實(shí)驗(yàn)背景:結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤疾病,有著較高的發(fā)病率和死亡率,其排名僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌。研究結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的分子機(jī)制是抗癌治療過(guò)程中的一項(xiàng)長(zhǎng)期任務(wù)。在癌癥的治療研究中,人們發(fā)現(xiàn)在癌癥患者體內(nèi)一類陽(yáng)離子小分子化合物-多胺的代謝功能發(fā)生紊亂,因此多胺成為治療性干預(yù)中具有強(qiáng)吸引力的靶標(biāo)。精脒/精胺-N1-乙酰轉(zhuǎn)移酶（Spermidine/Spermine-N1-acetylransferase,SSAT）是多胺代謝途徑的第一個(gè)限速酶,嚴(yán)格調(diào)控著細(xì)胞內(nèi)的多胺水平,因而成為了多胺與腫瘤關(guān)系研究中的一個(gè)熱點(diǎn)。然而,SSAT對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及其分子機(jī)制仍不完全清楚。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本文以結(jié)直腸癌細(xì)胞（HCT 116、HT-29）為研究對(duì)象,主要研究SSAT對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及其分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:首先用蛋白印跡檢測(cè)法（Western blot）實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT 116和HT-29中SSAT蛋白的表達(dá)情況。然后采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法使細(xì)胞內(nèi)SSAT的蛋白水平上調(diào)或者下調(diào)。采用高效液相色譜分析法（High Pertormanc... 

【文章來(lái)源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
第二章 試劑、材料和儀器
    2.1 主要試劑及材料
    2.2 細(xì)胞株與菌株
    2.3 質(zhì)粒、小干擾RNA與引物
    2.4 試劑及主要溶液的配制
        2.4.1 細(xì)胞及細(xì)菌培養(yǎng)溶液配制
        2.4.2 HPLC所用試劑的配制
        2.4.3 蛋白印跡實(shí)驗(yàn)所用試劑的配制
    2.5 主要儀器
第三章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞株的培養(yǎng)
    3.2 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化及提取
    3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
    3.4 單克隆篩選
    3.5 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
    3.6 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
    3.7 傷口愈合實(shí)驗(yàn)
    3.8 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
    3.9 細(xì)胞克隆形成分析
    3.10 HPLC法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)多胺含量
    3.11 蛋白提取及濃度測(cè)定
    3.12 蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白水平方法
    3.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 SSAT高表達(dá)和低表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建
    4.2 SSAT對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響
    4.3 SSAT對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移的影響
    4.4 SSAT對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲的影響
    4.5 SSAT對(duì)AKT/GSK-3β通路的影響
    4.6 SSAT通過(guò)改變多胺含量來(lái)調(diào)節(jié)AKT/GSK-3β活性
    4.7 SSAT對(duì)WNT信號(hào)通路的影響
    4.8 GSK-3β抑制劑逆轉(zhuǎn)SSAT引起的細(xì)胞侵襲抑制作用
結(jié)論
討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]β-catenin up-regulates the expression of cyclinD1, c-myc and MMP-7 in human pancreatic cancer: Relationships with carcinogenesis and metastasis[J]. Yu-Jun Li, Zhi-Min Wei, Yun-Xiao Meng, Xiang-Rui Ji, Department of Pathology, The Affiliated Hospital of Medical College, Qingdao University, Qingdao 266003, Shandong Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(14)



本文編號(hào)：3541543