本文關鍵詞：重組人腦利鈉肽表達及生物學活性測定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腦利鈉肽(Brain natriuretic peptide,BNP,又稱B型鈉尿肽)是于1988年由日本學者Sudoh等首次從豬腦中分離而得來的,但實際上腦利鈉肽的主要來源是心室,尤其是左心室為主。腦利鈉肽與A型利鈉肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)、C型利鈉肽(C-type natriuretic peptide,CNP)同屬于利鈉肽(Natriuretic peptide,NP)家族。利鈉肽家族是維持血壓穩(wěn)定及水、鹽代謝平衡的關鍵調(diào)節(jié)因子,心力衰竭(Heart failure,HF)時由于容量超載和心室壁張力增加,利鈉肽家族就被高度激活。利鈉肽家族具有調(diào)節(jié)血壓,利尿,擴張心外膜以及冠狀動脈,抑制血管平滑肌增殖,抑制血管組織增生等作用。所以利鈉肽家族在檢測和治療心血管系統(tǒng)疾病方面有著巨大的前景。腦利鈉肽是一種多肽類神經(jīng)激素,由32個氨基酸殘基構(gòu)成,其中氨基端第7個和第23個殘基由二硫鍵形成環(huán)狀結(jié)構(gòu),形成腦利鈉肽的功能域。與其天然受體結(jié)合后,可激活其胞Qg區(qū)的鳥苷酸環(huán)化酶活性,催化三磷酸鳥苷(Guanosine triphosphate,GTP)轉(zhuǎn)化為環(huán)磷酸鳥苷(Cyclic guanosine monophosphate,cGMP)。所以通過檢測cGMP含量可以測定重組人腦利鈉肽的生物學活性。通過分子克隆的方法,對人腦利鈉肽的基因序列進行優(yōu)化合成,構(gòu)建表達載體,對其進行測序鑒定,并轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌BL21原核表達系統(tǒng)中,篩選陽性單克隆菌落,得到重組人腦利鈉肽的工程菌,并進行腦利鈉肽大規(guī)模誘導表達,然后純化出重組人腦利鈉肽蛋白,最后建立酶聯(lián)免疫吸附劑測定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)活性的方法,用于腦利鈉肽的生物學活性測定。
【關鍵詞】：重組人腦利鈉肽 利鈉肽家族 心力衰竭 競爭性酶聯(lián)免疫(ELISA)活性檢測 免疫印跡法
【學位授予單位】：河北科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R945
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第1章 緒論9-19
• 1.1 腦利鈉肽的分子結(jié)構(gòu)及作用機制9-12
• 1.1.1 腦利鈉肽的分子結(jié)構(gòu)9-11
• 1.1.2 腦利鈉肽的組織特異性表達11-12
• 1.1.3 腦利鈉肽的受體12
• 1.2 腦利鈉肽的生理功能12-13
• 1.3 腦利鈉肽的應用13-15
• 1.3.1 腦利鈉肽在心力衰竭的診斷中的應用13-14
• 1.3.2 腦利鈉肽在預后中的應用14
• 1.3.3 腦利鈉肽在心力衰竭的治療中的應用14-15
• 1.3.4 腦利鈉肽在左心室功能障礙療效檢測中的應用15
• 1.4 重組蛋白的原核表達系統(tǒng)15-16
• 1.4.1 原核表達系統(tǒng)15-16
• 1.4.2 基因設計對重組蛋白表達的影響16
• 1.4.3 親和標簽對融合蛋白的影響16
• 1.5 酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）16-17
• 1.5.1 競爭法酶聯(lián)免疫吸附測定17
• 1.6 課題的研究背景、內(nèi)容及意義17-19
• 1.6.1 課題的研究背景17-18
• 1.6.2 課題的研究意義18
• 1.6.3 課題的主要研究內(nèi)容18-19
• 第2章 重組人腦利鈉肽高效可溶性表達系統(tǒng)的構(gòu)建19-33
• 2.1 材料與方法19-30
• 2.1.1 實驗設備及耗材19
• 2.1.2 實驗藥品與試劑19-21
• 2.1.3 實驗藥品配制21-23
• 2.1.4 試驗方法23-30
• 2.2 結(jié)果與討論30-32
• 2.2.1 載體構(gòu)建30-31
• 2.2.2 工程菌篩選31-32
• 2.3 本章小結(jié)32-33
• 第3章 重組人腦利鈉肽蛋白的純化33-39
• 3.1 材料與方法33-34
• 3.1.1 主要試劑耗材33
• 3.1.2 儀器與設備33
• 3.1.3 試劑配制33-34
• 3.1.4 實驗方法34
• 3.2 結(jié)果與討論34-37
• 3.2.1 目的蛋白純化34-37
• 3.3 本章小結(jié)37-39
• 第4章 重組人腦利鈉肽蛋白的理化性質(zhì)及生物學活性測定39-49
• 4.1 材料與方法39-44
• 4.1.1 主要試劑39
• 4.1.2 主要材料39-40
• 4.1.3 儀器與設備40
• 4.1.4 試驗方法40-44
• 4.2 結(jié)果與討論44-47
• 4.2.1 理化性質(zhì)44-47
• 4.3 本章小結(jié)47-49
• 結(jié)論49-51
• 參考文獻51-57
• 攻讀碩士學位期間所發(fā)表的論文57-59
• 致謝59-61
• 個人簡歷61

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  本文關鍵詞：重組人腦利鈉肽表達及生物學活性測定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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