本文關(guān)鍵詞：TRAF2和RIP1介導(dǎo)的JNK激活誘導(dǎo)的自噬存活通路降低TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《重慶醫(yī)科大學(xué)》 2013年

TRAF2和RIP1介導(dǎo)的JNK激活誘導(dǎo)的自噬存活通路降低TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的機制研究

何衛(wèi)陽  

【摘要】：目的： 本課題以體外培養(yǎng)的多種腫瘤細胞為研究對象,通過TRAIL進行干預(yù)，觀察TRAIL能否誘導(dǎo)腫瘤細胞自噬以及自噬在TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞自噬中的作用，從細胞信號傳導(dǎo)通路及蛋白水平探討TRAIL誘導(dǎo)自噬以及自噬對不同腫瘤細胞增殖、凋亡影響的作用機制。為增強TRAIL的療效以及逆轉(zhuǎn)TRAIL的耐藥腫瘤奠定實驗理論基礎(chǔ)。 方法： 應(yīng)用TRAIL處理體外培養(yǎng)的UM-UC-3、A549以及PC-3，然后應(yīng)用LDH檢測TRAIL細胞毒性，應(yīng)用Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白表達變化，通過熒光顯微鏡檢測自噬體的變化明確TRAIL能否誘導(dǎo)自噬。然后應(yīng)用自噬抑制劑WTM、CQ以及沉默自噬關(guān)鍵基因ATG7以及Beclin-1抑制自噬觀察對TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的影響，探明自噬在TRAIL誘導(dǎo)凋亡中的作用。應(yīng)用Western blot檢測凋亡信號通路蛋白Caspase8、Caspase3以及PARP的變化；應(yīng)用自噬抑制劑CQ抑制自噬檢測對TRAIL誘導(dǎo)死亡復(fù)合體的影響，應(yīng)用GST Pull Down檢測死亡復(fù)合體蛋白Caspase8、FADD以及RIP1表達的變化，明確自噬對凋亡和死亡復(fù)合體的影響。應(yīng)用JNK抑制劑SP、NF-kB抑制劑IKK2Inhibitor抑制JNK及NF-kB信號通路，觀察其對自噬以及TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的影響，應(yīng)用Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC-3B以及凋亡信號通路蛋白Caspase8、Caspase3以及PARP的變化，探明調(diào)節(jié)自噬的信號通路。應(yīng)用TRAIL處理體外培養(yǎng)的腫瘤細胞UM-UC-3以及A549，然后應(yīng)用Western blot檢測Bcl-2家族蛋白的表達，通過免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）檢測Beclin1-Bcl2/Bcl-xl復(fù)合體的變化；以及抑制JNK和NF-kB通路對上述蛋白變化的影響，明確TRAIL誘導(dǎo)自噬的可能機制。應(yīng)用JNK抑制劑SP、自噬抑制劑WTM抑制JNK及自噬信號通路，然后應(yīng)用Western blot檢測對抗凋亡蛋白家族表達的影響；然后再應(yīng)用自噬抑制劑CQ、CathepsinB、溶酶體抑制劑MG-132、凋亡抑制劑z-VAD以及JNK抑制劑SP，觀察其對TRAIL誘導(dǎo)的抗凋亡蛋白家族降解的影響，探明自噬對抗凋亡蛋白降解的影響。最后沉默RIP1以及TRAF2，觀察其對自噬水平的影響以及對TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的影響，應(yīng)用LDH檢測腫瘤細胞死亡以及應(yīng)用Western blot檢測自噬蛋白LC-3Ⅱ表達的變化，探明JNK激活介導(dǎo)的TRAIL誘導(dǎo)自噬的上游信號通路。 結(jié)果： TRAIL可以誘導(dǎo)膀胱腫瘤細胞UM-UC-3、肺癌細胞A549以及前列腺癌細胞PC-3自噬；主要表現(xiàn)為LC-3II表達增加、“自噬潮”的形成以及自噬體的顯著增加。TRAIL誘導(dǎo)的自噬對腫瘤細胞起保護作用，無論是應(yīng)用藥物抑制劑3MA、WTM或CQ還是沉默自噬關(guān)鍵基因ATG7或Beclin-1抑制自噬，均能顯著增強TRAIL的細胞毒性。自噬可以抑制TRAIL誘導(dǎo)的凋亡信號通路，，抑制自噬可增強TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡，以及死亡復(fù)合體的形成。抑制JNK可以抑制自噬，進而明顯增強TRAIL誘導(dǎo)的細胞毒性。TRAIL誘導(dǎo)的自噬主要通過Bcl-xl的降解以及Bcl-xl/Beclin1復(fù)合體的分離來實現(xiàn)的；而抑制JNK可以抑制Bcl-xl的降解并可以促進Bcl-xl/Beclin1復(fù)合體的重新結(jié)合。JNK介導(dǎo)的自噬參與了抗凋亡蛋白的降解，抑制JNK或抑制自噬均能顯著促進抗凋亡蛋白cIAP1、cIAP2、XIAP以及c-FLIP的降解。RIP1以及TRAF2調(diào)節(jié)JNK激活誘導(dǎo)自噬的產(chǎn)生。沉默RIP1以及TRAF2均能有效地抑制自噬，并能顯著增強TRAIL誘導(dǎo)的細胞死亡。 結(jié)論： TRAIL可以誘導(dǎo)多種腫瘤細胞產(chǎn)生保護性自噬；而RIP1和TRAF2介導(dǎo)的JNK激活是TRAIL誘導(dǎo)自噬的上游信號；Bcl-xl的降解以及Bcl-xl/Beclin1復(fù)合體的分離是TRAIL誘導(dǎo)自噬的主要機制。抑制JNK介導(dǎo)的自噬可能是提高腫瘤對TRAIL敏感性的一個新的切入點。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R73-36
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳艾;熊勵晶;馬驕;童煜;毛萌;;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子通過PI3K/Akt/mTOR信號途徑對胚鼠缺氧神經(jīng)元的保護作用[J];中國兒童保健雜志;2013年10期

2 陳松峰;邵增務(wù);;自噬相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進展[J];國際骨科學(xué)雜志;2013年04期

3 王棋文;胡飛飛;王濤;袁燕;顧建紅;劉學(xué)忠;卞建春;劉宗平;;鎘誘導(dǎo)PC12細胞自噬的形態(tài)學(xué)觀察[J];揚州大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2013年03期

4 肖凌;李蘭芳;陳臨溪;;自噬對血管功能的影響及與相關(guān)疾病的關(guān)聯(lián)研究進展[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2013年12期

5 李玲;徐小潔;葉棋濃;;細胞自噬與腫瘤[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年11期

6 GE Jiao;LIU Yan;LI Qiang;GUO Xia;GU Ling;MA Zhi Gui;ZHU Yi Ping;;Resveratrol Induces Apoptosis and Autophagy in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells by Inhibiting Akt/mTOR and Activating p38-MAPK[J];Biomedical and Environmental Sciences;2013年11期

7 喻琴琴;楊俊;李馨欣;;自噬及其抑制劑的研究進展[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2013年17期

8 張廣宇;王翠琴;彭越;彭濤;賈延劼;;自噬在大鼠骨髓間質(zhì)干細胞神經(jīng)分化過程中的作用[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2013年05期

9 李冬;劉秀華;史大卓;;細胞自噬與心血管疾病[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2013年05期

10 孟明;梁紅格;方皓;周蕾;馮建勇;董陽;閆振;陳冬志;;PI3K/Akt/mTOR通路與自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細胞增生中的意義[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2013年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 楊愛民;Neuronostatin對痛覺、胃腸運動和情緒的影響及脂基化蛋白LC3-Ⅱ的半合成[D];蘭州大學(xué);2013年

2 張開光;TRAIL對胃癌細胞株SGC7901/VCR耐藥基因表達的影響及TRAIL聯(lián)合順鉑殺傷SGC7901/VCR的研究[D];山東大學(xué);2013年

3 劉赟;調(diào)控鑷鈷基納米材料及納米基因載體的自噬效應(yīng)在腫瘤診療中的應(yīng)用[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

4 李娜;幽門螺桿菌CagA抑制胃上皮細胞自噬及其感染引起的miR-222/146a上調(diào)在胃相關(guān)疾病發(fā)生中的作用機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 楊立靖;抗多發(fā)性骨髓瘤細胞的兩種新型單體天然藥物的分子靶點研究[D];華中科技大學(xué);2013年

6 王亮;活細胞中內(nèi)吞囊泡和自吞噬囊泡的熒光成像研究[D];華中科技大學(xué);2013年

7 華雯;雷帕霉素與細胞自噬在哮喘氣道炎癥和嗜酸粒細胞分化中的作用研究[D];浙江大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李夢姣;藍萼甲素對人肺癌A549細胞的抑制作用及其機制[D];蘇州大學(xué);2013年

2 田一虹;亞精胺誘導(dǎo)Hela細胞自噬與降低細胞活力關(guān)系的研究[D];蘭州大學(xué);2013年

3 秦真真;自噬相關(guān)基因多態(tài)性與江蘇漢族人群女性乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

4 王貝貝;傷寒沙門菌質(zhì)粒對巨噬細胞THP-1自噬、凋亡和炎癥反應(yīng)的影響[D];蘇州大學(xué);2013年

5 范俊;血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細胞自噬的影響及其機制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 郭樹平;白藜蘆醇對前列腺癌PC-3細胞自噬影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

7 王凱;冠狀病毒木瓜樣蛋白酶誘導(dǎo)自噬生物學(xué)效應(yīng)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 敬開權(quán);慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激對大鼠海馬自噬作用和HMGB1/TLR4通路的影響[D];南華大學(xué);2013年

9 宋蕊;白藜蘆醇通過mTOR信號通路抑制脂多糖誘導(dǎo)的心肌細胞炎癥反應(yīng)的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 牛婷;自噬在阿霉素誘導(dǎo)小鼠心肌損傷中的作用機制[D];山東大學(xué);2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓麗輝,馬春紅,孫汶生;TRAIL在腫瘤治療中的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).腫瘤學(xué)分冊;2001年03期

2 劉征波;TRAIL系統(tǒng)與細胞凋亡[J];國外醫(yī)學(xué).生理.病理科學(xué)與臨床分冊;2003年02期

3 馬正宇;TNF家族新成員TRAIL及其受體與細胞凋亡[J];國外醫(yī)學(xué).分子生物學(xué)分冊;1999年03期

4 韓麗輝;TRAIL抗癌作用的分子機制[J];腫瘤學(xué)雜志;2002年02期

5 梁建華;TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡及藥物干預(yù)研究[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2003年04期

6 莊國洪;以TRAIL為靶點的腫瘤生物治療研究[J];中國腫瘤生物治療雜志;2003年02期

7 楊芳,劉紅巖,徐維明,肖紅劍,龍海亭,李珺,劉云麗;sTRAIL基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達[J];藥物生物技術(shù);2003年03期

8 韓衛(wèi)寧,曹云新,張赟,李琦,劉雪松,金伯泉;不同活化系統(tǒng)對CD4~+T細胞凋亡誘導(dǎo)配體表達的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年04期

9 梁艷;楊再興;仲人前;;TRAIL與自身免疫性疾病[J];現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

10 李寧,范學(xué)工;人Trail分子的克隆、表達及鑒定[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2004年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 李康生;代劍平;;病毒感染與細胞自噬[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2011年

3 王平;;骨骼肌自噬及運動對其影響機制研究進展[A];2011年中國生理學(xué)會運動生理學(xué)專業(yè)委員會會議暨“運動與骨骼肌”學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

4 胡占英;張靖溥;孟杰;佟軍威;秦偉;;斑馬魚自噬途徑與帕金森病的相關(guān)性[A];2011年中國藥學(xué)大會暨第11屆中國藥師周論文集[C];2011年

5 陳永;鄒珅珅;謝志平;梁永恒;;釀酒酵母中的小G蛋白Ypt51對細胞自噬的影響[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學(xué)學(xué)會全體會員代表大會暨第十二次學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

6 熊海蓉;陳文;馮勇;羅凡;楊占秋;侯煒;;漢坦病毒感染宿主細胞后TRAIL受體的動態(tài)變化[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2011年

7 陳加祥;伍一軍;;溶血磷脂酰膽堿促進人成神經(jīng)瘤SH-SY5Y細胞自噬[A];全國生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

8 ;自噬改變在錳誘導(dǎo)的PC12細胞毒性中的作用[A];中國毒理學(xué)會第三屆中青年學(xué)者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學(xué)研討會論文集[C];2011年

9 高俊玲;洪銘巖;王煥;李冉;田艷霞;都靈杰;崔建忠;;大鼠彌漫性腦創(chuàng)傷后腦皮質(zhì)神經(jīng)元自噬的變化[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

10 鄒珅珅;陳永;劉玉濤;謝志平;梁永恒;;釀酒酵母中的Trs130參與細胞自噬的研究[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學(xué)學(xué)會全體會員代表大會暨第十二次學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 見習(xí)記者　王法爭;[N];21世紀(jì)經(jīng)濟報道;2003年

2 張明永;[N];廣東科技報;2011年

3 記者白毅;[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 ;[N];中國交通報;2004年

5 本報記者 嚴(yán)威川;[N];中國電腦教育報;2010年

6 主持人 本報記者 劉元煌;[N];中國經(jīng)營報;2001年

7 記者 胡德榮;[N];健康報;2008年

8 本報記者 嚴(yán)威川;[N];中國電腦教育報;2009年

9 本報記者 秦淑文;[N];中國汽車報;2003年

10 國際金融報記者 宮廣軍 發(fā)自上海;[N];國際金融報;2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何衛(wèi)陽;TRAF2和RIP1介導(dǎo)的JNK激活誘導(dǎo)的自噬存活通路降低TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

2 謝瑩;晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞中的自噬[D];蘇州大學(xué);2011年

3 齊世美;磷酸化熱休克蛋白27與腫瘤細胞TRAIL耐受的分子機制的研究[D];南京師范大學(xué);2012年

4 易聰;乙�；谧允蛇^程中的功能和分子機制的研究[D];清華大學(xué);2012年

5 曾蓉;饑餓誘導(dǎo)的自噬在多發(fā)性骨髓瘤細胞中的特點及冬凌草甲素作用的機制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

6 劉揚;CRAd.pEgrl-Trail聯(lián)合放療對人乳腺癌細胞殺傷效應(yīng)的實驗研究[D];吉林大學(xué);2012年

7 張俊;自噬在肺缺血再灌注損傷中的作用及其機制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

8 鄭芳;兩種小分子化合物調(diào)節(jié)自噬及其相關(guān)生物學(xué)功能的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2012年

9 高恒;分泌型TRAIL基因修飾人脂肪干細胞靶向腦膠質(zhì)瘤治療的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

10 林婷婷;TRAIL聯(lián)合谷胱甘肽過氧化物酶模擬物治療乳腺癌的實驗研究[D];吉林大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高顯峰;TRAIL聯(lián)合喜樹堿誘導(dǎo)胰腺癌細胞凋亡的研究[D];吉林大學(xué);2010年

2 韓麗;再生障礙性貧血患者TRAIL及其DR5的表達及其意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王詠蓮;TRAIL、XIAP及P53在卵巢上皮性腫瘤中的表達及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 閆增強;p38MAPK在TRAIL誘導(dǎo)的多發(fā)性骨髓瘤細胞凋亡中作用及與CXCR4關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 賀懷強;TRAIL聯(lián)合吉西他濱誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管細胞癌細胞凋亡的研究[D];吉林大學(xué);2011年

6 李廣章;PKC-δ在TRAIL與阿霉素聯(lián)合誘導(dǎo)骨肉瘤細胞株MG-63凋亡中的作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

7 劉利寧;急性腦梗死患者血清TRAIL、OPG測定及其臨床意義的研究[D];蘭州大學(xué);2011年

8 許驥;單鏈TRAIL重組表達及生物學(xué)活性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

9 陳洋;TRAIL聯(lián)合白藜蘆醇對人乳腺癌細胞MDA-MB-231凋亡的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

10 劉魏;HKa D5來源的多肽與TRAIL的融合表達及生物學(xué)活性的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：TRAF2和RIP1介導(dǎo)的JNK激活誘導(dǎo)的自噬存活通路降低TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：163133