糖尿病是一個(gè)日益威脅人類健康的以血糖升高為特點(diǎn)的代謝紊亂性疾病。糖尿病腎病是終末期腎病的主要病因,與腎小球、血管和腎小管損傷相關(guān)。高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞加速衰老是導(dǎo)致糖尿病腎病腎間質(zhì)損傷的重要細(xì)胞事件。二甲雙胍是一種雙胍衍生物,是II型糖尿病的一線口服治療藥物。二甲雙胍具有抑制腸道葡萄糖吸收等多種降糖作用。同時(shí),有研究表明二甲雙胍能夠部分逆轉(zhuǎn)糖尿病腎病所致的腎損害。RNA結(jié)合蛋白(RNA binding proteins,RBPs)是一類能直接與RNA結(jié)合的蛋白,通過與RNA結(jié)合形成核糖核酸蛋白復(fù)合物,調(diào)控RNA的生物學(xué)功能。MBNL1(muscleblind like splicing regulator 1,盲肌樣蛋白1)是一個(gè)由343個(gè)氨基酸構(gòu)成的RBP,定位于3號(hào)染色體q25.1-q25.2,在細(xì)胞中的定位失調(diào)是強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良的重要發(fā)病原因。MBNL1可與多種RNA結(jié)合,調(diào)控其選擇性剪接、選擇性聚腺苷酸化、穩(wěn)定性和亞細(xì)胞定位。但目前尚無研究報(bào)道二甲雙胍或MBNL1對(duì)糖尿病腎病衰老的作用與機(jī)制。MiRNAs是一種由21到25個(gè)核苷酸組成具有保守序列的小功能非編碼RNA,通過與相應(yīng)...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1 A-C:Western blot檢測(cè)衰老相關(guān)蛋白P21的表達(dá)。D:β-半乳糖苷酶染色方法檢測(cè)細(xì)胞染色的陽性率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。**p<0.01,vs.正常糖組。標(biāo)尺=50μm。

采用Westernblot方法檢測(cè)細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白P21的表達(dá),結(jié)果顯示,24h和48h時(shí),高糖組與高滲組、正常糖組的P21表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。72h時(shí),高糖組P21的表達(dá)明顯高于正常糖組,但高滲組與正常糖組之間的P21表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此選擇72h為高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞衰....

圖1.1 A-C:Western blot檢測(cè)衰老相關(guān)蛋白P21的表達(dá)。D:β-半乳糖苷酶染色方法檢測(cè)細(xì)胞染色的陽性率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。**p<0.01,vs.正常糖組。標(biāo)尺=50μm。

圖1.1A-C:Westernblot檢測(cè)衰老相關(guān)蛋白P21的表達(dá)。D:β-半乳糖苷酶染色方法檢測(cè)細(xì)胞染色的陽性率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。**p<0.01,vs.正常糖組。標(biāo)尺=50μm。4.2高糖通過下調(diào)MBNL1的表達(dá)誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞衰老

圖1.2 A:PCR檢測(cè)正常糖組和高糖組人腎小管細(xì)胞MBNL1的RNA表達(dá)水平。B:Westernblot檢測(cè)正常糖組和高糖組人腎小管細(xì)胞MBNL1的蛋白表達(dá)水平。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。

首先,本研究檢測(cè)了高糖對(duì)MBNL1的調(diào)控,高糖組MBNL1的mRNA(圖1.2A)和蛋白(圖1.2B)的表達(dá)與正常糖組相比顯著降低。以下實(shí)驗(yàn)均在高糖條件下進(jìn)行。檢測(cè)過表達(dá)或沉默MBNL1對(duì)miR-130a-3p、STAT3的表達(dá)和腎小管上皮細(xì)胞衰老作用的結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比較,....

圖1.3 A:PCR檢測(cè)正常糖組和高糖組人腎小管細(xì)胞mi R-130a-3p的RNA表達(dá)水平。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。

本研究檢測(cè)了高糖對(duì)miR-130a-3p的調(diào)控,高糖組miR-130a-3p的表達(dá)與正常糖組相比顯著降低(圖1.3A)。以下實(shí)驗(yàn)均在高糖條件下進(jìn)行。檢測(cè)過表達(dá)或沉默miR-130a-3p對(duì)STAT3的表達(dá)和腎小管上皮細(xì)胞衰老作用的結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比較,miR-130a-3p(....

本文編號(hào)：4035772