糖尿病是一個日益威脅人類健康的以血糖升高為特點的代謝紊亂性疾病。糖尿病腎病是終末期腎病的主要病因,與腎小球、血管和腎小管損傷相關(guān)。高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞加速衰老是導(dǎo)致糖尿病腎病腎間質(zhì)損傷的重要細(xì)胞事件。二甲雙胍是一種雙胍衍生物,是II型糖尿病的一線口服治療藥物。二甲雙胍具有抑制腸道葡萄糖吸收等多種降糖作用。同時,有研究表明二甲雙胍能夠部分逆轉(zhuǎn)糖尿病腎病所致的腎損害。RNA結(jié)合蛋白(RNA binding proteins,RBPs)是一類能直接與RNA結(jié)合的蛋白,通過與RNA結(jié)合形成核糖核酸蛋白復(fù)合物,調(diào)控RNA的生物學(xué)功能。MBNL1(muscleblind like splicing regulator 1,盲肌樣蛋白1)是一個由343個氨基酸構(gòu)成的RBP,定位于3號染色體q25.1-q25.2,在細(xì)胞中的定位失調(diào)是強直性肌營養(yǎng)不良的重要發(fā)病原因。MBNL1可與多種RNA結(jié)合,調(diào)控其選擇性剪接、選擇性聚腺苷酸化、穩(wěn)定性和亞細(xì)胞定位。但目前尚無研究報道二甲雙胍或MBNL1對糖尿病腎病衰老的作用與機制。MiRNAs是一種由21到25個核苷酸組成具有保守序列的小功能非編碼RNA,通過與相應(yīng)...

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1 A-C:Western blot檢測衰老相關(guān)蛋白P21的表達。D:β-半乳糖苷酶染色方法檢測細(xì)胞染色的陽性率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。**p<0.01,vs.正常糖組。標(biāo)尺=50μm。

采用Westernblot方法檢測細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白P21的表達,結(jié)果顯示,24h和48h時,高糖組與高滲組、正常糖組的P21表達無統(tǒng)計學(xué)差異。72h時,高糖組P21的表達明顯高于正常糖組,但高滲組與正常糖組之間的P21表達無統(tǒng)計學(xué)差異。因此選擇72h為高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞衰....

圖1.1 A-C:Western blot檢測衰老相關(guān)蛋白P21的表達。D:β-半乳糖苷酶染色方法檢測細(xì)胞染色的陽性率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。**p<0.01,vs.正常糖組。標(biāo)尺=50μm。

圖1.1A-C:Westernblot檢測衰老相關(guān)蛋白P21的表達。D:β-半乳糖苷酶染色方法檢測細(xì)胞染色的陽性率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。**p<0.01,vs.正常糖組。標(biāo)尺=50μm。4.2高糖通過下調(diào)MBNL1的表達誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞衰老

圖1.2 A:PCR檢測正常糖組和高糖組人腎小管細(xì)胞MBNL1的RNA表達水平。B:Westernblot檢測正常糖組和高糖組人腎小管細(xì)胞MBNL1的蛋白表達水平。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。

首先,本研究檢測了高糖對MBNL1的調(diào)控,高糖組MBNL1的mRNA(圖1.2A)和蛋白(圖1.2B)的表達與正常糖組相比顯著降低。以下實驗均在高糖條件下進行。檢測過表達或沉默MBNL1對miR-130a-3p、STAT3的表達和腎小管上皮細(xì)胞衰老作用的結(jié)果顯示,與對照組相比較,....

圖1.3 A:PCR檢測正常糖組和高糖組人腎小管細(xì)胞mi R-130a-3p的RNA表達水平。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。

本研究檢測了高糖對miR-130a-3p的調(diào)控,高糖組miR-130a-3p的表達與正常糖組相比顯著降低(圖1.3A)。以下實驗均在高糖條件下進行。檢測過表達或沉默miR-130a-3p對STAT3的表達和腎小管上皮細(xì)胞衰老作用的結(jié)果顯示,與對照組相比較,miR-130a-3p(....

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