法的關鍵。CD133和CD117是重要的腫瘤干細胞表面標志分子,參與細胞生長、發(fā)育和腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移等過程,但是其互作蛋白及生物學功能仍需要進一步深入的研究。本論文以果蠅S2細胞為材料,通過RNAi技術阻斷CD133同源基因prominin-like的表達,發(fā)現(xiàn)線粒體外膜蛋白（VDAC）和復合體Ⅰ亞基（NDUFS3）、復合體Ⅳ亞基（COXⅣ）等蛋白表達在prominin-like缺失的前2天顯著降低,第3天后基本恢復到正常水平；復合體Ⅴ（ATP5a）蛋白表達幾乎不受影響。與之相應的,prominin-like缺失細胞的ATP產(chǎn)量在1天和2天后顯著降低,3天后回到正常細胞水平；ROS產(chǎn)量在1天和2天后顯著升高,3天后回到正常細胞水平。表明prominin-like缺失會導致線粒體快速損傷,引起線粒體功能障礙。進一步通過FLP-FRT重組方法和CRISP... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【圖文】：

細胞凋亡途徑示意圖aoo

第二章ＣＤ１３ｙＰｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失導致果購線粒體功能障礙的機制研究，ＲＮＡｉ技術提供了一種快速有效的研究基因功能的新方法。目前ｄ、真菌及植物等生物中構建ＲＮＡｉ技術。??驗材料??驗材料??果蝸Ｓ２細胞，實驗室保存。??．Ｃｏｌｉ?ＤＨ５ａ，胸自?ＴｒａｎｓＧｅｎ?Ｂｉｏｔｅｃｈ?公司。??真核表達質(zhì)粒ｐＡｃ５．１－３ｘｆｌａｇ，實驗室保存。??

兇２．５?ＲＮＡｉ處理不同時間后Ｓ２細胞內(nèi)ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ表達Ｍ??隨后我們通過ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測了?ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ處理后細胞內(nèi)??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白含量變化。結(jié)果如圖２．６所示，與ｍＲＮＡ含量變化相比，其??蛋白含量的改變程度更加顯著，ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白量在ＲＮＡｉ?—天后即大幅度降??低，隨著時間的增加降低量持續(xù)增加，這種蛋白水平的降低同樣可Ｗ持續(xù)４天。??Ｄａｙ！?Ｄａｙ２?Ｄａｙ３?Ｄａｙ４??Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ??Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ??口－ｔｕｂｕ＂ｎ?＜—■？?ｍｍｉｉｉｍ??圖２．６?ＲＮＡｉ處理Ｓ２細胞后ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋Ａ表達Ｍ??通過檢測ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ后Ｓ２細胞內(nèi)ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ和蛋白含量，??我們發(fā)現(xiàn)ＲＮＡｉ技術可Ｗ顯著降低細胞內(nèi)該蛋白的表達量，從而成功建立??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ敲低細胞模型，為后續(xù)實驗的開展提供了良好的實驗材料。??２．４．４?Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失對線粒體相關蛋白表達的影響??通過檢測ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失Ｓ２細胞的細胞增殖、ＡＴＰ產(chǎn)生和ＲＯＳ產(chǎn)生

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J]. Monika Olempska,Patricia Alice Eisenach,Ole Ammerpohl,Hendrik Ungefroren,Fred Fandrich,Holger Kalthoff.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2007(01)



本文編號：3548373