本文關鍵詞：miR-17家族在腫瘤生長和遷移中的作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：非編碼RNA在基因組中占有很大比例,對非編碼RNA的功能研究逐漸引起了人們的關注,microRNA (miRNA)是一類由內源基因編碼的長度約為18-24個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,它們在生物體中參與轉錄后基因表達調控。miRNA17-5p、20a同屬于miRNA17家族、miRNA17-92 cluster,miRNA17家族已被報道在腫瘤細胞中高表達,對其在腫瘤發(fā)生、衰老中的調控作用有很大的研究意義。本實驗通過decoy技術抑制miRNA17家族在乳腺癌中表達,鑒定其對抑制腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲的作用。miR-17家族一共包含8個miRNA,他們第二到第八個堿基具有高度同源性,稱為種子序列。通過構建一個包含可以與miRNA17家族互補序列的慢病毒載體來感染乳腺癌細胞。通過這種decoy技術降低miRNA17家族在乳腺癌細胞中的表達,記錄腫瘤細胞增殖情況,繪制細胞生長曲線,確定decoy17能否抑制腫瘤細胞增殖,并通劃痕實驗和transwell實驗確定decoy17對腫瘤細胞增殖、遷移能力的影響。在小鼠體內進一步驗證實驗結果,并探索miRNA與下游靶蛋白的作用機制。通過這些探索,有望發(fā)現一種新的抑制腫瘤的方法
【關鍵詞】：非編碼RNA miRNA17家族 腫瘤 增殖 遷移 Decoy技術
【學位授予單位】：杭州師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 致謝5-6
• 前言6-8
• 摘要8-9
• Abstract9-12
• 1 緒論12-15
• 1.1 miRNA的發(fā)現12
• 1.2 miRNA的生物合成12-14
• 1.3 miRNA的功能14
• 1.4 miR-17家族14-15
• 2 實驗材料和方法15-33
• 2.1 實驗材料15-21
• 2.1.1 細胞系和菌株15
• 2.1.2 質粒15
• 2.1.3 工具酶等15-16
• 2.1.4 試劑盒16
• 2.1.5 抗體16
• 2.1.6 常用試劑和緩沖液16-20
• 2.1.7 其他主要試劑和耗材20-21
• 2.1.8 主要儀器21
• 2.2 實驗方法21-33
• 2.2.1 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備21-22
• 2.2.2 細菌的轉化22
• 2.2.3 菌種凍存22
• 2.2.4 質粒的擴增22-23
• 2.2.5 質粒的提取23-24
• 2.2.6 質粒DNA/RNA濃度及純度測定24
• 2.2.7 細胞復蘇、傳代和凍存24-25
• 2.2.8 細胞總RNA的抽提25
• 2.2.9 cDNA的制備25
• 2.2.10 RT-PCR25-26
• 2.2.11 實時熒光定量PCR26
• 2.2.12 質粒的構建26-27
• 2.2.13 轉染27
• 2.2.14 蛋白質濃度測定27
• 2.2.15 免疫印跡27-29
• 2.2.16 包裝病毒、感染29-30
• 2.2.17 克隆形成30-31
• 2.2.18 軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成試驗31
• 2.2.19 裸鼠皮下注射31
• 2.2.20 劃痕實驗31-32
• 2.2.21 Transwell32
• 2.2.22 檢測不同細胞周期細胞比例32-33
• 3、實驗結果33-41
• 3.1 Decoy技術抑制miR17家族表達33-34
• 3.2 Decoy技術可以抑制WI-38細胞增殖34-36
• 3.3 Decoy技術對抑制Mcf7細胞遷移有顯著影響36-37
• 3.4 Decoy技術對miRNA17家族下游蛋白影響37-39
• 3.5 通過decoy抑制miR-17家族表達后,不同細胞周期時像的比例變化39-40
• 3.6 抑制miR17家族在體內抑制腫瘤生長40-41
• 4、討論41-42
• 參考文獻42-50

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