本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細胞在原發(fā)性肝癌形成前和形成后的不同作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的及背景近年來,腫瘤微環(huán)境對肝癌發(fā)生發(fā)展的作用越來越受到重視。腫瘤并不是簡單孤立的由癌細胞增殖形成;相反,是由多種不同類型細胞參與的,組成異質(zhì)性的交互復(fù)雜的組織。癌細胞可以招募正常細胞誘導(dǎo)其分化為腫瘤相關(guān)基質(zhì)細胞,共同構(gòu)成腫瘤微環(huán)境。間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有對炎癥損傷和腫瘤的趨向性,是腫瘤微環(huán)境的一個重要組成部分。但其對腫瘤的作用尚未明確,有的文獻報道MSCs促進腫瘤發(fā)生發(fā)展,也有文獻報道MSCs抑制腫瘤,可以作為新興的抗癌藥物/基因傳遞的載體用于治療腫瘤。本課題通過研究MSCs在肝癌發(fā)生前后的作用及機制,為安全和有效應(yīng)用MSCs治療肝癌或者其它肝臟疾病提供有力證據(jù)支持。本課題將從以下兩方面展開:第一部分探討間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生的不同階段對肝癌的影響;第二部分研究間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生不同階段起不同作用的機制。研究方法與結(jié)果第一部分探討間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生的不同階段對肝癌的影響。在這一部分,我們首先建立二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)大鼠原發(fā)性肝癌模型,連續(xù)觀察不同誘癌時間(0、4、8、12、16周)肝癌發(fā)生發(fā)展情況,并依此將DEN誘發(fā)肝癌的過程劃分肝癌形成前(Initial stage,Is)和形成后(Progressive stage,Ps)。然后分別在肝癌形成前和形成后給予MSCs,通過對各組大鼠生存時間、腫瘤發(fā)生率、最大腫瘤體積及腫瘤數(shù)量等進行觀察統(tǒng)計,分析MSCs對肝癌發(fā)生發(fā)展的影響。結(jié)果:1、DEN誘癌模型中,通過對各個時間點的肝臟結(jié)構(gòu)、質(zhì)地及HE染色觀察劃分肝癌形成前為從誘癌0周到第9周,此時,肝臟仍無明顯腫瘤生成;而第9周到第17周則可以被歸為肝癌形成后。2、與同時間DEN誘癌組相比,在肝癌形成前給予MSCs腫瘤發(fā)生率、最大腫瘤體積及腫瘤數(shù)量明顯降低,生存期延長;而在肝癌形成后給予MSCs最大腫瘤體積及腫瘤數(shù)量則明顯增加,生存期縮短。第二部分研究間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生不同階段起不同作用的機制。為了探討MSCs在肝癌形成前抑制肝癌發(fā)生是否由于MSCs對肝臟損傷具有保護作用,我們分別檢測誘癌第8周時DEN組和DEN+MSCs(Is)組的大鼠肝功能(ALT、AST)和肝臟細胞凋亡(Tunel)情況,結(jié)果:DEN+MSCs(Is)組ALT和AST低于DEN組,且肝臟細胞凋亡明顯減少;另外,我們的研究發(fā)現(xiàn)MSCs能夠抑制DEN誘癌大鼠肝臟細胞ROS累積和DNA損傷。HE染色發(fā)現(xiàn),DEN+MSCs(Is)組匯管周圍募集的淋巴細胞較少;且Bio-plex和Q-PCR檢測結(jié)果顯示,DEN+MSCs(Is)組肝臟組織中炎癥因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ和IL-6明顯低于DEN組。通過天狼星紅染色和α-SMA探針標記發(fā)現(xiàn)DEN+MSCs(Is)組中肝星狀細胞激活減少,肝臟組織纖維化程度降低。接下來我們探討MSCs在肝癌形成后促進肝癌發(fā)生發(fā)展的機制,我們分別檢測誘癌第14周時DEN組和DEN+MSCs(Ps)組肝癌組織中細胞凋亡(Tunel)和增殖(Ki67)情況,發(fā)現(xiàn)上述兩組細胞凋亡數(shù)目無顯著性差異,而DEN+MSCs(Ps)組中大鼠腫瘤細胞增殖數(shù)目明顯高于DEN組,呈增殖活躍狀態(tài);同時,我們發(fā)現(xiàn)DEN+MSCs(Ps)組肝癌組織中Ep CAM和AFP表達增高,提示腫瘤干細胞比例增多;且較DEN組,DEN+MSCs(Ps)組Ecadherin表達明顯減少而Vimentin表達增高,提示MSCs可能促進肝癌細胞發(fā)生EMT。進一步通過體外實驗發(fā)現(xiàn)在TNF-α/IFN-γ刺激下,MSCs對肝癌干細胞和肝癌細胞發(fā)生EMT有明顯促進作用。結(jié)論綜上所述,結(jié)合兩部分研究結(jié)果,可以得出以下結(jié)論:1、間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生的不同階段對肝癌作用不同,在肝癌形成前具有抑制腫瘤發(fā)生的作用,而在肝癌形成后則具有促進腫瘤發(fā)展的作用。2、MSCs在肝癌形成前抑制腫瘤發(fā)生可能是由于MSCs抑制肝臟細胞ROS累積和DNA損傷,并減弱炎癥效應(yīng)和抑制肝纖維化,最終抑制肝癌發(fā)生。而在肝癌形成后促進腫瘤發(fā)展很可能是由于MSCs受到腫瘤微環(huán)境中炎癥因子TNF-α/IFN-γ等作用,轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤相關(guān)間充質(zhì)干細胞,促進腫瘤細胞增殖,促進腫瘤干細胞激活和肝癌細胞發(fā)生EMT,最終導(dǎo)致腫瘤惡性發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性肝癌 間充質(zhì)干細胞 二乙基亞硝胺 ROS 肝纖維化 腫瘤干細胞 上皮間質(zhì)化
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 中英文縮略詞對照表10-12
• 第一部分 間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生的不同階段對肝癌發(fā)生發(fā)展的影響12-26
• 一、材料與方法13-19
• (一) 實驗材料13-16
• (二) 實驗方法16-19
• 二、實驗結(jié)果19-24
• (一) DEN誘癌過程中大鼠肝臟病理學變化19-21
• (二) 間充質(zhì)干細胞具有向肝臟損傷部位趨化能力21
• (三) MSCs在肝癌發(fā)生不同階段對肝癌發(fā)生發(fā)展的影響21-24
• 三、討論24-25
• 四、參考文獻25-26
• 第二部分 間充質(zhì)干細胞在肝癌發(fā)生不同階段起不同作用的機制26-55
• 一、材料與方法27-37
• (一) 實驗材料27-30
• (二) 實驗方法30-37
• 二、實驗結(jié)果37-50
• (一) MSCs在肝癌形成前抑制肝細胞凋亡37-39
• (二) MSCs在肝癌形成前抑制肝臟細胞DNA損傷和ROS累積39-40
• (三) MSCs在肝癌形成前抑制肝臟炎癥效應(yīng)40-42
• (四) MSCs在肝癌形成前抑制肝星狀細胞激活和肝纖維化42-43
• (五) 體外MSCs抑制淋巴細胞和肝星狀細胞增殖43-44
• (六) MSCs在肝癌形成后促進腫瘤細胞增殖44-45
• (七) MSCs在肝癌形成后激活腫瘤干細胞并促進肝癌細胞EMT45-46
• (八) TNF-α/IFN-γ 預(yù)處理MSCs增強其對肝癌細胞增殖的促進作用46-48
• (九) TNF-α/IFN-γ 預(yù)處理MSCs增強其對肝癌干細胞的激活48-49
• (十) TNF-α/IFN-γ 預(yù)處理MSCs促進肝癌細胞發(fā)生EMT49-50
• 三、討論50-52
• 四、參考文獻52-55
• 附錄55-56
• 綜述56-72
• 參考文獻63-72
• 個人簡歷72
• 在校期間發(fā)表論文及科研情況72
• 在校期間獲獎情況72-73
• 致謝73

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  本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細胞在原發(fā)性肝癌形成前和形成后的不同作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321036