本文關(guān)鍵詞：輻射對神經(jīng)相關(guān)細胞外泌體的生物效應(yīng)影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：放療是顱內(nèi)惡性腫瘤術(shù)后的主要輔助治療手段。放療過程中,電離輻射不僅對受輻照細胞造成直接輻射損傷,還能誘發(fā)輻射旁效應(yīng)。輻射旁效應(yīng)是指未直接受輻照的細胞表現(xiàn)出與受輻射細胞類似的生物學(xué)反應(yīng),與細胞間的信息通訊密切相關(guān)。外泌體是細胞分泌的一類小分子囊泡結(jié)構(gòu),是細胞間信息交流的一類重要載體。本文旨在通過研究外泌體在輻射旁效應(yīng)中所發(fā)揮的作用,進一步探索輻射旁效應(yīng)的機制,以期提高放療治療顱內(nèi)惡性腫瘤的療效。實驗以神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y作為神經(jīng)細胞的體外模型,首先通過培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移實驗研究一定劑量γ-射線輻射后輻射旁效應(yīng)的主要表現(xiàn),然后通過細胞共孵育實驗研究輻射對外泌體生物學(xué)效應(yīng)的影響,最后通過差異蛋白組學(xué)鑒定研究輻射對外泌體蛋白表達的影響,從而推論得出外泌體介導(dǎo)輻射旁效應(yīng)的機制。培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移實驗的結(jié)果表明,輻射培養(yǎng)基能夠促進細胞增殖,即此輻射條件下的輻射旁效應(yīng)主要表現(xiàn)為細胞增殖促進。外泌體提取和鑒定的結(jié)果表明,受輻照細胞分泌的外泌體量遠多于正常細胞。外泌體共孵育實驗的結(jié)果表明,相對于正常外泌體,輻射外泌體能夠促進細胞增殖,即輻射外泌體所表現(xiàn)出的生物學(xué)效應(yīng)與輻射培養(yǎng)基一致。根據(jù)以上結(jié)果,我們推測外泌體在介導(dǎo)電離輻射旁效應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。此外,外泌體蛋白組學(xué)鑒定的結(jié)果表明,輻射外泌體的蛋白組分的確發(fā)生了變化,且這一變化與細胞間信息交流、細胞增殖與細胞凋亡等生物作用相關(guān)。根據(jù)以上結(jié)論我們可以推論得出,外泌體在介導(dǎo)電離輻射旁效應(yīng)過程中發(fā)揮了重要作用,且這一作用與輻射引起的外泌體蛋白表達變化密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：電離輻射 輻射旁效應(yīng) 外泌體 細胞增殖
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-20
• 1.1 本論文研究的目的和意義10
• 1.2 腦部腫瘤及治療策略概述10-13
• 1.2.1 腦部腫瘤概述10-11
• 1.2.2 傳統(tǒng)治療方式概述及選擇11-12
• 1.2.3 放療治療顱內(nèi)惡性腫瘤概述12-13
• 1.3 電離輻射旁效應(yīng)概述13-15
• 1.3.1 電離輻射引起生物學(xué)效應(yīng)概述13-14
• 1.3.2 電離輻射旁效應(yīng)概述14-15
• 1.4 外泌體概述15-19
• 1.4.1 外泌體定義15-16
• 1.4.2 外泌體結(jié)構(gòu)和組成16-18
• 1.4.3 外泌體生物學(xué)功能18-19
• 1.5 本課題的研究思路19-20
• 第2章 材料與方法20-30
• 2.1 細胞培養(yǎng)與 γ-射線輻射處理20
• 2.2 培養(yǎng)基去外泌體處理與外泌體提取20-22
• 2.2.1 培養(yǎng)基去外泌體處理20-21
• 2.2.2 外泌體提取21-22
• 2.3 免疫印跡法鑒定外泌體22-26
• 2.3.1 細胞全蛋白制備22
• 2.3.2 外泌體蛋白制備22
• 2.3.3 SDS-PAGE22-23
• 2.3.4 轉(zhuǎn)膜23-24
• 2.3.5 顯影24-25
• 2.3.6 二次免疫印跡25-26
• 2.4 細胞增殖檢測與細胞計數(shù)26-27
• 2.4.1 細胞計數(shù)26
• 2.4.2 MTS檢測法26
• 2.4.3 CCK-8 檢測法26-27
• 2.5 流式法測細胞周期分布27-28
• 2.6 外泌體蛋白組學(xué)鑒定28-30
• 2.6.1 試劑配制28
• 2.6.2 樣品處理28-29
• 2.6.3 酶解標記29
• 2.6.4 質(zhì)譜分析與數(shù)據(jù)處理29-30
• 第3章 實驗結(jié)果與討論30-46
• 3.1 輻射劑量的確定30-32
• 3.1.1 不同輻射劑量下SH細胞的周期分布30-31
• 3.1.2 選擇輻射劑量下SH細胞的形態(tài)變化31-32
• 3.2 輻射培養(yǎng)基對細胞增殖及細胞周期分布影響研究32-37
• 3.2.1 輻射培養(yǎng)基的獲得32
• 3.2.2 輻射培養(yǎng)基對細胞增殖的作用32-34
• 3.2.3 輻射培養(yǎng)基對細胞周期分布的作用34-35
• 3.2.4 增殖相關(guān)蛋白的免疫印跡檢測35-37
• 3.2.5 小結(jié)37
• 3.3 輻射外泌體對細胞增殖及細胞周期分布影響研究37-42
• 3.3.1 外泌體的提取與鑒定37-38
• 3.3.2 輻射外泌體對細胞增殖的作用38-40
• 3.3.3 輻射外泌體對細胞周期分布的作用40-42
• 3.3.4 小結(jié)42
• 3.4 外泌體的蛋白組學(xué)鑒定42-46
• 3.4.1 外泌體樣品的處理與考染分析42-43
• 3.4.2 差異蛋白的鑒定與生物學(xué)功能分析43-45
• 3.4.3 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-52
• 附錄52-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文與研究結(jié)果清單57-58
• 致謝58

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