本文關(guān)鍵詞：腫瘤馴化的B淋巴細(xì)胞通過分泌病理性抗體促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移及其相關(guān)機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第二軍醫(yī)大學(xué)》 2013年

腫瘤馴化的B淋巴細(xì)胞通過分泌病理性抗體促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移及其相關(guān)機(jī)制研究

顧炎  

【摘要】：腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病，而腫瘤轉(zhuǎn)移則是腫瘤患者死亡的主要原因。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征之一，是指腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位擴(kuò)散到身體的其他部位，并再次增殖成為腫瘤病灶，其過程包括原位腫瘤的侵襲、腫瘤細(xì)胞在循環(huán)中的存活靜息及在遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移部位的定居與克隆形成。在腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究方面，“種子”與“土壤”假說得到了腫瘤免疫學(xué)領(lǐng)域研究人員的普遍認(rèn)可。腫瘤微環(huán)境作為腫瘤發(fā)生的“土壤”是近年來該領(lǐng)域研究前沿?zé)狳c(diǎn)之一。腫瘤細(xì)胞通過產(chǎn)生大量膜型和分泌型生物活性物質(zhì)（Tumor-derived factors, TDFs）誘導(dǎo)基質(zhì)和相關(guān)免疫細(xì)胞功能轉(zhuǎn)化，形成穩(wěn)定的腫瘤免疫微環(huán)境，保護(hù)腫瘤組織逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視并促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。隨著腫瘤的進(jìn)程，腫瘤組織及遠(yuǎn)隔器官中的免疫細(xì)胞能通過與腫瘤細(xì)胞相互接觸或分泌可溶性的細(xì)胞因子而改變腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的能力。2005年Kaplan教授提出的腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境假說，該假說認(rèn)為大量腫瘤細(xì)胞馴化的細(xì)胞以及腫瘤來源的分子先于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入待轉(zhuǎn)移器官為腫瘤轉(zhuǎn)移提供土壤并指示方向趨化腫瘤種子進(jìn)入該器官。越來越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持該假說，多種免疫細(xì)胞亞群及分子被證實(shí)參與腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成，包括免疫抑制性細(xì)胞如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells, Tregs）、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-associated macrophages, TAMs）、髓系來源的抑制性細(xì)胞（Myeloid-derived suppressor cells, MDSCs）等，以及一氧化氮（NO）、精氨酸酶（Arginase，ARG）等免疫抑制分子。因此，研究腫瘤免疫微環(huán)境的產(chǎn)生機(jī)制、如何打破抑制性腫瘤免疫微環(huán)境以及如何誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞的功能逆轉(zhuǎn)成為腫瘤免疫治療學(xué)界關(guān)注的重點(diǎn)。 B淋巴細(xì)胞是在機(jī)體體液免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用的免疫細(xì)胞，廣泛分布于血液、脾臟、淋巴結(jié)及其他粘膜組織中。B細(xì)胞在抗原刺激下可分化為漿細(xì)胞，合成和分泌免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig），主要執(zhí)行機(jī)體的體液免疫功能。B細(xì)胞的主要功能是分泌抗體，腫瘤細(xì)胞因表達(dá)腫瘤抗原而能激活B細(xì)胞，進(jìn)一步分化發(fā)育為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可分泌具有抗腫瘤作用的抗體。這些抗體可通過激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞、介導(dǎo)巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞發(fā)揮ADCC效應(yīng)以及封閉腫瘤細(xì)胞上的某些受體（如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體）以抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移等�？贵w在腫瘤中的研究大部分是尋找針對(duì)腫瘤相關(guān)抗原的特異性抗體以治療腫瘤，抗體療法也是目前靶向治療腫瘤的主要方法。病理性抗體（Pathogenic antibody）概念的提出改變了人們對(duì)抗體的認(rèn)識(shí)。研究證實(shí)其在抑制損傷修復(fù)、促進(jìn)自身免疫病發(fā)病等方面都存在重要作用。也有研究表明B細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體通過與免疫細(xì)胞Fc受體的結(jié)合對(duì)腫瘤發(fā)生起到促進(jìn)作用，這也是炎癥導(dǎo)致腫瘤的機(jī)制之一。但病理性抗體影響腫瘤免疫的研究尚處起步階段，機(jī)理研究尚不透徹，而且對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移的作用也鮮有研究。 相對(duì)于T細(xì)胞而言，B細(xì)胞在腫瘤免疫中的研究還很少。1998年德國(guó)ThomasBlankenstein教授等與本實(shí)驗(yàn)室合作研究發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞對(duì)于細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CytotoxicT lymphocytes, CTL）抗腫瘤免疫起到抑制作用，由此，B細(xì)胞對(duì)腫瘤的負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能逐漸為研究者所重視，目前，多種具有免疫抑制功能的B細(xì)胞亞群陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，尤其是一類分泌IL-10的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Regulatory B cells）。大量研究及臨床數(shù)據(jù)顯示，這些具有負(fù)向免疫調(diào)控功能的B細(xì)胞在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。因此，腫瘤馴化的B細(xì)胞及其所分泌的病理性抗體在腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境形成和腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用已成為腫瘤免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。 基于以上研究進(jìn)展和現(xiàn)狀分析，我們深入研究了腫瘤微環(huán)境對(duì)于B細(xì)胞功能的馴化以及其分泌抗體的影響，并且發(fā)現(xiàn)了荷瘤小鼠體內(nèi)存在大量腫瘤特異性抗體，這些病理性抗體能夠促進(jìn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步機(jī)制研究證實(shí)趨化因子及其受體SDF1α/CXCR4在其中發(fā)揮了重要的功能。通過上述研究，我們發(fā)現(xiàn)了B細(xì)胞及抗體參與腫瘤免疫調(diào)控的多樣化功能。 我們的研究分為以下三個(gè)部分： 1、腫瘤馴化的B細(xì)胞及其分泌的病理性抗體的發(fā)現(xiàn) 為研究腫瘤馴化下的淋巴結(jié)微環(huán)境對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移的影響，我們制備了小鼠乳腺癌4T1原位種植模型，分析腫瘤引流淋巴結(jié)（Draining lymph node， DLN）中各淋巴細(xì) 胞群體尤其是B細(xì)胞數(shù)量及比例的變化。通過流式分析，我們發(fā)現(xiàn)伴隨著腫瘤的進(jìn)展DLN中B細(xì)胞比例及數(shù)量明顯增加。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)顯示，在荷瘤早期（1周內(nèi)）B細(xì)胞比例開始升高，2-3周顯著上升，后達(dá)到平臺(tái)期，直至淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。而淋巴結(jié)中T細(xì)胞、DC及巨噬細(xì)胞的比例則隨著荷瘤時(shí)間增長(zhǎng)比例呈下降趨勢(shì)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果在另一小鼠乳腺癌模型EMT6中進(jìn)一步得到驗(yàn)證。以上實(shí)驗(yàn)表明，B細(xì)胞在腫瘤的馴化下于淋巴結(jié)中大量聚集，尤其是在DLN中，而DLN往往是乳腺癌轉(zhuǎn)移的首站，提示腫瘤馴化B細(xì)胞有可能參與到乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的免疫調(diào)控中。 我們進(jìn)一步探討了B細(xì)胞在淋巴結(jié)中聚集的影響因素。首先，我們利用Brdu體內(nèi)增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)荷瘤后B細(xì)胞在LN中的增殖情況，研究發(fā)現(xiàn)，DLN中B細(xì)胞增殖的比例較正常對(duì)照LN有所增高。其次，我們對(duì)DLN中的基質(zhì)細(xì)胞趨化B細(xì)胞的能力進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，來源于DLN的基質(zhì)細(xì)胞較之對(duì)照LN對(duì)B細(xì)胞的趨化能力明顯增強(qiáng)。我們的研究表明，小鼠乳腺癌能夠通過影響淋巴結(jié)基質(zhì)微環(huán)境增強(qiáng)對(duì)B細(xì)胞的趨化，并促使B細(xì)胞發(fā)生增殖，使得B細(xì)胞在DLN中的數(shù)量不斷增加。 為進(jìn)一步明確腫瘤馴化下的B細(xì)胞性質(zhì)及功能，我們檢測(cè)了不同來源B細(xì)胞的表面標(biāo)記、細(xì)胞因子及免疫球蛋白譜（Immunoglobulin, Ig）。流式分析發(fā)現(xiàn)DLN中B細(xì)胞表達(dá)的與其分型相關(guān)的標(biāo)記（CD1d、CD5、IgM、IgD、CD21、CD23）與對(duì)照組相比無明顯差異，而活化型標(biāo)記（CD25、CD69）則在DLN B細(xì)胞當(dāng)中表達(dá)增高。ELISA檢測(cè)B細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子顯示各組B細(xì)胞分泌IL10、IL6、TNFα、PGE2、TGFβ、INFγ、IL12p70及IL2水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。體外利用LPS刺激后，對(duì)其免疫球蛋白譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，DLN B細(xì)胞分泌IgG水平較其他組明顯增高，這與表達(dá)譜芯片的檢測(cè)結(jié)果一致。同時(shí)，我們檢測(cè)了小鼠體內(nèi)Ig的表達(dá)情況，與體外結(jié)果相符，，荷瘤小鼠體內(nèi)IgG1、IgG2a及IgG2b水平要高于正常對(duì)照小鼠。 為了研究荷瘤小鼠體內(nèi)這些病理性抗體的特征，我們用純化后的IgG孵育腫瘤細(xì)胞，標(biāo)記熒光二抗，利用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。流式結(jié)果顯示，與正常IgG相比，腫瘤來源的IgG能夠特異性結(jié)合乳腺癌細(xì)胞。同樣，激光共聚焦顯微鏡結(jié)果也證實(shí)，腫瘤來源IgG能夠與腫瘤細(xì)胞表面分子特異性結(jié)合。 以上研究表明，伴隨著腫瘤進(jìn)程，乳腺癌小鼠DLN中B細(xì)胞的比例及數(shù)量逐漸增多。進(jìn)一步表型及細(xì)胞因子表達(dá)譜結(jié)果顯示，腫瘤馴化B細(xì)胞為一群活化的B細(xì)胞，其分泌抗體的能力增強(qiáng)，同時(shí)荷瘤小鼠體內(nèi)抗體水平也增高，提純體內(nèi)IgG研究發(fā)現(xiàn)，該抗體在體外能夠結(jié)合腫瘤細(xì)胞，具有腫瘤特異性。以上研究為腫瘤微環(huán)境影響B(tài)細(xì)胞提供了新的認(rèn)識(shí)，同時(shí)也為進(jìn)一步研究腫瘤馴化B細(xì)胞及其所產(chǎn)生的抗體在腫瘤免疫逃逸中的作用提供了依據(jù)。 2、腫瘤馴化的B細(xì)胞與病理性抗體在乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用研究 為研究腫瘤馴化B細(xì)胞及其分泌的抗體對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移的影響，我們應(yīng)用B細(xì)胞缺陷μMT-/-小鼠進(jìn)行原位乳腺癌種植，并對(duì)荷瘤小鼠給予不同來源IgG回輸�；铙w熒光成像結(jié)果顯示μMT-/-小鼠荷瘤后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的個(gè)數(shù)較正常小鼠明顯減少，但回輸了病理性IgG的小鼠其腫瘤轉(zhuǎn)移的能力又顯著增強(qiáng)，而回輸正常IgG則沒有該效應(yīng)。進(jìn)一步生存實(shí)驗(yàn)表明，回輸病理性IgG后μMT-/-小鼠的生存時(shí)間明顯縮短，與正常小鼠一致。我們也檢測(cè)了各組小鼠的腫瘤大小，發(fā)現(xiàn)回輸IgG對(duì)腫瘤大小無明顯影響。 我們又利用體外實(shí)驗(yàn)研究病理性IgG對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移中涉及的增殖、凋亡、趨化及侵襲因素的影響。MTT法增殖實(shí)驗(yàn)顯示，病理性IgG對(duì)于腫瘤細(xì)胞的增殖無明顯影響。在化療藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡體系中，我們發(fā)現(xiàn)病理性IgG能夠明顯抑制阿霉素所誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡，而正常對(duì)照IgG無該效應(yīng)。Tranwell趨化實(shí)驗(yàn)顯示，與空白對(duì)照及正常IgG比較，病理性IgG能夠明顯增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞向下層淋巴結(jié)基質(zhì)的趨化能力。侵襲實(shí)驗(yàn)也有相似結(jié)果。 以上實(shí)驗(yàn)表明，腫瘤馴化的B細(xì)胞不僅能夠通過分泌病理性IgG顯著促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而且影響了腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的多個(gè)環(huán)節(jié)，包括抵抗凋亡、侵襲及向淋巴結(jié)趨化能力，尤其是腫瘤細(xì)胞的趨化，使其到達(dá)轉(zhuǎn)移部位定居，形成轉(zhuǎn)移灶。既往研究證明多種趨化因子及受體參與腫瘤轉(zhuǎn)移過程，如SDF1a/CXCR4、CCL21/CCR7等，因而，我們?cè)诮酉聛硌芯磕[瘤馴化的B細(xì)胞誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的具體分子機(jī)制時(shí)也重點(diǎn)關(guān)注了腫瘤馴化的B細(xì)胞與影響腫瘤趨化的趨化因子及受體之間的相關(guān)性。 3、腫瘤馴化的B細(xì)胞與病理性抗體促進(jìn)乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究 前面的結(jié)果提示，病理性IgG能夠促進(jìn)乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，我們推測(cè)趨化因子及其受體可能參與到該過程。有研究報(bào)道，腫瘤細(xì)胞高表達(dá)趨化因子受體主要是CXCR4和CCR7，其中，SDF1α/CXCR4則是腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移最為重要的趨化因素。因此，我們檢測(cè)了IgG刺激后腫瘤細(xì)胞這兩種趨化因子受體的表達(dá)情況。定量PCR結(jié)果顯示，病理性IgG能夠明顯刺激腫瘤細(xì)胞CXCR4mRNA水平的表達(dá)，而正常IgG無該效應(yīng)，蛋白水平檢測(cè)得到了同樣的結(jié)果。病理性IgG是如何促進(jìn)CXCR4的表達(dá)？我們?cè)隗w外檢測(cè)了IgG刺激后腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)，結(jié)果顯示，Hif1α及Cox2的表達(dá)明顯增高。Hif1α是腫瘤適應(yīng)低氧環(huán)境所產(chǎn)生的主要調(diào)控因子之一，其表達(dá)的高低與腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。有報(bào)道稱Hif1α能夠通過誘導(dǎo)CXCR4表達(dá)從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移，而SDF1α/CXCR4則是腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移最為重要的趨化因素。為了驗(yàn)證是否病理性IgG誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞Hif1α從而促進(jìn)CXCR4表達(dá)上調(diào)，我們檢測(cè)了不同IgG劑量以及不同時(shí)間刺激下腫瘤細(xì)胞在mRNA及蛋白水平表達(dá)Hif1α的情況。結(jié)果提示，與CXCR4表達(dá)變化一致，腫瘤細(xì)胞在病理性IgG刺激24小時(shí)后，其表達(dá)的Hif1α的水平明顯增高，且隨著刺激濃度及時(shí)間的增加而不斷增高，相反如果用RNA干擾阻斷Hif1α的表達(dá)，CXCR4的上調(diào)幅度受到明顯的抑制。 我們又對(duì)基質(zhì)細(xì)胞分泌CXCR4配體SDF-1α的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了研究，利用IgG刺激后腫瘤條件培養(yǎng)基培養(yǎng)基質(zhì)細(xì)胞，檢測(cè)基質(zhì)分泌SDF-1α的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病理性IgG刺激后的腫瘤上清能夠促進(jìn)SDF-1α的分泌。既往研究表明細(xì)胞因子IL-1β、TGF-β、TNF-α以及PGE2等能夠調(diào)控SDF-1α的分泌。我們用ELISA檢測(cè)病理性IgG刺激腫瘤細(xì)胞上清中細(xì)胞因子的種類，發(fā)現(xiàn)病理性IgG能夠刺激腫瘤細(xì)胞分泌大量的PGE2；同時(shí)，我們檢測(cè)了腫瘤細(xì)胞在病理性IgG刺激后相關(guān)基因的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)Cox2在刺激后明顯增高，病理性IgG刺激24h后隨著刺激時(shí)間的增長(zhǎng)，Cox2mRNA水平的表達(dá)明顯增加。所以我們推測(cè)腫瘤細(xì)胞能夠通過Cox2介導(dǎo)的PGE2對(duì)淋巴結(jié)基質(zhì)分泌SDF-1α起到調(diào)控作用。為了進(jìn)一步驗(yàn)證PGE2對(duì)于SDF-1α的分泌是否有調(diào)控作用，我們利用上述基質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)體系中，當(dāng)干擾了腫瘤細(xì)胞Cox2的表達(dá)后SDF-1α的升高效應(yīng)受到明顯抑制，如果在培養(yǎng)體系中直接加入PGE2，又能刺激SDF-1α的分泌。因此，該結(jié)果表明Cox2介導(dǎo)的PGE2增高是病理性IgG刺激后的腫瘤上清促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞SDF1α分泌的影響因素。 上述研究提示病理性IgG能夠刺激腫瘤細(xì)胞Cox2及Hif1α的表達(dá)，從而促進(jìn)SDF1α與CXCR4這對(duì)趨化因子軸功能的發(fā)揮，病理性IgG與腫瘤細(xì)胞相互作用的具體靶點(diǎn)及傳導(dǎo)途徑尚不清楚；接下來，我們進(jìn)一步深入研究病理性IgG介導(dǎo)Cox2及Hif1α表達(dá)增高具體分子機(jī)制。已有文獻(xiàn)報(bào)道，腫瘤細(xì)胞Hif1α及Cox2的表達(dá)受到多個(gè)信號(hào)通路的調(diào)控，如NF-kB、Ras-MAPK等。為檢測(cè)病理性IgG刺激腫瘤細(xì)胞后下游信號(hào)通路的活化情況，我們?cè)谠摯碳んw系中加入不同信號(hào)通路的阻斷劑。結(jié)果顯示，NF-kB通路阻斷劑PDTC能夠明顯抑制IgG刺激的腫瘤細(xì)胞Hif1α及Cox2的上調(diào)。 接下來，我們又對(duì)病理性IgG如何刺激腫瘤細(xì)胞NF-κB通路的活化進(jìn)行了研究。首先，我們排除了腫瘤細(xì)胞表面Fc受體參與該活化過程，并證實(shí)IgG與腫瘤細(xì)胞表面靶抗原的結(jié)合是引起胞內(nèi)NF-κB通路活化的原因。為尋找靶抗原，我們分離了腫瘤細(xì)胞膜蛋白，通過co-IP后進(jìn)行蛋白質(zhì)譜檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)了15個(gè)候選蛋白（Adam10、Nucleolin、Itgb3、Mucin1、Hspa4、Moesin、CD151、Enolase1、Itgb5、TfR1、Erzin、Radixin、Erbb2），siRNA干擾后NF-kB活化程度下降的有Itgb3、Nucleolin、TfR1、Enolase1、Hspa4、Erbb2。為做進(jìn)一步篩選，我們?cè)?93T細(xì)胞中過表達(dá)基因Itgb3、Nucleolin、TfR1、Enolase1、Hspa4、Erbb2，病理性IgG刺激后檢測(cè)NF-kB報(bào)告基因表達(dá)程度，結(jié)果顯示，293T細(xì)胞本身不能被IgG所刺激，在過表達(dá)Nucleolin、Hspa4、Itgb3后NF-kB表達(dá)活性明顯增強(qiáng)。為確定靶抗原，我們通過免疫共沉淀（IP）利用Flag抗體將293T細(xì)胞中目的蛋白Nucleolin、Hspa4及Itgb3純化，免疫印跡（IB）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)病理性IgG能夠結(jié)合Hspa4，而不能結(jié)合Nucleolin及Itgb3。進(jìn)一步共聚焦顯微鏡檢測(cè)顯示，干擾了4T1細(xì)胞Hspa4后，病理性IgG在胞膜表面的結(jié)合明顯減少。以上結(jié)果提示針對(duì)靶抗原Hspa4的特異性抗體通過抗原與抗體特異性結(jié)合介導(dǎo)NF-kB傳導(dǎo)通路的活化從而誘導(dǎo)下游的Hif1α及Cox2表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)SDF1α與CXCR4這對(duì)趨化因子軸發(fā)揮效應(yīng)介導(dǎo)了轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成以及腫瘤細(xì)胞的定向轉(zhuǎn)移，具體分子機(jī)制尚需要進(jìn)一步驗(yàn)證與深入研究。 綜上所述，我們研究發(fā)現(xiàn)腫瘤影響下的DLN中B細(xì)胞比例及數(shù)量顯著增加。特征分析顯示，這群腫瘤馴化的B細(xì)胞分泌抗體的能力明顯增強(qiáng)，尤其是IgG1、IgG2a及IgG2b，但是該B細(xì)胞大部分表面分子及細(xì)胞因子表達(dá)譜與正常B細(xì)胞沒有明顯差異。對(duì)荷瘤小鼠體內(nèi)病理性IgG研究顯示其具有腫瘤抗原特異性，能夠結(jié)合在腫瘤細(xì)胞表面。體內(nèi)功能試驗(yàn)證實(shí)，B細(xì)胞缺失以后，荷瘤小鼠淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的個(gè)數(shù)明顯減少，而回輸了病理性IgG的小鼠其腫瘤轉(zhuǎn)移的能力顯著增強(qiáng)。進(jìn)一步分子機(jī)制探討表明，病理性IgG能夠通過結(jié)合特異性腫瘤抗原Hspa4，刺激下游NF-κB通路的活化，從而上調(diào)Hif1α及Cox2的表達(dá)。Hif1α的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CXCR4，而Cox2介導(dǎo)的PGE2分泌則誘導(dǎo)淋巴結(jié)基質(zhì)細(xì)胞分泌趨化因子SDF1α，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境形成并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向引流淋巴結(jié)的遷移。 本課題研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌發(fā)展過程中，腫瘤馴化下的B細(xì)胞及其分泌病理性抗體能夠促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并對(duì)其具體分子調(diào)控機(jī)制進(jìn)行深入研究，證實(shí)在腫瘤免疫調(diào)控過程中，B細(xì)胞不僅能夠通過分泌IL-10和TGFβ發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)控作用而且能夠通過產(chǎn)生病理性抗體參與腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移。該研究結(jié)果不僅拓寬了人們對(duì)于B細(xì)胞及抗體性質(zhì)與功能的認(rèn)識(shí)，也為腫瘤免疫逃逸和腫瘤轉(zhuǎn)移提出新的作用機(jī)制，為全面認(rèn)識(shí)復(fù)雜而精細(xì)的腫瘤免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了新的視角，也有望為腫瘤的臨床治療及轉(zhuǎn)移防治方法的尋找提供新的啟示。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

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【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙榮志;吳志浩;周清華;;上皮細(xì)胞間質(zhì)化與腫瘤的轉(zhuǎn)移[J];中國(guó)肺癌雜志;2011年07期

2 吳娟;黃宇帆;吳迪;;TRAF6與乳腺癌細(xì)胞遷移的關(guān)系[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年05期

3 周紅;許文;陳小娥;;瘢痕疙瘩同位素治療方法的臨床研究[J];東南國(guó)防醫(yī)藥;2013年04期

4 崔永奇;耿沁;顧愛琴;朱淼鑫;孔韓衛(wèi);孫磊;劉蕾;閆明霞;姚明;;肺腺癌骨轉(zhuǎn)移裸小鼠模型的建立及MicroCT觀察[J];中國(guó)肺癌雜志;2013年09期

5 李海明;;動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI在卵巢腫瘤中的研究進(jìn)展[J];放射學(xué)實(shí)踐;2013年09期

6 李艷華;魏素菊;;凝血功能與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2013年12期

7 王赟;柯飛;趙安芳;陳蘭英;;自噬在癌癥發(fā)生中的雙重作用[J];癌變.畸變.突變;2013年06期

8 王閣;李建;;重視影像學(xué)檢查在肝占位性病變鑒別診斷中的地位[J];實(shí)用肝臟病雜志;2013年05期

9 侯長(zhǎng)軍;劉芳;;不同療法治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞所致黃斑水腫的療效評(píng)價(jià)[J];國(guó)際眼科雜志;2013年12期

10 Frédéric Biemar;Margaret Foti;;Global progress against cancer—challenges and opportunities[J];Cancer Biology & Medicine;2013年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 Xuejun Jiang;Zunzhen Zhang;;Sodium arsenite and arsenic trioxide differently affect the oxidative stress,genotoxicity and apoptosis in A549 cells:an implication for the paradoxical mechanism[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專題）論文集（下冊(cè)，墻報(bào)P25-P48）[C];2013年

2 范勝軍;李學(xué)軍;;Layered signaling regulatory networks analysis of gene expression involved in malignant tumorigenesis of non-resolving ulcerative colitis via integration of cross-study microarray profiles[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專題）論文集（中冊(cè)，墻報(bào)P1-P24）[C];2013年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 屈永濤;低氧微環(huán)境對(duì)體外培養(yǎng)hep-2頭頸鱗癌細(xì)胞系CSC增殖與分化的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

2 蔣敬庭;協(xié)同刺激分子B7-H4在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2011年

3 陳葉珊;eNOS和ROS介導(dǎo)的辛伐他汀對(duì)腫瘤血管正�；饔玫某醪窖芯縖D];華中科技大學(xué);2012年

4 曲歌平;低氧條件下三氧化二砷通過細(xì)胞周期阻滯及誘導(dǎo)凋亡抑制肺癌細(xì)胞增殖[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 張琳;低氧誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞可塑性的分子機(jī)制及與侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 崔乃鵬;基因半相合腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

7 高盈;RACK1對(duì)肺腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移旳影響及臨床意義[D];中南大學(xué);2012年

8 王鑫鑫;SIRT1對(duì)胃癌惡性生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

9 楊巧慧;基于絡(luò)病理論探討VEGF、MVD、LVD與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

10 朱智能;FOXQ1介導(dǎo)TGF-β1/Smad信號(hào)通路調(diào)控膀胱癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 初建虎;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C及細(xì)胞外基質(zhì)與非小細(xì)胞肺癌[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

2 王元元;腫瘤微環(huán)境與表觀遺傳學(xué)對(duì)乳腺癌的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

3 任曉敏;冷熱交替熱物理治療腫瘤生物學(xué)效應(yīng)研究[D];上海交通大學(xué);2013年

4 楊斌;營(yíng)養(yǎng)剝奪促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)的肝癌細(xì)胞自噬依賴性侵襲[D];華中科技大學(xué);2012年

5 李園園;吉西他濱衍生物SL-01對(duì)人乳腺癌的抑制作用研究[D];山東大學(xué);2013年

6 陳小慧;p53、p21、VEGF和CXCR4在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義[D];蘇州大學(xué);2013年

7 吳庭楓;A2B5~+/CD133~-與CD133~+/A2B5~-膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球表型特點(diǎn)及其移植瘤病理實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

8 徐榮偉;TGF-β1、VEGF表達(dá)與大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系[D];山東大學(xué);2013年

9 劉博;戊乙奎醚對(duì)內(nèi)毒素致新生大鼠急性肺損傷時(shí)HIF-1α表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

10 陳紅梅;乳腺癌間質(zhì)反應(yīng)的X線表現(xiàn)與其侵襲程度關(guān)系的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 Cattaneo L.;CucurachiL.;Chierici E.;Pavesi G.;劉凱;;2例以病理性打哈欠為癥狀的腦干缺血患者[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊(cè));2006年04期

2 梁鈞鶴;用阿米替林治療病理性大笑和流淚[J];新醫(yī)學(xué);1987年02期

3 王福根;伴有病理性發(fā)笑的后顱窩腫瘤[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;1977年05期

4 宋桂華,趙成英,李素榮;非病理性T波倒置(附三例報(bào)告)[J];心電學(xué)雜志;1984年02期

5 陳震!311122,于恩彥!311122,陳炯!311122;病理性縱火1例報(bào)告[J];臨床精神醫(yī)學(xué)雜志;1999年05期

6 慎曜;警惕“病理性”疲勞[J];醫(yī)藥與保健;1994年05期

7 邵志高;藥物對(duì)糞便尿液顏色的影響[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;1982年04期

8 何群鵬;季曙明;;致敏腎移植受者同種異體抗體產(chǎn)生的機(jī)制[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2011年01期

9 陳伯鴻;嬰兒病理性哭吵的病因與診斷[J];湖南醫(yī)學(xué);1994年03期

10 千懷興;病理性哭笑[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)分冊(cè);2000年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳彥方;;病理性上網(wǎng)的多維度診斷和綜合防治[A];首屆全國(guó)網(wǎng)絡(luò)成癮學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 謝建平;;病理性半醒狀態(tài)2例報(bào)告[A];浙江省醫(yī)師協(xié)會(huì)精神科醫(yī)師分會(huì)成立大會(huì)暨二○○八年浙江省精神病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

3 劉喜德;張金祿;葉麗紅;劉風(fēng)云;陳瀅;;抗CCP抗體與未分類關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究[A];2009年浙江省風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

4 李國(guó)華;蘇慧;李志明;高鳳明;姚志勇;方玉東;劉博軍;楊廣;;赤峰地區(qū)雞傳染性法氏囊病(IBD)抗體水平的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與防治研究[A];2003年內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)優(yōu)秀論文集[C];2003年

5 曾曉群;;常山縣2004年人群麻疹免疫水平監(jiān)測(cè)分析[A];第三屆浙江中西部科技論壇論文集（第九卷 預(yù)防分卷）[C];2006年

6 高穎陽;申惠國(guó);陳蓓;楊忠東;陳浩;呂錫宏;居麗雯;;上海地區(qū)在校中學(xué)生接種甲型H1N1流感疫苗前后抗體水平監(jiān)測(cè)分析[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議20周年慶典論文匯編[C];2010年

7 高艷香;馮娟;王憲;;表氧化二十碳三烯酸對(duì)B淋巴細(xì)胞功能的影響[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

8 楊俊興;王川慶;張改平;劉紅英;喬宏興;鞏霞;羅俊;牛明福;皇甫和平;常洪濤;;囊素對(duì)哺乳動(dòng)物免疫促進(jìn)作用的研究——不同劑量囊素對(duì)豬瘟疫苗接種豬抗體水平的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

9 陳士斌;王慶玲;姜麗;;費(fèi)縣正常人群麻疹抗體水平監(jiān)測(cè)[A];山東預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2003年

10 徐躍進(jìn);吳美忠;韋俊超;吳愛蘭;王光銓;;東陽市人群流行性腦脊髓膜炎帶菌及抗體水平調(diào)查[A];第三屆浙江中西部科技論壇論文集（第九卷 預(yù)防分卷）[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陶海;[N];健康報(bào);2005年

2 李小紅 岳金泉;[N];保健時(shí)報(bào);2005年

3 陳立成;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

4 楊琪東;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

5 連孝華;[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

6 健康時(shí)報(bào)特約專家 常章富;[N];健康時(shí)報(bào);2005年

7 江風(fēng);[N];湖北科技報(bào);2003年

8 劉正英;[N];民族醫(yī)藥報(bào);2004年

9 毛嘉陵;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

10 王崇;[N];保健時(shí)報(bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 顧炎;腫瘤馴化的B淋巴細(xì)胞通過分泌病理性抗體促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移及其相關(guān)機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 鮑嫣;新型B細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn)及其免疫調(diào)控功能與機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 張寧;邊緣群細(xì)胞在肝癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 萬亞鋒;肝細(xì)胞癌AFPmRNA轉(zhuǎn)染CD40配體活化的B細(xì)胞誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

5 盧燕來;人γδT細(xì)胞對(duì)A型流感病毒血凝素蛋白及假病毒的免疫應(yīng)答研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

6 楊麗娟;Th17細(xì)胞抗腫瘤作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

7 周瑞;H-T-SCID嵌合體動(dòng)物模型中EBV誘導(dǎo)的CD8~+NKT細(xì)胞抗EBV相關(guān)腫瘤研究[D];武漢大學(xué);2010年

8 孫健;中國(guó)地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點(diǎn)的分析及原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點(diǎn)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 周靜;牙髓、牙周組織中骨髓來源細(xì)胞特性的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 許杰;小鼠iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)以及白血病抑制因子在細(xì)胞重編程過程中的作用機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 屈遠(yuǎn);病理性攻擊大鼠模型構(gòu)建及效果評(píng)估[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

2 劉曉芳;細(xì)胞間接觸在誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 陶學(xué)文;試論高校課堂教學(xué)的病理性癥狀及其診治對(duì)策[D];湖南師范大學(xué);2004年

4 季亞娟;冠心病患者外周血T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的變化相關(guān)性及臨床意義研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

5 張艷;CHL瘤細(xì)胞與背景CD4~+T細(xì)胞關(guān)系的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

6 劉華;胸腺基質(zhì)淋巴生成素對(duì)肺癌患者輔助性T細(xì)胞極化的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

7 黃方;結(jié)核菌素純蛋白衍生物刺激人γδT細(xì)胞效應(yīng)分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

8 崔瑩瑩;凍融抗原負(fù)載的DC-CIK細(xì)胞對(duì)SKOV3的殺傷作用[D];山東大學(xué);2010年

9 陶盛能;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和再生障礙性貧血之間的關(guān)系[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

10 丁景弦;Huh7細(xì)胞中邊緣群細(xì)胞分選及其增殖分裂能力的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤馴化的B淋巴細(xì)胞通過分泌病理性抗體促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移及其相關(guān)機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：165658