發(fā)布時(shí)間：2017-11-01 03:07

  本文關(guān)鍵詞：miR-21在胰腺癌中的生物學(xué)功能及腫瘤血管生成的研究

  更多相關(guān)文章： 微小RNA miR-21 HGF/c-MET 胰腺癌 惡性表型 腫瘤血管生成

【摘要】：目的胰腺癌的早期發(fā)現(xiàn)極其困難,其惡性度極高、醫(yī)治成效及預(yù)后也極差。miR-21是微小RNA中的重要成員之一,其發(fā)揮生物學(xué)作用是通過(guò)調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的;miR-21在胰腺癌的組織標(biāo)本中亦具有相對(duì)較高的表達(dá)水平,但其如何調(diào)節(jié)和控制腫瘤的產(chǎn)生發(fā)展,以及具體的分子機(jī)制還沒(méi)有完整的闡釋清楚。本課題著重研究miR-21對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及通過(guò)HGF/c-MET信號(hào)通路調(diào)節(jié)胰腺癌腫瘤血管生成的有關(guān)分子機(jī)制,為胰腺癌治療提供新的理論依據(jù)。方法首先培養(yǎng)所選取的胰腺癌細(xì)胞系PANC-1、MiaPaca-2、CFPAC-1、BxPc-3,轉(zhuǎn)染miR-21mimic,MTT方法檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞的活性;用生長(zhǎng)曲線及平板克隆實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),Transwell等檢測(cè)手段,評(píng)估分析mi R-21對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生的影響;選用PCR技術(shù)測(cè)定胰腺癌細(xì)胞系中miR-21的相對(duì)表達(dá)水平;隨后分別用miR-21抑制劑(AC1MMYR2)和miR-21擬似物(miR-21 mimic)處理細(xì)胞,應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)各組的miR-21、VHL、cMET的相對(duì)表達(dá)水平;應(yīng)用Western印跡檢測(cè)miR-21表達(dá)發(fā)生改變后一些相關(guān)分子的變化及對(duì)相關(guān)信號(hào)通路下游蛋白所產(chǎn)生的影響;ELISA檢測(cè)HGF的生成情況,并通過(guò)血管生成實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步分析miR-21表達(dá)水平改變后對(duì)胰腺癌血管生成可能產(chǎn)生的影響。結(jié)果mi R-21的表達(dá)水平在胰腺癌細(xì)胞系中是相對(duì)高表達(dá)的;結(jié)果顯示,PANC-1細(xì)胞中miR-21的表達(dá)水平約為MiaPaca-2的4倍;CFPAC-1細(xì)胞中miR-21的表達(dá)水平相對(duì)最高,約為MiaPaca-2的5~6倍;BxPc-3細(xì)胞約為1.2倍;轉(zhuǎn)染miR-21mimic后,MiaPaca-2細(xì)胞miR-21的表達(dá)水平升高最明顯,升高水平約在25~28倍。將胰腺癌細(xì)胞MiaPaca-2中的miR-21表達(dá)水平升高后,發(fā)現(xiàn)胰腺癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的生長(zhǎng)和增殖能力,其相應(yīng)的侵襲和遷移能力亦得到了加強(qiáng)。PCR證實(shí),用miR-21抑制劑(AC1MMYR2)作用于CFPAC-1細(xì)胞,可使mi R-21的表達(dá)水平降低,VHL表達(dá)水平相對(duì)升高,c-MET表達(dá)水平相對(duì)降低;miR-21擬似物(miR-21 mimic)作用于MiaPaca-2細(xì)胞,mi R-21表達(dá)水平升高,VHL表達(dá)水平下降,c-MET表達(dá)水平未見(jiàn)明顯升高。Western印跡發(fā)現(xiàn)降低mi R-21的表達(dá)能夠使VHL表達(dá)相對(duì)升高,同時(shí)下調(diào)HGF、c-MET、AKT等相關(guān)蛋白的表達(dá);升高mi R-21的表達(dá)水平,可抑制VHL的表達(dá),上調(diào)HGF、c-MET、AKT等相關(guān)蛋白的表達(dá);運(yùn)用ELISA檢測(cè)手段發(fā)現(xiàn),表達(dá)升高的miR-21可使細(xì)胞培養(yǎng)液中HGF的濃度有所升高;血管生成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),降低miR-21的表達(dá)視野中所形成的血管數(shù)目低于對(duì)照組;升高miR-21的表達(dá),視野中所形成的血管數(shù)目高于對(duì)照組。結(jié)論胰腺癌細(xì)胞系中的miR-21具有促癌作用,可提升胰腺癌細(xì)胞的活性,使其具有更強(qiáng)的生長(zhǎng)和增殖能力,并同時(shí)加強(qiáng)侵襲和遷移的能力;在胰腺癌細(xì)胞中,mi R-21可能通過(guò)HGF/c-MET信號(hào)通路發(fā)揮促進(jìn)胰腺癌血管生成的作用。本研究初步探討了miR-21對(duì)胰腺癌惡性表型的影響及在胰腺癌血管生成中的作用,為胰腺癌的治療提供一種新的思路。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA miR-21 HGF/c-MET 胰腺癌 惡性表型 腫瘤血管生成
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-17
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、miR-21在胰腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能研究17-33
• 1.1 材料和方法17-23
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 1.2 結(jié)果23-30
• 1.2.1 胰腺癌細(xì)胞系傳代培養(yǎng)成功23-24
• 1.2.2 細(xì)胞總RNA的抽提結(jié)果24
• 1.2.3 未作處理的胰腺癌細(xì)胞系miR-21相對(duì)表達(dá)水平24-25
• 1.2.4 miR-21mimic轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞后miR-21的相對(duì)表達(dá)水平25-26
• 1.2.5 升高miR-21表達(dá)可以提高M(jìn)iaPaca-2 細(xì)胞的活性26
• 1.2.6 升高miR-21表達(dá)促進(jìn)MiaPaca-2 細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖能力26-27
• 1.2.7 miR-21表達(dá)水平升高后，，增強(qiáng)MiaPaca-2 的遷移侵襲力27-30
• 1.3 討論30-32
• 1.4 小結(jié)32-33
• 二、miR-21對(duì)胰腺癌腫瘤血管生成的研究33-48
• 2.1 材料與方法33-40
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法34-40
• 2.2 結(jié)果40-45
• 2.2.1 miR-21抑制劑（AC1MMYR2）作用于胰腺癌細(xì)胞的結(jié)果40-41
• 2.2.2 miR-21 mimic作用于胰腺癌細(xì)胞的結(jié)果41-42
• 2.2.3 miR-21的表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中HGF含量的影響42-43
• 2.2.4 血管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-45
• 2.3 討論45-47
• 2.4 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明53-54
• 綜述 microRNAs在胰腺癌中的重要作用54-70
• 綜述參考文獻(xiàn)62-70
• 致謝70

【相似文獻(xiàn)】

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6 馬黎明;;胰腺癌的影像學(xué)診斷及進(jìn)展[A];首屆全國(guó)分子核醫(yī)學(xué)暨分子影像學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)資料匯編[C];2006年

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10 孫誠(chéng)誼;喻超;劉建剛;王玉芝;;磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球抗人胰腺癌的實(shí)驗(yàn)研究[A];2007年貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)外科分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

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2 廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院 徐克成　穆峰;丹麥訪病之旅：聚焦胰腺癌的治療[N];健康報(bào);2008年

3 郝純毅 北京腫瘤醫(yī)院肝膽胰外二科主任醫(yī)師;酗酒和吸煙最傷胰腺[N];大眾科技報(bào);2011年

4 記者 朱弼瑜　專業(yè)指導(dǎo) 劉玉坦 新安國(guó)際醫(yī)院普通外科副主任醫(yī)師 董波 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)學(xué)科負(fù)責(zé)人、公共營(yíng)養(yǎng)師;健康生活,遠(yuǎn)離“癌癥之王”[N];嘉興日?qǐng)?bào);2011年

5 保健時(shí)報(bào)記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o

本文編號(hào)：1124949