目的:探討維甲酸X受體(RXR)對(duì)缺氧/復(fù)氧(H/R)誘導(dǎo)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AEC Ⅱ)自噬的調(diào)控作用及分子機(jī)制。方法:常氧培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,將生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞隨機(jī)分為5組:(1)對(duì)照組:細(xì)胞于正常條件下培養(yǎng)30 h;(2)缺氧/復(fù)氧組:細(xì)胞缺氧6 h,復(fù)氧24 h;(3)溶劑DMSO組:細(xì)胞于造模前1.5 h用濃度低于0.1%的DMSO進(jìn)行預(yù)處理,其余處理同H/R組;(4)9-順式維甲酸(9-RA)組:細(xì)胞于缺氧前1 h用9-RA(100 nmol/L)預(yù)處理;(5)HX531組:細(xì)胞先用9-RA處理0.5 h,然后用HX531(2.5μmol/L)處理1 h。采用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞活力;免疫熒光染色法觀察各組細(xì)胞RXRα表達(dá)變化;用透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的改變;RT-PCR檢測(cè)腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、自噬相關(guān)蛋白beclin 1及LC3、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和P62 mRNA水平的表達(dá)。Western blot檢測(cè)p-AMPK、beclin 1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62蛋白的表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組相比,其余4組細(xì)胞的細(xì)胞活...

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圖1CCK-8法檢測(cè)的各組細(xì)胞A值變化

與Con組相比，其余4組細(xì)胞的A值均顯著下降（P<0.05）；與DMSO組相比，9-RA組的A值顯著上升（P<0.05）；與9-RA組相比，HX531組的A值顯著降低（P<0.05）；而H/R、DMSO和HX531組之間兩兩相比，A值無顯著差異（P>0.05），見圖1。2免疫熒光....

圖2各組細(xì)胞RXRα的表達(dá)變化及熒光強(qiáng)度

本研究選擇了多個(gè)自噬通路上有典型指示作用的自噬相關(guān)蛋白。在自噬信號(hào)通路中，腺苷酸活化蛋白激酶（adenosinemonophosphate-activatedproteinkinase,AMPK）和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamy....

圖3各組細(xì)胞電鏡超微結(jié)構(gòu)

通過對(duì)AECⅡ進(jìn)行缺氧/復(fù)氧、加用RXR激動(dòng)劑和拮抗劑等干預(yù)，CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)顯示，缺氧/復(fù)氧會(huì)引起細(xì)胞活力下降，而激動(dòng)了RXR后，細(xì)胞活力有所回升。各組細(xì)胞電鏡觀察結(jié)果也提示，除正常對(duì)照組外，其余各組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷加重，其中H/R、DMSO和HX5313組細(xì)胞內(nèi)可觀察....

圖4各組細(xì)胞AMPK、beclin1、LC3、mTOR和P62的mRNA表達(dá)

圖3各組細(xì)胞電鏡超微結(jié)構(gòu)圖5各組細(xì)胞p-AMPK、beclin1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62的蛋白水平

本文編號(hào)：3956587