本文關(guān)鍵詞：抗氧化蛋白Prdx6在食管癌中的表達(dá)及生物學(xué)功能研究　出處：《蘇州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:Perociredoxin6(Prdx6)是體內(nèi)重要的抗氧化蛋白酶,其在食管癌中的表達(dá)情況未見報(bào)道。本研究旨在探討抗氧化蛋白Prdx6在人食管癌組織中的表達(dá);構(gòu)建上調(diào)和下調(diào)Prdx6表達(dá)的病毒并感染人食管癌細(xì)胞;探究Prdx6及聯(lián)合X射線對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及機(jī)制;在裸鼠體內(nèi)驗(yàn)證Prdx6對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。方法:免疫組化檢測(cè)Prdx6正常食管上皮組織、癌旁組織及食管癌組織中的表達(dá),并通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究Prdx6對(duì)食管癌生物學(xué)功能的影響。體外實(shí)驗(yàn):(1)構(gòu)建下調(diào)和過(guò)表達(dá)Prdx6的病毒并感染Eca-109和TE-1細(xì)胞,用Western blot法驗(yàn)證表達(dá)效果;(2)通過(guò)DCFH-DA染色檢測(cè)Prdx6及聯(lián)合X射線作用后Eca-109細(xì)胞內(nèi)ROS水平;(3)利用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定Prdx6及聯(lián)合X射線作用后Eca-109細(xì)胞凋亡率的變化;(4)MTT實(shí)驗(yàn)、EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Prdx6對(duì)Eca-109和TE-1細(xì)胞增殖能力的改變,Western blot方法檢測(cè)Prdx6與p-Erk1/2表達(dá)的相關(guān)性;(5)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Prdx6對(duì)Eca-109細(xì)胞侵襲遷移能力的影響,并用Western blot方法檢測(cè)了p-Akt、p-Erk1/2、MMP9及MMP2蛋白的表達(dá)情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):裸鼠皮下建立人食管癌移植瘤模型,按實(shí)驗(yàn)要求分組,測(cè)量腫瘤體積并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線,計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率及增殖率;Western blot方法及免疫組化驗(yàn)證移植瘤組織中Prdx6的表達(dá)并檢測(cè)增殖指標(biāo)Ki67表達(dá)水平的變化。結(jié)果:Prdx6在食管癌組織中的表達(dá)明顯高于正常食管上皮組織和癌旁組織,Prdx6與Ki67、PCNA、CyclinD1的表達(dá)具有一致性,與Ki67的表達(dá)具有相關(guān)性。體外實(shí)驗(yàn):(1)成功構(gòu)建下調(diào)Prdx6的慢病毒和過(guò)表達(dá)Prdx6的腺病毒并感染食管癌細(xì)胞,通過(guò)Western blot法驗(yàn)證表達(dá)效果,蛋白抑制率80%,過(guò)表達(dá)效率50%,篩選Prdx6-sh2、Prdx6-sh3慢病毒及Prdx6過(guò)表達(dá)腺病毒(Ad-Prdx6)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。(2)DCFH-DA染色表明,下調(diào)Prdx6能夠降低Eca-109細(xì)胞的ROS清除能力,過(guò)表達(dá)Prdx6可以增加Eca-109細(xì)胞對(duì)ROS的清除能力;聯(lián)合X射線作用后,Prdx6對(duì)ROS的清除能力增加。(3)下調(diào)Prdx6明顯增加細(xì)胞的凋亡率,過(guò)表達(dá)Prdx6明顯降低細(xì)胞的凋亡率;聯(lián)合X射線作用后,下調(diào)Prdx6能夠促進(jìn)輻射誘導(dǎo)的凋亡,但過(guò)表達(dá)Prdx6對(duì)輻射誘導(dǎo)的凋亡無(wú)顯著影響。(4)下調(diào)Prdx6明顯抑制細(xì)胞的增殖,過(guò)表達(dá)Prdx6促進(jìn)細(xì)胞的增殖;Western blot結(jié)果顯示Prdx6與p-Erk1/2之間存在相互作用。(5)下調(diào)Prdx6顯著降低Eca-109細(xì)胞的侵襲及遷移能力,過(guò)表達(dá)Prdx6顯著增加Eca-109細(xì)胞的侵襲及遷移能力;P-Akt、p-Erk1/2及MMP2的表達(dá)與Prdx6表達(dá)變化一致,表明p-Akt和p-Erk1/2調(diào)控下游效應(yīng)分子MMP2的表達(dá),可能與Prdx6對(duì)Eca-109細(xì)胞的侵襲和遷移能力的影響有關(guān)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:成功構(gòu)建Eca-109細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中裸鼠體重?zé)o明顯變化;下調(diào)Prdx6明顯抑制移植瘤的生長(zhǎng),過(guò)表達(dá)Prdx6明顯促進(jìn)移植瘤的生長(zhǎng)。結(jié)論:Prdx6及增殖相關(guān)蛋白在食管癌組織中高表達(dá),Prdx6與Ki67的表達(dá)具有一致性及相關(guān)性;Prdx6能夠明顯對(duì)食管癌細(xì)胞的ROS清除能力、凋亡率、細(xì)胞增殖及細(xì)胞侵襲遷移能力等多種生物學(xué)功能產(chǎn)生影響。聯(lián)合X射線作后,下調(diào)Prdx6會(huì)降低細(xì)胞的ROS清除能力,增加輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率;在動(dòng)物體內(nèi)驗(yàn)證了Prdx6對(duì)裸鼠移植瘤增殖能力的影響。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：1316177