研究背景Hedgehog信號通路在胚胎發(fā)育、分化、機體內環(huán)境穩(wěn)定、組織修復等生長發(fā)育和生理過程中起著重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)Hedgehog信號通路在多種腫瘤組織中被異常激活,進一步研究表明Hedgehog信號通路的異常激活與腫瘤細胞的增殖分化、凋亡、血管新生以及侵襲轉移等密切相關。Hedgehog信號通路的組成主要包括以下幾個部分:Hedgehog（Hh）配體,Patched（Ptch）蛋白,smoothened（SMO）蛋白,glioma associated oncogene homolog（Gli）轉錄因子及其下游靶基因。SMO蛋白作為Hedgehog信號通路的中間轉導靶點,在其下游存在一個龐大的傳遞Hh信號的胞內多分子網絡,主要包括suppressor of fused（Sufu）、protein kinase A（PKA）、glycogen synthase kinase 3（GSK3）以及 dual-specificity tyrosine phosphorylation-regulated kinase-1A（DYRK1）等,信號傳遞最終修飾Gli轉錄因子而調控目的基因的表達...

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-A]吡啶衍生物的設計、合成
    1.1 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的設計
    1.2 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的合成路線
    1.3 實驗材料
    1.4 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的合成
第二部分 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-A]吡啶衍生物的活性檢測
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要實驗試劑
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞復蘇
        2.2.2 細胞凍存
        2.2.3 細胞的傳代
        2.2.4 細胞的計數(shù)
        2.2.5 蛋白免疫印跡
        2.2.6 MTT法測腫瘤細胞細胞活力
        2.2.7 平板克隆形成實驗
        2.2.8 細胞劃痕實驗
        2.2.9 細流式細胞術
        2.2.10 分子對接模擬實驗
        2.2.11 化合物體內吸收(absorption)、分布(distribution)、代謝(metabolism)、排泄(excretion) (ADME)性質預測
        2.2.12 雙熒光素酶實驗
        2.2.13 表面等離子共振實驗
        2.2.14 熒光共聚焦實驗
        2.2.15 小鼠體內急性毒性實驗
        2.2.16 裸鼠體內實驗
    2.3 實驗結果
        2.3.1 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物與SMO蛋白分子對接模擬的評分
        2.3.2 分子對接模擬實驗
        2.3.3 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物ADME性質預測
        2.3.4 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物雙熒光素酶報告基因實驗結果
        2.3.5 表面等離子共振實驗
        2.3.6 化合物A3、A14對細胞質中SMO蛋白向初級纖毛遷移的影響
        2.3.7 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物對腫瘤細胞細胞增殖的影響
        2.3.8 化合物A14對結腸癌細胞克隆形成能力的影響
        2.3.9 化合物A14對結腸癌細胞細胞周期的影響
        2.3.10 化合物A14對結腸癌細胞細胞凋亡的影響
        2.3.11 化合物A14對結腸癌細胞細胞遷移的影響
        2.3.12 化合物A14對Hedgehog信號通路上下游蛋白表達的作用
        2.3.13 化合物A14對結腸癌細胞HT-29以及RKO中細胞質中SMO蛋白向初級纖毛遷移的影響
        2.3.14 化合物對A14于小鼠體內的急性毒性實驗
        2.3.15 化合物A14對HT-29細胞體內增殖的影響
    2.4 討論
    2.5 實驗結論
參考文獻
附圖
攻讀學位期間成果
致謝



本文編號：4036107