本文關(guān)鍵詞：miR-200c對胃癌細胞的影響及其在耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過檢測miR-200c在不同分化程度的胃癌細胞系中的表達,探討miR-200c對胃癌細胞的影響;通過檢測相關(guān)指標測定胃癌細胞耐藥性及其耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化間的關(guān)系及miR-200c在兩者中的作用。方法:利用RT-qPCR技術(shù)分別測定不同分化程度的胃癌細胞中miR-200c的表達水平,初步探討miR-200c在胃癌細胞中的作用,并根據(jù)miR-200c的表達水平篩選出下一步實驗的目的胃癌細胞系SGC-7901。我們選取胃癌細胞SGC-7901及其耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR,利用MTT實驗檢測在不同阿霉素濃度相同時間下針對不同細胞株的細胞抑制率及蛋白免疫印記法檢測MRP-1在蛋白水平的表達,隨后進行細胞形態(tài)觀察,劃痕實驗檢測細胞的侵襲能力,RT-qPCR技術(shù)檢測miR-200c的表達水平及熒光定量PCR技術(shù)檢測SnailmRNA、Twist1mRNA的表達情況,蛋白免疫印記法檢測E-Cadherin在蛋白水平的表達,初步探討耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間的相關(guān)性。利用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)將特異性miR-200c mimics和miR-200c inhibitor序列轉(zhuǎn)染至耐阿霉素胃癌細胞株SGC-7901/ADR中,將細胞分為兩組,設置實驗組為轉(zhuǎn)染miR-200c mimics、miR-200c inhibitor的胃癌細胞株SGC-7901/ADR,Blank組為未轉(zhuǎn)染的胃癌細胞株SGC-7901/ADR。應用RT-qPCR檢測miR-200c轉(zhuǎn)染的效率;熒光定量PCR技術(shù)檢測SnailmRNA、Twist1mRNA的表達情況,蛋白免疫印記法檢測各組細胞中E-Cadherin和MRP-1在蛋白水平的表達;MTT法檢測各組細胞的抑制率。結(jié)果:miR-200c在不同分化程度的胃癌細胞系中的表達水平不同,分化程度越高表達水平越多。針對胃癌細胞系SGC-7901及其耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR,在MTT實驗法及蛋白免疫印記法檢測MRP-1的表達證實兩組細胞具有明顯的耐藥性的情況下,我們觀察到在耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中,細胞形態(tài)呈梭型,相比較胃癌細胞SGC-7901,細胞間距較大,排列、聚合松散,形狀相對較多樣,可見明顯偽足,符合EMT的形態(tài)學特征;劃痕實驗中胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR在相同時間及培養(yǎng)條件下,較胃癌細胞SGC-7901具有更強的侵襲能力;蛋白E-Cadherin明顯下降,其中EMT特征基因Snail1mRNA、Twist1mRNA明顯上升,符合EMT的分子學改變。在胃癌細胞SGC-7901及耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中,miR-200c在胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR的濃度較胃癌細胞SGC-7901較少,約為其0.4倍,具有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05)。miR-200c表達水平在瞬時轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics、Has-mi R-200c inhibitor胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR較分別較未轉(zhuǎn)染組升高約4.7倍、降低約2.5倍,均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。MTT法檢測各組細胞抑制率可得,細胞抑制率在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細胞株中為最高,未轉(zhuǎn)染組居中,轉(zhuǎn)染Has-miR-200c inhibitor耐藥細胞株為最低。EMT特征基因Snail1mRNA、Twist1mRNA表達水平在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細胞株中明顯下降,在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c inhibitor耐藥細胞株中明顯上升。蛋白E-Cadherin在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細胞株中明顯上升,而在轉(zhuǎn)染Has-mi R-200c inhibitor耐藥細胞株中明顯下降;蛋白MRP-1在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics耐藥細胞株中明顯下降,而在轉(zhuǎn)染Has-miR-200c inhibitor耐藥細胞株中明顯上升。結(jié)論:miR-200c在不同分化程度的胃癌細胞中表達水平具有差異性。耐藥的胃癌細胞具有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的趨勢。miR-200c具有調(diào)節(jié)胃癌細胞耐藥性及發(fā)生EMT的作用,且與胃癌耐藥性及EMT的發(fā)生呈負相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：miR-200c 胃癌 耐藥 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮略詞7-12
• 前言12-16
• 第一部分 miR-200c在不同胃癌細胞系中表達水平的鑒定16-26
• 1. 目的16
• 2. 實驗材料16-18
• 2.1 細胞系16
• 2.2 相關(guān)試劑16-17
• 2.3 主要實驗儀器及設備17
• 2.4 實驗中配制的主要溶液17-18
• 3. 實驗方法18-23
• 3.1 細胞復蘇18
• 3.2 細胞換液18-19
• 3.3 細胞傳代19
• 3.4 細胞凍存19-20
• 3.5 實時定量PCR技術(shù)20-22
• 3.6 統(tǒng)計學方法22-23
• 結(jié)果23-24
• 討論24-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 miR-200c和胃癌細胞耐藥性與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化間的相關(guān)關(guān)系26-40
• 1. 研究目的26
• 2. 實驗材料26-28
• 2.1 細胞系26
• 2.2 相關(guān)試劑26-27
• 2.3 主要實驗儀器及設備27
• 2.4 實驗中配制的主要溶液27-28
• 3. 實驗方法28-34
• 3.1 細胞復蘇28
• 3.2 細胞換液28
• 3.3 細胞傳代28
• 3.4 細胞凍存28
• 3.5 實時定量PCR技術(shù)28
• 3.6 細胞計數(shù)（血細胞計數(shù)板計數(shù)法）28-29
• 3.7 藥物MTT實驗29
• 3.8 細胞劃痕實驗29-30
• 3.9 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）30-33
• 3.10統(tǒng)計學方法33-34
• 結(jié)果34-38
• 1. MTT法 測試阿霉素對胃癌細胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR細胞增殖的影響34
• 2. RT-qPCR實驗法檢測miR-200c在胃癌細胞SGC-7901及胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中的表達水平34-35
• 3. 顯微鏡下胃癌細胞SGC-7901及胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR形態(tài)的變化35-36
• 4. 細胞劃痕實驗檢測胃癌細胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細胞SGC-7901/ADR的侵襲性36
• 5. 熒光定量PCR檢 測胃癌細胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中SnailmRNA、Twist1mRNA的表達36-37
• 6. 蛋白免疫印跡法檢測胃癌細胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中E-Cadherin、MRP-1 蛋白的表達情況37-38
• 討論38-39
• 小結(jié)39-40
• 第三部分 miR-200c對于胃癌耐藥細胞SGC-7901/ADR的影響40-48
• 1. 研究目的40
• 2. 實驗材料40-41
• 1.1 細胞系40
• 1.2 主要試劑40-41
• 1.3 主要儀器設備41
• 3. 研究方法41-43
• 3.1 細胞復蘇41
• 3.2 細胞換液41
• 3.3 細胞傳代41
• 3.4 細胞凍存41
• 3.5 實時定量PCR技術(shù)41
• 3.6 細胞計數(shù)（血細胞計數(shù)板計數(shù)法）41
• 3.7 藥物MTT實驗41
• 3.8 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）41
• 3.9 細胞瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)41-42
• 3.10統(tǒng)計學方法42-43
• 結(jié)果43-46
• 1. 人胃癌耐藥細胞株SGC-7901/ADR瞬時轉(zhuǎn)染Has-miR-200c mimics、Has-miR-200c inhibitors后，RT-qPCR技術(shù)檢測胃癌細胞中miR-200c中的表達水平43-44
• 2. MTT法測試阿霉素對轉(zhuǎn)染前后胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR細胞增殖的影響44
• 3. 熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中SnailmRNA、Twist1mRNA的表達44-45
• 4. 蛋白免疫印跡法檢測胃癌細胞SGC-7901及 胃癌耐阿霉素細胞株SGC-7901/ADR中E-Cadherin、MRP-1 蛋白的表達情況45-46
• 討論46-47
• 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 1 主要結(jié)論48
• 2 研究缺陷與展望48-49
• 參考文獻49-55
• 在學期間的研究成果55-56
• 致謝56

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