本文關(guān)鍵詞：miR-21在胰腺癌中的生物學(xué)功能及腫瘤血管生成的研究

  更多相關(guān)文章： 微小RNA miR-21 HGF/c-MET 胰腺癌 惡性表型 腫瘤血管生成

【摘要】：目的胰腺癌的早期發(fā)現(xiàn)極其困難,其惡性度極高、醫(yī)治成效及預(yù)后也極差。miR-21是微小RNA中的重要成員之一,其發(fā)揮生物學(xué)作用是通過調(diào)節(jié)多種基因的表達來實現(xiàn)的;miR-21在胰腺癌的組織標(biāo)本中亦具有相對較高的表達水平,但其如何調(diào)節(jié)和控制腫瘤的產(chǎn)生發(fā)展,以及具體的分子機制還沒有完整的闡釋清楚。本課題著重研究miR-21對胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及通過HGF/c-MET信號通路調(diào)節(jié)胰腺癌腫瘤血管生成的有關(guān)分子機制,為胰腺癌治療提供新的理論依據(jù)。方法首先培養(yǎng)所選取的胰腺癌細(xì)胞系PANC-1、MiaPaca-2、CFPAC-1、BxPc-3,轉(zhuǎn)染miR-21mimic,MTT方法檢測胰腺癌細(xì)胞的活性;用生長曲線及平板克隆實驗、細(xì)胞劃痕實驗,Transwell等檢測手段,評估分析mi R-21對胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生的影響;選用PCR技術(shù)測定胰腺癌細(xì)胞系中miR-21的相對表達水平;隨后分別用miR-21抑制劑(AC1MMYR2)和miR-21擬似物(miR-21 mimic)處理細(xì)胞,應(yīng)用PCR技術(shù)檢測各組的miR-21、VHL、cMET的相對表達水平;應(yīng)用Western印跡檢測miR-21表達發(fā)生改變后一些相關(guān)分子的變化及對相關(guān)信號通路下游蛋白所產(chǎn)生的影響;ELISA檢測HGF的生成情況,并通過血管生成實驗,進一步分析miR-21表達水平改變后對胰腺癌血管生成可能產(chǎn)生的影響。結(jié)果mi R-21的表達水平在胰腺癌細(xì)胞系中是相對高表達的;結(jié)果顯示,PANC-1細(xì)胞中miR-21的表達水平約為MiaPaca-2的4倍;CFPAC-1細(xì)胞中miR-21的表達水平相對最高,約為MiaPaca-2的5~6倍;BxPc-3細(xì)胞約為1.2倍;轉(zhuǎn)染miR-21mimic后,MiaPaca-2細(xì)胞miR-21的表達水平升高最明顯,升高水平約在25~28倍。將胰腺癌細(xì)胞MiaPaca-2中的miR-21表達水平升高后,發(fā)現(xiàn)胰腺癌細(xì)胞具有更強的生長和增殖能力,其相應(yīng)的侵襲和遷移能力亦得到了加強。PCR證實,用miR-21抑制劑(AC1MMYR2)作用于CFPAC-1細(xì)胞,可使mi R-21的表達水平降低,VHL表達水平相對升高,c-MET表達水平相對降低;miR-21擬似物(miR-21 mimic)作用于MiaPaca-2細(xì)胞,mi R-21表達水平升高,VHL表達水平下降,c-MET表達水平未見明顯升高。Western印跡發(fā)現(xiàn)降低mi R-21的表達能夠使VHL表達相對升高,同時下調(diào)HGF、c-MET、AKT等相關(guān)蛋白的表達;升高mi R-21的表達水平,可抑制VHL的表達,上調(diào)HGF、c-MET、AKT等相關(guān)蛋白的表達;運用ELISA檢測手段發(fā)現(xiàn),表達升高的miR-21可使細(xì)胞培養(yǎng)液中HGF的濃度有所升高;血管生成實驗發(fā)現(xiàn),降低miR-21的表達視野中所形成的血管數(shù)目低于對照組;升高miR-21的表達,視野中所形成的血管數(shù)目高于對照組。結(jié)論胰腺癌細(xì)胞系中的miR-21具有促癌作用,可提升胰腺癌細(xì)胞的活性,使其具有更強的生長和增殖能力,并同時加強侵襲和遷移的能力;在胰腺癌細(xì)胞中,mi R-21可能通過HGF/c-MET信號通路發(fā)揮促進胰腺癌血管生成的作用。本研究初步探討了miR-21對胰腺癌惡性表型的影響及在胰腺癌血管生成中的作用,為胰腺癌的治療提供一種新的思路。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA miR-21 HGF/c-MET 胰腺癌 惡性表型 腫瘤血管生成
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-17
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、miR-21在胰腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能研究17-33
• 1.1 材料和方法17-23
• 1.1.1 實驗材料17-19
• 1.1.2 實驗方法19-23
• 1.2 結(jié)果23-30
• 1.2.1 胰腺癌細(xì)胞系傳代培養(yǎng)成功23-24
• 1.2.2 細(xì)胞總RNA的抽提結(jié)果24
• 1.2.3 未作處理的胰腺癌細(xì)胞系miR-21相對表達水平24-25
• 1.2.4 miR-21mimic轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞后miR-21的相對表達水平25-26
• 1.2.5 升高miR-21表達可以提高MiaPaca-2 細(xì)胞的活性26
• 1.2.6 升高miR-21表達促進MiaPaca-2 細(xì)胞的生長及增殖能力26-27
• 1.2.7 miR-21表達水平升高后，，增強MiaPaca-2 的遷移侵襲力27-30
• 1.3 討論30-32
• 1.4 小結(jié)32-33
• 二、miR-21對胰腺癌腫瘤血管生成的研究33-48
• 2.1 材料與方法33-40
• 2.1.1 實驗材料33-34
• 2.1.2 實驗方法34-40
• 2.2 結(jié)果40-45
• 2.2.1 miR-21抑制劑（AC1MMYR2）作用于胰腺癌細(xì)胞的結(jié)果40-41
• 2.2.2 miR-21 mimic作用于胰腺癌細(xì)胞的結(jié)果41-42
• 2.2.3 miR-21的表達水平對細(xì)胞培養(yǎng)液中HGF含量的影響42-43
• 2.2.4 血管形成實驗結(jié)果43-45
• 2.3 討論45-47
• 2.4 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 綜述 microRNAs在胰腺癌中的重要作用54-70
• 綜述參考文獻62-70
• 致謝70

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6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o

本文編號：1124949