本文關(guān)鍵詞：PGE2通過EP4-cAMP通路調(diào)節(jié)骨髓源樹突細(xì)胞功能及CP-25的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：前列腺素E2 (prostaglandin E2, PGE2)是一類重要的花生四烯酸類物質(zhì)的代謝產(chǎn)物,在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。PGE2受體(E-prostanoid receptors, EPs)分為4個(gè)亞型,即EP1、EP2、EP3和EP4。PGE2與其不同EP受體結(jié)合,發(fā)揮不同的生理和病理作用。樹突細(xì)胞(dendritic cells, DCs)作為體內(nèi)專職抗原提呈細(xì)胞(antigen-presenting cell, APC),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫的重要作用。根據(jù)DCs在體內(nèi)的狀態(tài)的不同,DCs具有免疫原性和免疫耐受性雙重作用,表現(xiàn)為成熟樹突細(xì)胞(mature DCs, mDCs)顯示出促進(jìn)免疫作用,而未成熟樹突細(xì)胞(Immature DCs, iDCs)顯示出免疫耐受特性。 PGE2-EP4-Gs (stimulatory G protein)蛋白偶聯(lián)信號(hào)調(diào)節(jié)環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)水平參與了炎癥免疫反應(yīng)。β-arrestin2與G蛋白偶聯(lián)受體激酶2 (G-protein-coupled receptor kinases 2,GRK2)聯(lián)合作用,引起了細(xì)胞表面受體的脫敏和受體的內(nèi)吞,進(jìn)而負(fù)向調(diào)控G蛋白信號(hào)通路。PGE2能促進(jìn)DCs的成熟,表現(xiàn)為DCs攝取抗原能力降低,而抗原提呈能力增強(qiáng)。但PGE2對DCs的調(diào)節(jié)作用是否通過EP4-cAMP通路發(fā)揮的,以及在這個(gè)調(diào)節(jié)作用中β-arrestin及GRK發(fā)揮怎樣的作用還未見報(bào)道。課題組前期報(bào)道,Pae具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)的作用。CP-25是課題組采用�；磻�(yīng)對Pae進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,而合成的一個(gè)新的Pae單體衍生物。整體實(shí)驗(yàn)研究表明,CP-25明顯緩解和治療小鼠CIA,該作用與其調(diào)控T、B淋巴細(xì)胞的功能有關(guān)。CP-25對DCs的功能有無調(diào)節(jié)作用?其作用是否通過調(diào)節(jié)EP4-cAMP通路及影響P-arrestin和GRK表達(dá)?未見報(bào)道。目的：研究PGE2對骨髓源DCs功能的變化及機(jī)制,研究CP-25對PGE2作用下的骨髓源DCs功能的調(diào)節(jié)作用及部分機(jī)制,為揭示PGE2通過受體參與DCs調(diào)控的作用和機(jī)制以及CP-25的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：以骨髓源DCs作為研究對象,用不同濃度PGE2作為刺激因子,觀察經(jīng)PGE2刺激后的骨髓源DCs細(xì)胞表面EP4、細(xì)胞內(nèi)cAMP、β-arresti2、GRK2的水平變化,同時(shí)觀察CP-25對上述變化的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測骨髓源DCs表型CD40、CD80、CD83、MHC-Ⅱ表達(dá)高低和抗原攝取功能,熒光間標(biāo)法檢測小鼠骨髓源DCs細(xì)胞膜上EP4的表達(dá),以平均熒光強(qiáng)度表示表達(dá)的高低；MTT法檢測處理后的DCs對T細(xì)胞增殖的作用；放免法檢測骨髓源DCs內(nèi)cAMP的水平變化；westernblot法檢測DCs細(xì)胞膜上GRK2和β-arrestin2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：1. PGE2促進(jìn)DCs的成熟和升高DCs細(xì)胞膜EP4的表達(dá)PGE2(2.5、5、10nmol/L)作用于DCs 24h能明顯上調(diào)DCs表面分子CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表達(dá),對CD80表達(dá)無明顯影響；PGE2(1.25、2.5、5、 10、20nmol/L)作用于DCs 24h能明顯抑制DCs的抗原攝取功能；P GE2 (2.5. 5、10nmol/L)刺激DCs 24h能促進(jìn)T細(xì)胞增殖的作用；PGE2(2.5、5、10nmol/L)作用于DCs 24h明顯升高DCs細(xì)胞膜上EP4表達(dá)。2.CP-25通過調(diào)節(jié)EP4-cAMP通路恢復(fù)異常增高的DCs功能CP-25(10-5、10-6、10-7mol/L)作用于DCs 24h能明顯下調(diào)CD40、CD83、 MHC-Ⅱ的表達(dá)；CP-25(10-5、10-6、10-7mol/L)作用于DCs 24h能恢復(fù)經(jīng)PGE2刺激的DCs對T細(xì)胞增殖的作用,能明顯促進(jìn)DCs的抗原攝取功能；CP-25(10-5、 10-6、10-7mol/L)作用于DCs 24h明顯下調(diào)PGE2升高的DCs細(xì)胞膜上EP4表達(dá)。CP-25(10-5、10-6、10-7mol/L)作用于DCs 24h上調(diào)PGE2降低的DCs內(nèi)cAMP水平；CP-25 (10-6nmol/L)作用于DCs 24h對PGE2上調(diào)的DCs細(xì)胞膜上GRK2、β-arrestin2水平有明顯抑制作用。結(jié)論：1.PGE2可以促進(jìn)DCs成熟,表現(xiàn)為高表達(dá)共刺激分子、抑制DCs的抗原攝取功能、促進(jìn)T細(xì)胞增殖的作用。2.PGE2促進(jìn)DCs成熟可能與其調(diào)控EP4-cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)；3.CP-25抑制PGE2所致DCs成熟可能與其恢復(fù)EP4-cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：樹突細(xì)胞 EP4受體 PGE2 CP-25 GRK2 β -arrestin2
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 英文縮略詞表(Abbreviation)6-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-16
• 1 前言16-18
• 2 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2.2 藥物與試劑18-19
• 2.3 儀器與設(shè)備19-20
• 3 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 3.1 骨髓源DCs分離與培養(yǎng)20-21
• 3.2 骨髓源DCs的鑒定21
• 3.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定21
• 3.2.2 骨髓源DCs細(xì)胞表型鑒定21
• 3.3 骨髓源DCs的干預(yù)21-22
• 3.3.1 PGE2對骨髓源DCs的干預(yù)21-22
• 3.3.2 CP-25對骨髓源DCs的干預(yù)22
• 3.4 骨髓源DCs的表型及功能檢測22-23
• 3.4.1 骨髓源DCs表型的檢測22
• 3.4.2 骨髓源DCs抗原攝取能力的檢測22-23
• 3.4.3 骨髓源DCs對T細(xì)胞增殖影響的檢測23
• 3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測骨髓源DCs表面上EP4的表達(dá)23
• 3.6 骨髓源DCs內(nèi)cAMP水平的檢測23-25
• 3.7 Western blot法檢測GRK2、β-arrestin2的表達(dá)25-27
• 3.7.1 骨髓源DCs樣品的制備及蛋白質(zhì)的提取25
• 3.7.2 骨髓源DCs胞膜蛋白的分離25
• 3.7.3 蛋白質(zhì)定量(Lowry法)25-26
• 3.7.4 Western blot操作步驟26-27
• 3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27-28
• 4 結(jié)果28-54
• 4.1 PGE2對骨髓源DCs表型及功能的影響28-40
• 4.1.1 骨髓源DCs的形態(tài)學(xué)變化及流式鑒定28-29
• 4.1.2 PGE2對骨髓源DCs表面分子CD40、CD80、CD83、MHC-Ⅱ表達(dá)的影響29-35
• 4.1.3 PGE2對DCs抗原攝取能力的影響35-37
• 4.1.4 PGE2處理的DCs對T細(xì)胞增殖的影響37-38
• 4.1.5 PGE2對骨髓源DCs表面EP4表達(dá)的影響38-40
• 4.2 CP-25對PGE2處理后的骨髓源DCs功能的影響40-54
• 4.2.1 不同濃度及刺激不同時(shí)間PGE2對DCs上CD40表達(dá)的影響40-41
• 4.2.2 CP-25對骨髓源DCs表面CD40、CD83、MHC-Ⅱ表達(dá)的影響41-46
• 4.2.3 CP-25對骨髓源DCs抗原攝取能力的影響46-48
• 4.2.4 CP-25處理骨髓源DCs對T細(xì)胞增殖的響48-49
• 4.2.5 CP-25對骨髓源DCs表面EP4表達(dá)的影響49-51
• 4.2.6 CP-25對骨髓源DCs內(nèi)cAMP水平的影響51-52
• 4.2.7 CP-25對骨髓源DCs中GRK2、β-arrestin2表達(dá)水平的影響.52-54
• 5 討論54-61
• 5.1 PGE2促進(jìn)骨髓源DCs功能的變化54-57
• 5.2 PGE2促進(jìn)DCs的成熟與其作用于EP4有關(guān)57-58
• 5.3 恢復(fù)PGE2-EP4-G蛋白-cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是CP-25調(diào)控骨髓源DCs功能的重要機(jī)制之一58-61
• 6 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 附錄71-73
• 致謝73-75
• 綜述：樹突細(xì)胞在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病理機(jī)制中的免疫原性和耐受性雙重作用75-88
• 參考文獻(xiàn)83-88

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：PGE2通過EP4-cAMP通路調(diào)節(jié)骨髓源樹突細(xì)胞功能及CP-25的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：395556