白蘞抗腫瘤活性部位化學成分及其含量測定研究
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《湖北中醫(yī)藥大學》 2013年
白蘞抗腫瘤活性部位化學成分及其含量測定研究
杭佳
【摘要】:惡性腫瘤是目前危害人類健康和生命的最嚴重疾病之一。目前臨床用于治療腫瘤的藥物多為化學合成藥,其毒副作用強和產(chǎn)生耐藥性等問題嚴重影響臨床療效。因此,從中藥、天然藥物中發(fā)掘高效、低毒的新抗腫瘤藥物,成為藥物研究工作者關(guān)注的熱點。 中藥白蘞為葡萄科蛇葡萄屬植物白蘞(Ampelopsis japonic(Thumb.)Makino)的干燥塊根,其味苦、辛,微寒,具有清熱解毒、消癰散結(jié)、斂瘡生肌等功效,用于疔瘡,癰疽發(fā)背,瘰疬,燒燙傷等疾病的治療,F(xiàn)代藥理研究表明該藥具有抗菌、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤等作用,本實驗室前期研究已經(jīng)證實白蘞有較好的抗腫瘤作用。歷代本草記載白蘞無毒,本實驗室對白蘞不同組分的小鼠急性毒性實驗結(jié)果亦顯示其安全性高。因此,白蘞是一種值得關(guān)注的潛在低毒抗腫瘤中藥。本研究采用生物活性指導下的有效成分分離方法,研究了白蘞抗腫瘤活性部位的化學成分,并對藥材進行了質(zhì)量標準提高研究,為抗腫瘤中藥新藥開發(fā)及完善白蘞藥材質(zhì)量標準提供了科學依據(jù)。本文主要完成了以下工作: 1、采用MTT法,選擇前期研究篩選出的敏感細胞株人肝癌細胞株HepG2細胞,對白蘞醇提物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水溶液部位進行體外抗腫瘤活性篩選。實驗結(jié)果表明,白蘞乙醇提取物萃取部位中抑制腫瘤活性最強的為乙酸乙酯部位,石油醚及正丁醇部位也同樣具有一定的抗腫瘤作用。 2、采用硅膠柱層析,依次用四種不同極性的溶劑(石油醚、乙醚、乙酸乙酯、甲醇)作為洗脫劑對抗腫瘤活性部位進行粗分離,得到四個極性不同組分;钚院Y選結(jié)果顯示,乙醚和乙酸乙酯部分的抗腫瘤活性較其它兩個部分更好,其中,乙醚部分抗腫瘤活性最佳。 3、利用硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠(LH-20型)柱色譜、制備型HPLC等色譜分離技術(shù),以抗腫瘤活性篩選試驗結(jié)果為依據(jù),從乙醚和乙酸乙酯洗脫組分物質(zhì)中共分離出9種單體成分(化合物1-9)。通過1H-NMR、13C-NMR、H-HCOSY、C-H HMBC、MS等現(xiàn)代波譜方法分析其結(jié)構(gòu),鑒定了其中的6個化合物,,分別為:β-谷甾醇(化合物1,β-sitosterol)、齊墩果酸(化合物2,oleanolic acid)、沒食子酸(化合物3,gallic acid)、白藜蘆醇(化合物4,resveratrol)、兒茶素(化合物5,Cianidanol)、表兒茶素(化合物6,epicatechin)。 4、采用MTT法,對分離得到的兒茶素(化合物5)、表兒茶素(化合物6)、化合物7進行抗腫瘤活性篩選。結(jié)果顯示化合物7具有較好的抗腫瘤活性,在24、48、72h小時的IC50分別為46.98mg·L~(-1)、57.79mg·L~(-1)、24.87mg·L~(-1)。結(jié)合前期的研究結(jié)果,白蘞抗腫瘤的活性成分主要有沒食子酸、白藜蘆醇、齊墩果酸及化合物7。 5、建立了高效液相色譜波長切換法同時測定白蘞中沒食子酸、原兒茶醛、兒茶素、白藜蘆醇4種成分含量的方法。方法簡便快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好,可用于白蘞的質(zhì)量控制,為完善其質(zhì)量標準提供了科學依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】:
【學位授予單位】:湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R284.2
【目錄】:
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本文編號:155934
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