實驗背景:結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤疾病,有著較高的發(fā)病率和死亡率,其排名僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌。研究結(jié)直腸癌細胞增殖、遷移和侵襲的分子機制是抗癌治療過程中的一項長期任務。在癌癥的治療研究中,人們發(fā)現(xiàn)在癌癥患者體內(nèi)一類陽離子小分子化合物-多胺的代謝功能發(fā)生紊亂,因此多胺成為治療性干預中具有強吸引力的靶標。精脒/精胺-N1-乙酰轉(zhuǎn)移酶（Spermidine/Spermine-N1-acetylransferase,SSAT）是多胺代謝途徑的第一個限速酶,嚴格調(diào)控著細胞內(nèi)的多胺水平,因而成為了多胺與腫瘤關系研究中的一個熱點。然而,SSAT對結(jié)直腸癌細胞增殖、遷移和侵襲的影響及其分子機制仍不完全清楚。實驗目的:本文以結(jié)直腸癌細胞（HCT 116、HT-29）為研究對象,主要研究SSAT對結(jié)直腸癌細胞增殖、遷移和侵襲的影響及其分子機制。實驗方法:首先用蛋白印跡檢測法（Western blot）實驗方法檢測結(jié)直腸癌細胞HCT 116和HT-29中SSAT蛋白的表達情況。然后采用細胞轉(zhuǎn)染的方法使細胞內(nèi)SSAT的蛋白水平上調(diào)或者下調(diào)。采用高效液相色譜分析法（High Pertormanc... 

【文章來源】：河南大學河南省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
第二章 試劑、材料和儀器
    2.1 主要試劑及材料
    2.2 細胞株與菌株
    2.3 質(zhì)粒、小干擾RNA與引物
    2.4 試劑及主要溶液的配制
        2.4.1 細胞及細菌培養(yǎng)溶液配制
        2.4.2 HPLC所用試劑的配制
        2.4.3 蛋白印跡實驗所用試劑的配制
    2.5 主要儀器
第三章 實驗方法
    3.1 細胞株的培養(yǎng)
    3.2 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化及提取
    3.3 細胞轉(zhuǎn)染實驗
    3.4 單克隆篩選
    3.5 細胞遷移實驗
    3.6 細胞侵襲實驗
    3.7 傷口愈合實驗
    3.8 細胞生長曲線的測定
    3.9 細胞克隆形成分析
    3.10 HPLC法檢測細胞內(nèi)多胺含量
    3.11 蛋白提取及濃度測定
    3.12 蛋白印跡法檢測細胞內(nèi)蛋白水平方法
    3.13 統(tǒng)計學分析
第四章 實驗結(jié)果
    4.1 SSAT高表達和低表達細胞株的構(gòu)建
    4.2 SSAT對結(jié)直腸癌細胞增殖能力的影響
    4.3 SSAT對結(jié)直腸癌細胞的遷移的影響
    4.4 SSAT對結(jié)直腸癌細胞侵襲的影響
    4.5 SSAT對AKT/GSK-3β通路的影響
    4.6 SSAT通過改變多胺含量來調(diào)節(jié)AKT/GSK-3β活性
    4.7 SSAT對WNT信號通路的影響
    4.8 GSK-3β抑制劑逆轉(zhuǎn)SSAT引起的細胞侵襲抑制作用
結(jié)論
討論
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3541543