本文關(guān)鍵詞：基于納米金探針和蛋白芯片高靈敏檢測(cè)肺癌多腫瘤標(biāo)志物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《鄭州大學(xué)》 2013年

基于納米金探針和蛋白芯片高靈敏檢測(cè)肺癌多腫瘤標(biāo)志物的研究

王文濤  

【摘要】：肺癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率已躍居常見腫瘤之首,嚴(yán)重危害人類的身體健康。隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,肺癌的診斷和治療水平已得到顯著提高,但仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床和人類的需要。大量研究表明,肺癌的預(yù)后與臨床分期密切相關(guān),早期肺癌患者的5年生存率可達(dá)70%以上,降低肺癌病死率最有效的方法是對(duì)其及早診斷和治療。但肺癌早期多不易發(fā)現(xiàn),大部分肺癌在確診時(shí)已經(jīng)是中晚期。所以,及早發(fā)現(xiàn)、診斷和治療肺癌有著很大的臨床意義。目前在臨床上,肺癌早期檢查主要依靠影像學(xué),但假陽性率較高,且檢查費(fèi)用貴。因此,對(duì)肺部結(jié)節(jié)的良惡性鑒別是早期肺癌檢測(cè)中亟待解決的問題。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的不斷發(fā)展,腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在肺癌早期診斷及治療中的價(jià)值越來越受到重視。 多項(xiàng)研究表明,在腫瘤早期檢測(cè)和診斷、臨床分期、病理分型、療效評(píng)估、監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷等方面,腫瘤標(biāo)志物具有重要的意義。良好的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)該具有高敏感性、強(qiáng)特異性、檢測(cè)方便等特點(diǎn)。目前對(duì)肺癌來說,還沒有高敏感性、強(qiáng)特異性的標(biāo)志物,單一腫瘤標(biāo)志物往往檢測(cè)意義較小,難于全面評(píng)估�，F(xiàn)在臨床上多將多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合進(jìn)行檢測(cè),但多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)操作比較繁瑣,并且靈敏度不夠高,不能夠滿足大面積篩查實(shí)現(xiàn)肺癌的早期檢測(cè)。由于生物芯片技術(shù)和納米技術(shù)的日益發(fā)展,快速的高靈敏度的多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)得以實(shí)現(xiàn)。 目的： 建立以蛋白芯片和納米金探針為基礎(chǔ)的高靈敏度多腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)體系,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)肺癌早期診斷。 方法： 1.首先對(duì)納米金進(jìn)行標(biāo)記和表征,然后進(jìn)行納米金探針的制備和蛋白芯片的制作,從而建立基本的檢測(cè)體系。 2.通過梯度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)對(duì)納米金的最佳蛋白穩(wěn)定量和納米金探針添加量進(jìn)行優(yōu)化選擇,再進(jìn)行染色方法的篩選和優(yōu)化,并對(duì)待測(cè)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行特異性分析,最后對(duì)溫度、時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件方面進(jìn)行優(yōu)化,從而優(yōu)化檢測(cè)體系。 3.利用本檢測(cè)體系檢測(cè)86例肺癌病人和42例健康體檢者,對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,繪制四種腫瘤標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并與臨床所用的電化學(xué)分析法及DKK1試劑盒檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較,分析檢測(cè)結(jié)果和臨床資料參數(shù)間的關(guān)系。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用非參數(shù)檢驗(yàn)、X2檢驗(yàn)及相關(guān)性分析。取檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。 結(jié)果： 1.最佳蛋白穩(wěn)定量在200μL納米金溶液中CEA為2.0μL(抗體濃度為5mg／mL)CYFRA21-1為5.0μL(抗體濃度為2mg／mL),NSE為14.0μL(抗體濃度為1.04mg／mL),DKK1為6.0μL(抗體濃度為2mg／mL)。 2.納米金在標(biāo)記檢測(cè)抗體后發(fā)生了紅移,最大吸收峰由520nm增大到530nm。 3.納米金探針的最佳加入濃度為CEA1.0nM,CYFRA21-1為1.4nM,NSE為1.8nM,DKK1為2.0nM。 4.本研究最終選定H202法納米金沉積進(jìn)行染色,并確定氯金酸的最佳濃度為20mM,H202的最佳濃度為3.0M。 5.四種腫瘤標(biāo)志物在蛋白芯片上無交叉反應(yīng)和相互干擾,特異性良好。 6.四種腫瘤標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)曲線：在繪制的四種蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線中均有線性關(guān)系比較良好的階段,具體線性分布為CEA(40pg/mL～25ng/mL, R2=0.99)、 CYFRA21-1(70pg/mL-25ng/L,R2=0.994).NSE(90pg/mL～25ng/mL,R2=0.994)、 DKK1(90pg/mL～25ng／mL,R2=0.996)。檢測(cè)限方法確定了CEA蛋白的靈敏度為10pg/mL,CYFRA21-1為15pg/mL,NSE的靈敏度為20pg/mL,DKK1為30pg/mL。 7.檢測(cè)結(jié)果與臨床所用的電化學(xué)發(fā)光法檢及DKK1試劑盒測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析,顯示兩種方法檢測(cè)結(jié)果整體一致(相關(guān)系數(shù)分別為CEA:r=0.986；CYFRA21-1:r=0.985；NSE:r=0.978；DKK1:r=0.993)。四種腫瘤標(biāo)志物值在肺癌組和健康體檢組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),且在肺癌組中的濃度明顯高于健康體檢組。在健康對(duì)照組中,四種腫瘤標(biāo)志物濃度在不同性別組和不同年齡組(≤60歲和60歲)間差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。在肺癌組,四種腫瘤標(biāo)志物的值在不同年齡、性別、是否吸煙間差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。CEA、CYFRA21-1、NSE在不同病理分型中差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),而DKK1在不同病理分型中差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.294)。并且,CEA在腺癌中的濃度最高(P0.001),CYFRA21-1在鱗癌中的濃度最高(P=0.004),NSE在小細(xì)胞癌中的濃度最高(P=0.002)。四種腫瘤標(biāo)志物在不同臨床分期中差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),并且Ⅳ期的濃度明顯高于其他3個(gè)分期(均P0.05)。取42例健康體檢者四種腫瘤標(biāo)志物值的95%為各指標(biāo)的臨界值(4.82ng/mL toCEA,3.04ng/mL to CYFRA211,23.7ng／mL to NSE,14.15ng／mL to DKK1),月市癌組敏感性CEA為38.37%,CYFRA21-1為51.16%,NSE為26.74%,DKK1為52.33%,四者聯(lián)合檢測(cè)為88.37%,比任何單一檢測(cè)都大大提高(均P0.001)。并且,CEA在腺癌中的敏感性最高為54.35%,CYFRA21-1在鱗癌中的敏感性最高為54.84%,NSE在小細(xì)胞肺癌中的敏感性最高為66.67%。 結(jié)論： 本研究以蛋白芯片和納米金探針為基礎(chǔ),通過納米金沉積進(jìn)行信號(hào)放大,構(gòu)建了一種超微量蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法,能夠半定量的對(duì)蛋白進(jìn)行可視化檢測(cè),已能夠高靈敏對(duì)CEA、CYFRA21-1、NSE和DKK1四種腫瘤標(biāo)志物在1.5h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),實(shí)現(xiàn)多種腫瘤標(biāo)志物同時(shí)快速檢測(cè),達(dá)到肺癌早期診斷和評(píng)估的目標(biāo)。并且,由于通過肉眼或普通的顯微鏡即可對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,使用儀器非常簡(jiǎn)單,大大降低了檢測(cè)成本,具有廣泛的應(yīng)用前景。同時(shí),為臨床腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)和肺癌早期診斷提供了理論和試驗(yàn)基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

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9 王耀勇;;新的腫瘤標(biāo)志物與肺癌診斷[A];2006年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)、2006年浙江省老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

10 侯淑玲;張琦;張巧花;王軍;賀建霞;郭素堂;;彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者11100～11900Da蛋白質(zhì)譜與腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的初步研究[A];第一屆全國難治性淋巴瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第二屆全國多發(fā)性骨髓瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)（國家級(jí)血液系統(tǒng)惡性腫瘤繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)習(xí)班）繼續(xù)教育集[C];2007年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院老年外科 劉佳;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

2 劉森;[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

3 天津市腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科 陳瑛　任麗 整理 李運(yùn)紅 趙迎;[N];健康報(bào);2010年

4 趙明;[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

5 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院 王昌萍;[N];湖北科技報(bào);2004年

6 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院博士 文宇;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

7 齊軍;[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

8 胡德榮;[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

9 王昌萍;[N];健康報(bào);2003年

10 記者 吳長鋒;[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李歡;多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷新技術(shù)的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 趙玲娣;晚期非小細(xì)胞肺癌患者中一線三代新藥聯(lián)合鉑雙藥方案的療效分析及腫瘤標(biāo)志物在一線化療療效中的預(yù)測(cè)作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 王紀(jì)文;肺癌相關(guān)血清腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 姚洪文;新的卵巢上皮性癌蛋白標(biāo)志物的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

5 方芳;GPC3在肝癌中的臨床應(yīng)用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 李樸;血清YB-1蛋白定量檢測(cè)方法的建立及其作為腫瘤標(biāo)志物的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

7 吳廣平;胸水腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)及LCT痰檢在肺癌診斷中的意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

8 唐點(diǎn)平;納米微粒固載蛋白質(zhì)腫瘤標(biāo)志物電化學(xué)免疫傳感器研究及其應(yīng)用[D];西南大學(xué);2008年

9 黃曉輝;血清MUC1、MUC2及MUC5AC水平檢測(cè)在胃腸道腫瘤診斷中的臨床應(yīng)用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

10 周儒;老年胃癌患者手術(shù)治療風(fēng)險(xiǎn)與療效評(píng)價(jià)及巨噬細(xì)胞相關(guān)集落刺激因子作為新型腫瘤標(biāo)志物的探索[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙桂梅;胃癌及肝癌病人外周血人斯鈣素-1mRNA表達(dá)的初步研究[D];鄭州大學(xué);2005年

2 徐曉卿;胃腸道腫瘤標(biāo)志物與中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2006年

3 陳莉;多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用[D];中南大學(xué);2006年

4 劉興君;上消化道惡性腫瘤患者血清多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

5 李福明;腫瘤標(biāo)志物在晚期NSCLC診治中的臨床意義和價(jià)值[D];浙江大學(xué);2007年

6 稅莉莉;肺癌患者血清胸苷磷酸化酶檢測(cè)及其臨床意義[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

7 李會(huì)欣;結(jié)直腸癌相關(guān)蛋白和基因的臨床應(yīng)用和研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

8 成淑蓮;介入治療對(duì)肺癌患者NSE、VEGF、CYFRA21-1、SCC、CEA的影響[D];青島大學(xué);2008年

9 張自森;食管鱗癌血清SELDI蛋白質(zhì)組表達(dá)譜的研究[D];鄭州大學(xué);2005年

10 金安琴;經(jīng)內(nèi)鏡膽管刷檢、活檢及CEA、CA242對(duì)膽管癌的診斷價(jià)值[D];蘭州大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：基于納米金探針和蛋白芯片高靈敏檢測(cè)肺癌多腫瘤標(biāo)志物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：151467