本文關(guān)鍵詞：人乳腺腫瘤干細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定及低氧對(duì)乳腺腫瘤干細(xì)胞特性影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《寧夏醫(yī)科大學(xué)》 2013年

人乳腺腫瘤干細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定及低氧對(duì)乳腺腫瘤干細(xì)胞特性影響的研究

何亞琴  

【摘要】：乳腺癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，屬高發(fā)病、高死亡率疾病。腫瘤術(shù)后出現(xiàn)較高的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率，同時(shí)伴有對(duì)放化療的抗藥性是其高死亡率的原因之一。近年來(lái)腫瘤干細(xì)胞理論的提出突破了以往對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識(shí)，認(rèn)為腫瘤的發(fā)生以及對(duì)放化療的抗藥性源于腫瘤組織中的腫瘤干細(xì)胞。這一腫瘤發(fā)生的模型很好的解釋了腫瘤治療失敗的原因，也從細(xì)胞學(xué)的角度提出了腫瘤研究和治療的靶點(diǎn)，為臨床根治腫瘤提供了理論依據(jù)。 為此本研究擬從原代培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中獲得能持續(xù)傳代的腫瘤干細(xì)胞克隆，體外培養(yǎng)鑒定其自我更新能力，明確其表面標(biāo)志物。觀察該細(xì)胞對(duì)低氧微環(huán)境的敏感性，并對(duì)乳腺腫瘤干細(xì)胞的低氧微環(huán)境進(jìn)行初步的探索。希望為臨床乳腺腫瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為乳腺腫瘤的診斷和治療提供新的思路。 第一章人乳腺腫瘤干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定目的：體外分離、培養(yǎng)乳腺腫瘤干細(xì)胞，并鑒定其生物學(xué)特性。方法：收集臨床術(shù)后乳腺癌患者的腫瘤組織，經(jīng)機(jī)械剪切聯(lián)合酶消化法獲得腫瘤細(xì)胞并培養(yǎng)，流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面抗原，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）鑒定細(xì)胞Sox2、Nanog等基因表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞特異性蛋白Bcl-2、孕激素受體(PR)、VEGF、KI-67、E-cadherin的表達(dá)。結(jié)果：所獲得的細(xì)胞呈克隆球樣形態(tài)生長(zhǎng)，鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)其具有CD44~+/CD24~-表型，該細(xì)胞高表達(dá)Sox2、Nanog基因，且Bcl-2、PR、VEGF、KI-67、E-cadherin蛋白均陽(yáng)性表達(dá)；結(jié)論：人乳腺腫瘤組織中存在具有自我更新和增殖能力、表達(dá)CD44~+/CD24~-的乳腺腫瘤干細(xì)胞，，并能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)。 第二章低氧與常氧培養(yǎng)條件下腫瘤干細(xì)胞特性影響比較實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?duì)第一部分實(shí)驗(yàn)鑒定獲得的乳腺腫瘤干細(xì)胞在低氧條件環(huán)境培養(yǎng)及正常條件環(huán)境培養(yǎng)觀察兩種條件下乳腺腫瘤干細(xì)胞特性表達(dá)差異研究。方法：在不同的培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)鑒定不同條件下乳腺腫瘤干細(xì)胞表面抗原表達(dá)，MTT比色法檢測(cè)不同條件下細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）鑒定不同條件下細(xì)胞Sox2、Nanog、HIF等基因表達(dá)。結(jié)果：所培養(yǎng)的乳腺腫瘤干細(xì)胞在不同條件培養(yǎng)下細(xì)胞的表達(dá)差異明顯，低氧條件下培養(yǎng)的乳腺腫瘤干細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)及基因表達(dá)上明顯高于正常條件下乳腺腫瘤干細(xì)胞。結(jié)論：低氧環(huán)境條件可以促進(jìn)乳腺腫瘤干細(xì)胞增殖。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

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