本文關(guān)鍵詞：miR-200c對胃癌細(xì)胞的影響及其在耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過檢測miR-200c在不同分化程度的胃癌細(xì)胞系中的表達(dá),探討miR-200c對胃癌細(xì)胞的影響;通過檢測相關(guān)指標(biāo)測定胃癌細(xì)胞耐藥性及其耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化間的關(guān)系及miR-200c在兩者中的作用。方法:利用RT-qPCR技術(shù)分別測定不同分化程度的胃癌細(xì)胞中miR-200c的表達(dá)水平,初步探討miR-200c在胃癌細(xì)胞中的作用,并根據(jù)miR-200c的表達(dá)水平篩選出下一步實驗的目的胃癌細(xì)胞系SGC-7901。我們選取胃癌細(xì)胞SGC-7901及其耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR,利用MTT實驗檢測在不同阿霉素濃度相同時間下針對不同細(xì)胞株的細(xì)胞抑制率及蛋白免疫印記法檢測MRP-1在蛋白水平的表達(dá),隨后進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察,劃痕實驗檢測細(xì)胞的侵襲能力,RT-qPCR技術(shù)檢測miR-200c的表達(dá)水平及熒光定量PCR技術(shù)檢測SnailmRNA、Twist1mRNA的表達(dá)情況,蛋白免疫印記法檢測E-Cadherin在蛋白水平的表達(dá),初步探討耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間的相關(guān)性。利用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)將特異性miR-200c mimics和miR-200c inhibitor序列轉(zhuǎn)染至耐阿霉素胃癌細(xì)胞株SGC-7901/ADR中,將細(xì)胞分為兩組,設(shè)置實驗組為轉(zhuǎn)染miR-200c mimics、miR-200c inhibitor的胃癌細(xì)胞株SGC-7901/ADR,Blank組為未轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞株SGC-7901/ADR。應(yīng)用RT-qPCR檢測miR-200c轉(zhuǎn)染的效率;熒光定量PCR技術(shù)檢測SnailmRNA、Twist1mRNA的表達(dá)情況,蛋白免疫印記法檢測各組細(xì)胞中E-Cadherin和MRP-1在蛋白水平的表達(dá);MTT法檢測各組細(xì)胞的抑制率。結(jié)果:miR-200c在不同分化程度的胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平不同,分化程度越高表達(dá)水平越多。針對胃癌細(xì)胞系SGC-7901及其耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR,在MTT實驗法及蛋白免疫印記法檢測MRP-1的表達(dá)證實兩組細(xì)胞具有明顯的耐藥性的情況下,我們觀察到在耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中,細(xì)胞形態(tài)呈梭型,相比較胃癌細(xì)胞SGC-7901,細(xì)胞間距較大,排列、聚合松散,形狀相對較多樣,可見明顯偽足,符合EMT的形態(tài)學(xué)特征;劃痕實驗中胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR在相同時間及培養(yǎng)條件下,較胃癌細(xì)胞SGC-7901具有更強(qiáng)的侵襲能力;蛋白E-Cadherin明顯下降,其中EMT特征基因Snail1mRNA、Twist1mRNA明顯上升,符合EMT的分子學(xué)改變。在胃癌細(xì)胞SGC-7901及耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中,miR-200c在胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR的濃度較胃癌細(xì)胞SGC-7901較少,約為其0.4倍,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05)。miR-200c表達(dá)水平在瞬時轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics、Has-mi R-200c inhibitor胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR較分別較未轉(zhuǎn)染組升高約4.7倍、降低約2.5倍,均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MTT法檢測各組細(xì)胞抑制率可得,細(xì)胞抑制率在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細(xì)胞株中為最高,未轉(zhuǎn)染組居中,轉(zhuǎn)染Has-miR-200c inhibitor耐藥細(xì)胞株為最低。EMT特征基因Snail1mRNA、Twist1mRNA表達(dá)水平在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細(xì)胞株中明顯下降,在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c inhibitor耐藥細(xì)胞株中明顯上升。蛋白E-Cadherin在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細(xì)胞株中明顯上升,而在轉(zhuǎn)染Has-mi R-200c inhibitor耐藥細(xì)胞株中明顯下降;蛋白MRP-1在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細(xì)胞株中明顯下降,而在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c inhibitor耐藥細(xì)胞株中明顯上升。結(jié)論:miR-200c在不同分化程度的胃癌細(xì)胞中表達(dá)水平具有差異性。耐藥的胃癌細(xì)胞具有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的趨勢。miR-200c具有調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞耐藥性及發(fā)生EMT的作用,且與胃癌耐藥性及EMT的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：miR-200c 胃癌 耐藥 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮略詞7-12
• 前言12-16
• 第一部分 miR-200c在不同胃癌細(xì)胞系中表達(dá)水平的鑒定16-26
• 1. 目的16
• 2. 實驗材料16-18
• 2.1 細(xì)胞系16
• 2.2 相關(guān)試劑16-17
• 2.3 主要實驗儀器及設(shè)備17
• 2.4 實驗中配制的主要溶液17-18
• 3. 實驗方法18-23
• 3.1 細(xì)胞復(fù)蘇18
• 3.2 細(xì)胞換液18-19
• 3.3 細(xì)胞傳代19
• 3.4 細(xì)胞凍存19-20
• 3.5 實時定量PCR技術(shù)20-22
• 3.6 統(tǒng)計學(xué)方法22-23
• 結(jié)果23-24
• 討論24-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 miR-200c和胃癌細(xì)胞耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化間的相關(guān)關(guān)系26-40
• 1. 研究目的26
• 2. 實驗材料26-28
• 2.1 細(xì)胞系26
• 2.2 相關(guān)試劑26-27
• 2.3 主要實驗儀器及設(shè)備27
• 2.4 實驗中配制的主要溶液27-28
• 3. 實驗方法28-34
• 3.1 細(xì)胞復(fù)蘇28
• 3.2 細(xì)胞換液28
• 3.3 細(xì)胞傳代28
• 3.4 細(xì)胞凍存28
• 3.5 實時定量PCR技術(shù)28
• 3.6 細(xì)胞計數(shù)（血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法）28-29
• 3.7 藥物MTT實驗29
• 3.8 細(xì)胞劃痕實驗29-30
• 3.9 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）30-33
• 3.10統(tǒng)計學(xué)方法33-34
• 結(jié)果34-38
• 1. MTT法 測試阿霉素對胃癌細(xì)胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR細(xì)胞增殖的影響34
• 2. RT-qPCR實驗法檢測miR-200c在胃癌細(xì)胞SGC-7901及胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中的表達(dá)水平34-35
• 3. 顯微鏡下胃癌細(xì)胞SGC-7901及胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR形態(tài)的變化35-36
• 4. 細(xì)胞劃痕實驗檢測胃癌細(xì)胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細(xì)胞SGC-7901/ADR的侵襲性36
• 5. 熒光定量PCR檢 測胃癌細(xì)胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中SnailmRNA、Twist1mRNA的表達(dá)36-37
• 6. 蛋白免疫印跡法檢測胃癌細(xì)胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中E-Cadherin、MRP-1 蛋白的表達(dá)情況37-38
• 討論38-39
• 小結(jié)39-40
• 第三部分 miR-200c對于胃癌耐藥細(xì)胞SGC-7901/ADR的影響40-48
• 1. 研究目的40
• 2. 實驗材料40-41
• 1.1 細(xì)胞系40
• 1.2 主要試劑40-41
• 1.3 主要儀器設(shè)備41
• 3. 研究方法41-43
• 3.1 細(xì)胞復(fù)蘇41
• 3.2 細(xì)胞換液41
• 3.3 細(xì)胞傳代41
• 3.4 細(xì)胞凍存41
• 3.5 實時定量PCR技術(shù)41
• 3.6 細(xì)胞計數(shù)（血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法）41
• 3.7 藥物MTT實驗41
• 3.8 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）41
• 3.9 細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)41-42
• 3.10統(tǒng)計學(xué)方法42-43
• 結(jié)果43-46
• 1. 人胃癌耐藥細(xì)胞株SGC-7901/ADR瞬時轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics、Has-miR-200c inhibitors后，RT-qPCR技術(shù)檢測胃癌細(xì)胞中miR-200c中的表達(dá)水平43-44
• 2. MTT法測試阿霉素對轉(zhuǎn)染前后胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR細(xì)胞增殖的影響44
• 3. 熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中SnailmRNA、Twist1mRNA的表達(dá)44-45
• 4. 蛋白免疫印跡法檢測胃癌細(xì)胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細(xì)胞株SGC-7901/ADR中E-Cadherin、MRP-1 蛋白的表達(dá)情況45-46
• 討論46-47
• 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 1 主要結(jié)論48
• 2 研究缺陷與展望48-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 在學(xué)期間的研究成果55-56
• 致謝56

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本文編號：310438