本文關(guān)鍵詞：抗氧化蛋白Prdx6在食管癌中的表達及生物學(xué)功能研究　出處：《蘇州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:Perociredoxin6(Prdx6)是體內(nèi)重要的抗氧化蛋白酶,其在食管癌中的表達情況未見報道。本研究旨在探討抗氧化蛋白Prdx6在人食管癌組織中的表達;構(gòu)建上調(diào)和下調(diào)Prdx6表達的病毒并感染人食管癌細胞;探究Prdx6及聯(lián)合X射線對食管癌細胞生物學(xué)功能的影響及機制;在裸鼠體內(nèi)驗證Prdx6對腫瘤生長的影響。方法:免疫組化檢測Prdx6正常食管上皮組織、癌旁組織及食管癌組織中的表達,并通過體內(nèi)、體外實驗研究Prdx6對食管癌生物學(xué)功能的影響。體外實驗:(1)構(gòu)建下調(diào)和過表達Prdx6的病毒并感染Eca-109和TE-1細胞,用Western blot法驗證表達效果;(2)通過DCFH-DA染色檢測Prdx6及聯(lián)合X射線作用后Eca-109細胞內(nèi)ROS水平;(3)利用流式細胞計數(shù)法測定Prdx6及聯(lián)合X射線作用后Eca-109細胞凋亡率的變化;(4)MTT實驗、EdU細胞增殖檢測實驗及克隆形成實驗檢測Prdx6對Eca-109和TE-1細胞增殖能力的改變,Western blot方法檢測Prdx6與p-Erk1/2表達的相關(guān)性;(5)細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測Prdx6對Eca-109細胞侵襲遷移能力的影響,并用Western blot方法檢測了p-Akt、p-Erk1/2、MMP9及MMP2蛋白的表達情況。體內(nèi)實驗:裸鼠皮下建立人食管癌移植瘤模型,按實驗要求分組,測量腫瘤體積并繪制腫瘤生長曲線,計算腫瘤生長抑制率及增殖率;Western blot方法及免疫組化驗證移植瘤組織中Prdx6的表達并檢測增殖指標Ki67表達水平的變化。結(jié)果:Prdx6在食管癌組織中的表達明顯高于正常食管上皮組織和癌旁組織,Prdx6與Ki67、PCNA、CyclinD1的表達具有一致性,與Ki67的表達具有相關(guān)性。體外實驗:(1)成功構(gòu)建下調(diào)Prdx6的慢病毒和過表達Prdx6的腺病毒并感染食管癌細胞,通過Western blot法驗證表達效果,蛋白抑制率80%,過表達效率50%,篩選Prdx6-sh2、Prdx6-sh3慢病毒及Prdx6過表達腺病毒(Ad-Prdx6)用于后續(xù)實驗。(2)DCFH-DA染色表明,下調(diào)Prdx6能夠降低Eca-109細胞的ROS清除能力,過表達Prdx6可以增加Eca-109細胞對ROS的清除能力;聯(lián)合X射線作用后,Prdx6對ROS的清除能力增加。(3)下調(diào)Prdx6明顯增加細胞的凋亡率,過表達Prdx6明顯降低細胞的凋亡率;聯(lián)合X射線作用后,下調(diào)Prdx6能夠促進輻射誘導(dǎo)的凋亡,但過表達Prdx6對輻射誘導(dǎo)的凋亡無顯著影響。(4)下調(diào)Prdx6明顯抑制細胞的增殖,過表達Prdx6促進細胞的增殖;Western blot結(jié)果顯示Prdx6與p-Erk1/2之間存在相互作用。(5)下調(diào)Prdx6顯著降低Eca-109細胞的侵襲及遷移能力,過表達Prdx6顯著增加Eca-109細胞的侵襲及遷移能力;P-Akt、p-Erk1/2及MMP2的表達與Prdx6表達變化一致,表明p-Akt和p-Erk1/2調(diào)控下游效應(yīng)分子MMP2的表達,可能與Prdx6對Eca-109細胞的侵襲和遷移能力的影響有關(guān)。體內(nèi)實驗結(jié)果:成功構(gòu)建Eca-109細胞的裸鼠移植瘤模型,實驗過程中裸鼠體重?zé)o明顯變化;下調(diào)Prdx6明顯抑制移植瘤的生長,過表達Prdx6明顯促進移植瘤的生長。結(jié)論:Prdx6及增殖相關(guān)蛋白在食管癌組織中高表達,Prdx6與Ki67的表達具有一致性及相關(guān)性;Prdx6能夠明顯對食管癌細胞的ROS清除能力、凋亡率、細胞增殖及細胞侵襲遷移能力等多種生物學(xué)功能產(chǎn)生影響。聯(lián)合X射線作后,下調(diào)Prdx6會降低細胞的ROS清除能力,增加輻射誘導(dǎo)的細胞凋亡率;在動物體內(nèi)驗證了Prdx6對裸鼠移植瘤增殖能力的影響。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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