本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對(duì)過(guò)氧化氫所致腦片損傷的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究通過(guò)過(guò)氧化氫刺激小鼠腦片,建立離體腦片損傷模型,預(yù)先給予不同濃度二甲雙胍進(jìn)行干預(yù),探討二甲雙胍對(duì)過(guò)氧化氫所致腦片的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。方法:腦片損傷模型的制備及實(shí)驗(yàn)分組:選用SPF級(jí)昆明種小鼠172只,制備成腦片后分為正常組、模型組、藥物低劑量組和藥物高劑量組四組:四組分別在37℃通有飽和氧的正常人工腦脊液(normal Artificial Cerebrospinal Fuid,n ACSF)中預(yù)孵育30min后;藥物組給予不同濃度二甲雙胍孵育30min,正常組和模型組正常孵育30min;模型組和藥物組轉(zhuǎn)至含過(guò)氧化氫的ACSF中孵育60min,正常組正常孵育60min。腦片均孵育120min后進(jìn)行后續(xù)指標(biāo)的測(cè)定。孵育后的腦片用氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)溶液進(jìn)行顯色、有機(jī)溶劑抽提測(cè)定溶液吸光度、腦片勻漿后進(jìn)行乳酸脫氫酶(Lactic Dehydrogenase,LDH)的活性測(cè)定、氧化指標(biāo)總超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)的測(cè)定及定量q PCR(Polymerase Chain Reaction)測(cè)定基因PICK1 m RNA的表達(dá)情況、Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2)和Bax(Bcl-2 Associated X protein)的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)與正常組相比,模型組和藥物組的腦片TTC染色都明顯變淺,而藥物組與模型組比較,腦片TTC染色明顯加深,且高劑量的染色比低劑量深;(2)在490nm處測(cè)定吸光度A490nm,模型組與正常組比較(P0.01),脫色產(chǎn)物明顯增加,二甲雙胍低劑量組(P0.05)和二甲雙胍高劑量組(P0.01)的A490nm與模型組比較脫色產(chǎn)物都增加;(3)模型組與正常組比較,模型組(P0.01)乳酸脫氫酶釋放率顯著增加,二甲雙胍低劑量組(P0.05)和二甲雙胍高劑量組(P0.05)與模型組比較都減少了,而二甲雙胍低劑量組和高劑量組間差異不是很明顯;(4)?腦片T-SOD測(cè)定結(jié)果:與正常組比較,模型組的T-SOD活性顯著降低(P0.01);給藥低劑量組(P0.05)和給藥高劑量組(P0.01)與模型組比較,T-SOD的活性都有升高;?腦片MDA測(cè)定結(jié)果:與正常組比較,模型組腦片的MDA活性增強(qiáng)(P0.05);低劑量組(P0.05)和高劑量組(P0.01)MDA活性都有所下降;?腦片GSH-PX測(cè)定結(jié)果:與模型組比較,正常組(P0.05)和高劑量組(P0.05)的GSH-PX活性都增加,而低劑量組與模型組比較(P0.05),不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(5)PICK1基因m RNA的表達(dá):與正常組比較,模型中的表達(dá)明顯增加(P0.01);而經(jīng)過(guò)二甲雙胍預(yù)處理的腦片組(低劑量組和高劑量組),低劑量組和高劑量組較模型組有所減少(P0.05,P0.05),且高劑量組減少較低劑量組多;(6)Bcl-2/Bax的表達(dá):與正常組比較,模型組Bcl-2/Bax的表達(dá)明顯下降;而經(jīng)二甲雙胍(低劑量組和高劑量組)預(yù)處理后,Bcl-2/Bax的表達(dá)有所升高。結(jié)論:(1)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的腦片損傷,而二甲雙胍對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)腦片氧化損傷有一定的保護(hù)作用。(2)腦片的氧化損傷可激活PICK1的上調(diào),二甲雙胍通過(guò)抑制PICK1的表達(dá)對(duì)過(guò)氧化氫所致的腦片損傷有保護(hù)作用。(3)二甲雙胍可上調(diào)凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表達(dá)從而對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的腦片損傷起保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：腦片 二甲雙胍 氧化應(yīng)激 PICK1 凋亡蛋白
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 縮略詞4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 實(shí)驗(yàn)材料11-16
• 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物11
• 2 主要試劑和儀器設(shè)備11-13
• 3 主要試劑的配制13-16
• 實(shí)驗(yàn)方法16-24
• 1 小鼠全腦腦片的制備16-17
• 2 TTC染色法篩選二甲雙胍給藥劑量17
• 3 實(shí)驗(yàn)分組及模型的制備17-18
• 4 腦片TTC染色產(chǎn)物的測(cè)定18
• 5 腦片乳酸脫氫酶（LDH）的測(cè)定18
• 6 腦片氧化指標(biāo)的測(cè)定18-20
• 7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)腦片PICK1 mRNA的表達(dá)20-21
• 8 蛋白免疫印記法檢測(cè)腦片凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2 和Bax的表達(dá)21-23
• 9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23-24
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-32
• 1 二甲雙胍對(duì)H_2O_2所致腦片損傷TTC染色的影響24
• 2 二甲雙胍對(duì)H_2O_2所致腦片損傷TTC染色產(chǎn)物的影響24-25
• 3 二甲雙胍對(duì)H_2O_2所致腦片損傷乳酸脫氫酶（LDH）的測(cè)定25-26
• 4 二甲雙胍對(duì)H_2O_2所致腦片損傷氧化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果26-28
• 5 二甲雙胍對(duì)H_2O_2所致腦片損傷腦片PICK1基因mRNA的表達(dá)28-29
• 6 二甲雙胍對(duì)H_2O_2所致腦片損傷凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)29-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 附錄38-39
• 文獻(xiàn)綜述39-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 攻讀學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果49-50
• 致謝50

【相似文獻(xiàn)】

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1 李玉],張富川;自制離體實(shí)驗(yàn)?zāi)X片切片裝置(摘要)[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1990年01期

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本文編號(hào)：405544