發(fā)布時(shí)間：2017-05-05 18:11

  本文關(guān)鍵詞：低劑量節(jié)拍化療對(duì)荷人卵巢癌裸鼠移植瘤血管生成擬態(tài)的影響及可能機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:血管生成擬態(tài)(Vasculogenic Mimicry,VM)是高度惡性腫瘤中存在的由腫瘤細(xì)胞通過(guò)自身變形和細(xì)胞外基質(zhì)重塑所形成的血管樣管道。近年來(lái),越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、侵襲和復(fù)發(fā)與腫瘤VM的形成密切相關(guān)。膜型1基質(zhì)金屬蛋白酶(Membrane type 1 matrix metalloproteinases,MT1-MMP)作為基質(zhì)金屬蛋白酶類(lèi)中的一員在惡性腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)中具有重要的作用。局部黏著斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)屬于蛋白酪氨酸激酶,能夠改變細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附性,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的移動(dòng)、浸潤(rùn)、侵襲及轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立人卵巢癌細(xì)胞株HO8910裸鼠異種移植瘤模型,給予順鉑(Cisplatin,DDP)最大可耐受劑量化療(maximum tolerated dose chemotherapy,MTD)及低劑量節(jié)拍化療(low-dose metronomic chemotherapy,LDM),觀(guān)察LDM-DDP模式下荷人卵巢癌細(xì)胞HO8910裸鼠移植瘤模型VM生長(zhǎng)變化情況,并檢測(cè)MT1-MMP及FAK的表達(dá)水平,探討LDM對(duì)卵巢癌裸鼠移植瘤中VM的影響及可能機(jī)制。方法:1建立裸鼠移植瘤模型并分組化療:體外培養(yǎng)HO8910細(xì)胞,將1×107細(xì)胞重懸于0.2ml PBS中,接種到6-8周齡的雌性裸鼠大腿外側(cè)皮下,建立裸鼠異體移植瘤模型。10天后隨機(jī)把81只裸鼠分成三組,每組為27只:順鉑最大可耐受劑量(MTD-DDP)組,順鉑3mg/kg,1次/3日,腹腔注射,共6次;順鉑低劑量節(jié)拍化療(LDM-DDP)組,順鉑1mg/kg,1次/日,腹腔注射,共18次;對(duì)照組,腹腔注射等量的生理鹽水。2獲取腫瘤樣本:給藥期間仔細(xì)觀(guān)察裸鼠的一般情況及腫瘤的生長(zhǎng)情況,每隔1天測(cè)量一次裸鼠的皮下移植瘤體積。根據(jù)計(jì)算機(jī)生成的隨機(jī)數(shù)表,從化療開(kāi)始后每隔1天各組隨機(jī)抽取3只裸鼠采用戊巴比妥過(guò)量麻醉處死,在無(wú)菌條件下剝離裸鼠皮下移植瘤,將獲取的腫瘤樣本從中間切開(kāi),一半固定于4%多聚甲醛中,一半存放于-80℃冰箱中。每次獲取9個(gè)腫瘤樣本,至化療結(jié)束共9次,共獲取腫瘤樣本81個(gè)。化療結(jié)束后分別計(jì)算MTD-DDP組及LDM-DDP組的抑瘤率。3免疫組織化學(xué)雙重染色:將固定于4%多聚甲醛中的腫瘤樣本進(jìn)行石蠟包埋、組織切片,采用CD31/PAS雙重染色,觀(guān)察VM的表達(dá)情況。劃分中央?yún)^(qū)和外周區(qū),分別在顯微鏡下連續(xù)計(jì)數(shù)10個(gè)腫瘤組織高倍視野(×400)下的VM,取其均值作為VM密度。4應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法染色和Western Blot的方法檢測(cè)MT1-MMP和FAK在移植瘤中的表達(dá)水平。結(jié)果:1裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)情況自化療開(kāi)始,MTD-DDP組、LDM-DDP組及對(duì)照組三組裸鼠皮下移植瘤體積一直處于不斷增大的狀態(tài),化療結(jié)束時(shí)各組移植瘤體積均比化療開(kāi)始時(shí)增大(P_(MTD-DDP_組)=0.002,P_(LDM-DDP_組)0.001,P_(對(duì)照組)=0.001)。至化療結(jié)束,MTD-DDP組及LDM-DDP組移植瘤的體積均小于對(duì)照組(P=0.042,P0.001),而LDM-DDP組移植瘤體積又小于MTD-DDP組(P=0.009)。MTD-DDP組抑瘤率為10.48%,LDM-DDP組抑瘤率為31.14%。2 CD31/PAS雙重染色下的VM形態(tài)經(jīng)過(guò)CD31/PAS的雙重染色,在顯微鏡低倍鏡下看到VM和內(nèi)皮依賴(lài)性血管共存于移植瘤中,內(nèi)皮依賴(lài)性血管多位于移植瘤周邊,并可見(jiàn)其與宿主組織相交,而VM多位于移植瘤中央?yún)^(qū)。換成高倍鏡,各組移植瘤中均可見(jiàn)到櫻桃紅色的PAS陽(yáng)性管道,部分管道的外層為CD31染色呈陰性的腫瘤細(xì)胞,PAS陽(yáng)性血管樣圖案呈直線(xiàn)狀、平行狀、交叉狀、環(huán)狀、網(wǎng)狀等多種形狀,管壁薄厚不一,部分管腔中可見(jiàn)到紅細(xì)胞。3不同化療模式下VM在移植瘤中的生長(zhǎng)變化情況1)不同化療模式下裸鼠移植瘤中央?yún)^(qū)VM的生長(zhǎng)變化MTD-DDP組、LDM-DDP組及對(duì)照組三組移植瘤中央?yún)^(qū)均可觀(guān)察到VM,且在化療第2天三組移植瘤中VM密度差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.468,P=0.472,P=0.359)。隨著移植瘤的增長(zhǎng),VM密度在各組移植瘤中央?yún)^(qū)均呈現(xiàn)先增多后減少的變化趨勢(shì)。對(duì)照組中的VM密度從第2-8天呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì),第9-18天逐漸減少。兩化療組不同于對(duì)照組,第2-10天遞增,11-18天遞減。從化療開(kāi)始到第8天,對(duì)照組中VM密度與MTD-DDP組比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P_2=0.810,P_4=0.479,P_6=0.363,P_8=0.822,均P0.05)。從第10天至化療結(jié)束,MTD-DDP組移植瘤中央?yún)^(qū)的VM密度大于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P_(10)=0.037,P_(12)=0.018,P_(14)=0.014,P_(16)=0.043,P_(18)=0.013,均P0.05)。LDM-DDP組移植瘤中央?yún)^(qū)的VM密度從化療第4天開(kāi)始均小于MTD-DDP組及對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P_4=0.010,P_6=0.005,P_8=0.013,P_(10)=0.027,P_(12)=0.046,P_(14)=0.006,P_(16)=0.005,P_(18)=0.006,均P0.05)。2)不同化療模式下裸鼠移植瘤外周區(qū)VM的生長(zhǎng)變化情況在卵巢癌裸鼠移植瘤的外周區(qū)也出現(xiàn)了VM。與中央?yún)^(qū)相似,三組移植瘤外周區(qū)中的VM密度也呈現(xiàn)先遞增后遞減的趨勢(shì)�；煹�2天,三組移植瘤中的VM密度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.893,P=0.667,P=0.598)。MTD-DDP組與對(duì)照組移植瘤中的VM密度從化療開(kāi)始至第10天逐漸增大,之后呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。LDM-DDP組移植瘤外周區(qū)的VM密度在化療第12天時(shí)出現(xiàn)峰值,并開(kāi)始遞減。從第2天至第8天,MTD-DDP組的VM密度與對(duì)照組比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P_2=0.998,P_4=0.424,P_6=0.236,P_8=0.231,均P0.05),從第10天至化療結(jié)束,MTD-DDP組的VM密度大于對(duì)照組,兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P_(10)=0.037,P_(12)=0.010,P_(14)=0.014,P_(16)=0.043,P_(18)=0.013,均P0.05)。LDM-DDP組移植瘤外周區(qū)的VM密度從化療第4天至化療結(jié)束明顯小于MTD-DDP組和對(duì)照組(P_4=0.009,P_6=0.001,P_8=0.013,P_(10)=0.027,P_(12)=0.003,P_(14)=0.006,P16=0.034,P18=0.008,均P0.05)。3)移植瘤中央?yún)^(qū)與外周區(qū)VM密度的比較從化療開(kāi)始至結(jié)束,三組移植瘤外周區(qū)和中央?yún)^(qū)的VM密度均呈現(xiàn)先增多后減少的趨勢(shì),化療第10天左右出現(xiàn)峰值,說(shuō)明此時(shí)移植瘤中的VM密度最大。三組移植瘤中央?yún)^(qū)的VM密度分別大于外周區(qū)的VM密度,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。4移植瘤中MT1-MMP及FAK的表達(dá)在顯微鏡下觀(guān)察發(fā)現(xiàn),通過(guò)免疫組織化學(xué)SP法染色,VM周?chē)糠帜[瘤細(xì)胞中可見(jiàn)MT1-MMP及FAK抗原的表達(dá),而遠(yuǎn)離VM的區(qū)域不達(dá)或較少表達(dá)MT1-MMP和FAK抗原。1)MT1-MMP蛋白的表達(dá)情況在化療第2天,三組移植瘤中央?yún)^(qū)有少量MT1-MMP蛋白表達(dá),三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.184,P=0.417,P=0.417)�；煹�10天,MTD-DDP組的MT1-MMP蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(P=0.002),LDM-DDP組MT1-MMP蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組(P0.001)�；煹�18天,MTD-DDP組的MT1-MMP蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(P=0.004),LDM-DDP組MT1-MMP蛋白表達(dá)低于對(duì)照組(P=0.002)。外周區(qū)MT1-MMP蛋白的表達(dá)與中央?yún)^(qū)相似,在化療開(kāi)始,三組移植瘤中央?yún)^(qū)有少量MT1-MMP蛋白表達(dá),三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.326,P=0.710,P=0.184)。化療第10天,MTD-DDP組的MT1-MMP蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(P=0.004),LDM-DDP組MT1-MMP蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組(P=0.009)�；煹�18天,MTD-DDP組的MT1-MMP蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(P=0.016),LDM-DDP組MT1-MMP蛋白表達(dá)低于對(duì)照組(P=0.018)。2)FAK的表達(dá)情況在化療開(kāi)始,三組移植瘤中央?yún)^(qū)有少量FAK蛋白表達(dá),三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.082,P=0.196,P=0.420)�；煹�10天,MTD-DDP組的FAK蛋白表達(dá)水平比對(duì)照組高(P=0.001),LDM-DDP組FAK蛋白表達(dá)水平明顯比對(duì)照組低(P=0.002)�；煹�18天,MTD-DDP組的FAK蛋白表達(dá)水平比對(duì)照組高(P=0.008),LDM-DDP組FAK蛋白表達(dá)水平明顯比對(duì)照組低(P=0.004)。外周區(qū)FAK蛋白的表達(dá)與中央?yún)^(qū)相似,在化療開(kāi)始,三組移植瘤中央?yún)^(qū)有少量FAK蛋白表達(dá),三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.000,P=0.482,P=0.573)�；煹�10天,MTD-DDP組的FAK蛋白表達(dá)比對(duì)照組高(P=0.021),LDM-DDP組FAK蛋白表達(dá)水平明顯比對(duì)照組低(P=0.004)�；煹�18天,MTD-DDP組的FAK蛋白表達(dá)水平比對(duì)照組高(P=0.009),LDM-DDP組FAK蛋白表達(dá)水平明顯比對(duì)照組低(P=0.006)。結(jié)論:1化療藥物累計(jì)劑量相同時(shí),LDM模式比MTD模式具有更好的抑制荷人卵巢癌HO8910細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的效果。2卵巢癌HO8910細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤中可以形成VM,其形成隨時(shí)空變化存在一定的規(guī)律。LDM模式可以抑制VM的形成而MTD模式可以促進(jìn)VM的形成。LDM模式可能在腫瘤生成的早期,并且對(duì)分化程度低、侵襲性高的腫瘤作用效果更好。3 LDM模式下卵巢癌移植瘤中MT1-MMP和FAK的表達(dá)顯著的低于MTD模式,提示LDM模式可能通過(guò)抑制MT1-MMP及FAK的表達(dá)而減少VM的形成,進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)。
【關(guān)鍵詞】：卵巢上皮性癌 血管生成擬態(tài) 最大耐受劑量化療 低劑量節(jié)拍化療 膜型1基質(zhì)金屬蛋白酶 局部黏著斑激酶
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-15
• 英文縮寫(xiě)15-16
• 前言16-17
• 材料與方法17-26
• 結(jié)果26-29
• 附圖29-34
• 附表34-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述 血管生成擬態(tài)的研究進(jìn)展46-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳伶;鄧金昆;劉星;史莉莉;李麗;;環(huán)磷酰胺LDM聯(lián)合MTD化療對(duì)乳腺癌抗血管作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用癌癥雜志;2011年05期

  本文關(guān)鍵詞：低劑量節(jié)拍化療對(duì)荷人卵巢癌裸鼠移植瘤血管生成擬態(tài)的影響及可能機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：346835