CT-1042(4-乙基-8-氟-4-羥基-9-甲氧基-11-甲基-1,12-二氫-4H-2-氧雜-6,12a-二氮雜-二苯并[b,H]芴-3,13-二酮)是一種小分子化合物,在體外實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出對許多組織來源的腫瘤細(xì)胞都有抑制活性。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)發(fā)病率高且后果嚴(yán)重,雖然已有靶向藥物上市,但易發(fā)生耐藥,人群適用有限,研發(fā)新型抗肺癌藥物,仍是臨床迫切需求。CT-1042是一種抗癌活性很強(qiáng)的新型喜樹堿類化合物,但對肺癌細(xì)胞的作用和潛在機(jī)制卻不清楚。本研究在較為系統(tǒng)地評價(jià)CT-1042的抗癌特點(diǎn)的同時(shí),重點(diǎn)評價(jià)和研究了CT-1042對NCI-H460 NSCLC細(xì)胞的抗癌特性及其分子機(jī)制。本研究用MTT實(shí)驗(yàn)來評估細(xì)胞增生活性,并用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞凋亡、線粒體膜電位(MMP)和進(jìn)行細(xì)胞周期分析。進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting以確定相對的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。進(jìn)行裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)以評價(jià)CT-1042對體內(nèi)腫瘤生長的影響。實(shí)驗(yàn)證實(shí),CT-1042明顯抑制了12種腫瘤細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)了受試細(xì)胞中MMP的減少,并增加了相對Caspase-3的活性。細(xì)胞周...

【文章頁數(shù)】：154 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞對照表
摘要
abstract
1 引言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 藥品與主要試劑
        2.1.2 抗體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 受試藥
        2.1.5 細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 體外實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 Hoechst33342染色
        2.2.4 AnnexinV/PI雙染實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 線粒體膜電位(MMP)實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 細(xì)胞周期分析
        2.2.7 Caspase-3活性實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 實(shí)時(shí)定量PCR(RT-qPCR)
        2.2.11 蛋白質(zhì)印跡法(WesternBlotting)
    2.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人肺癌細(xì)胞(NCI-H460)皮下移植瘤的治療作用
        2.3.2 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人肝癌細(xì)胞(HCCLM3)皮下移植瘤的治療作用
        2.3.3 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人結(jié)腸癌細(xì)胞(LoVo)皮下移植瘤的治療作用
        2.3.4 蘇木素-伊紅染色法(H&E)
        2.3.5 免疫組織化學(xué)法(IHC)
    2.4 聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 體外藥物聯(lián)合實(shí)驗(yàn)
        2.4.2 兩藥聯(lián)合對細(xì)胞凋亡的影響
        2.4.3 兩藥聯(lián)合對細(xì)胞周期分布的影響
        2.4.4 兩藥聯(lián)合對mRNA表達(dá)的影響
        2.4.5 兩藥聯(lián)合對蛋白表達(dá)的影響
        2.4.6 體內(nèi)藥物聯(lián)合實(shí)驗(yàn)
    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 CT-1042對細(xì)胞增殖的抑制作用
    3.2 CT-1042對細(xì)胞核形態(tài)的影響
    3.3 CT-1042對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響
    3.4 CT-1042對腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位的影響
    3.5 CT-1042對腫瘤細(xì)胞周期分布的影響
    3.6 CT-1042對腫瘤細(xì)胞Caspase-3活性的影響
    3.7 CT-1042對腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響
    3.8 CT-1042對腫瘤細(xì)胞mRNA表達(dá)的影響
    3.9 CT-1042對腫瘤細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響
    3.10 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人肺癌細(xì)胞(NCI-H460)皮下移植瘤的治療作用(第一批)
    3.11 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人肺癌細(xì)胞(NCI-H460)皮下移植瘤的治療作用(第二批)
    3.12 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人肝癌細(xì)胞(HCCLM3)皮下移植瘤的治療作用(第一批)
    3.13 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人肝癌細(xì)胞(HCCLM3)皮下移植瘤的治療作用(第二批)
    3.14 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人結(jié)腸癌細(xì)胞(LoVo)皮下移植瘤的治療作用(第一批)
    3.15 CT-1042對Nu/Nu裸小鼠人結(jié)腸癌細(xì)胞(LoVo)皮下移植瘤的治療作用(第二批)
    3.16 H&E染色和免疫組化
    3.17 聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.17.1 CT-1042聯(lián)合姜黃素(Curcumin)對肺癌細(xì)胞增殖的影響
        3.17.2 姜黃素增強(qiáng)CT-1042對肺癌細(xì)胞周期阻滯以及凋亡的誘導(dǎo)作用
        3.17.3 CT-1042聯(lián)合姜黃素對肺癌細(xì)胞mRNA表達(dá)的調(diào)控
        3.17.4 CT-1042聯(lián)合姜黃素對肺癌細(xì)胞蛋白表達(dá)的調(diào)控
        3.17.5 CT-1042聯(lián)合姜黃素對裸鼠皮下移植瘤的治療作用
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡歷
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：4036669