研究背景隨著人口的增長和老齡化,中國冠心病事件的發(fā)生和死亡的絕對數量在急劇增加。冠心病最嚴重的后果是急性心肌梗死,心肌梗死后溶栓、經皮冠狀動脈介入治療(percutaneous coronary intervention,PCI)和冠狀動脈旁路手術(Coronary Artery Bypass Grafting,CABG)是恢復再灌注血流的主要治療方法,而再灌注過程會引起心臟結構和功能的損傷從而導致病情加重,目前尚無有效的治療方法。因此,保護心肌細胞免受缺血再灌注損傷,同時闡明損傷機制具有重要意義。尾加壓素II(urotensinII,UII)是存在于人類以及不同哺乳動物物種中的生長激素樣神經環(huán)肽,UII通過激活UT受體(urotensinII receptor,UTR)在多種心血管疾病病理生理發(fā)展中起關鍵作用。因此,人們不斷進行臨床前藥物試驗研究,希望能夠發(fā)現高效能及高選擇性的UTR阻斷劑藥物。SB-706375做為一種哺乳動物UTR阻斷劑,具有高效性、可逆性和高選擇性,且無內在活性。但到目前為止,關于SB-706375抗心肌缺血再灌注損傷的作用及相關機制尚未見報道,所以本課題選用S...

【文章頁數】：123 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
英文摘要
1.前言
2.材料和方法
    2.1 實驗動物
        2.1.1 鑒定方法
        2.1.2 鑒定結果
    2.2 藥品與試劑
    2.3 儀器與設備
3.試驗方法及研究內容
    3.1 小鼠心肌缺血模型
        3.1.1 實驗分組
        3.1.2 實驗步驟
        3.1.3 心肌組織HE染色
        3.1.4 心肌組織蛋白提取
        3.1.5 心肌組織蛋白定量檢測
        3.1.6 心肌組織中ROCK1,ROCK2和RIP3蛋白的表達的檢測
    3.2 離體大鼠心肌缺血再灌注損傷模型
        3.2.1 配制Krebs–Henseleit(K-H)緩沖液
        3.2.2 大鼠左心室球囊導管的制作
        3.2.3 灌流系統(tǒng)的矯零
        3.2.4 離體大鼠心臟的制備
        3.2.5 大鼠Langendorff模型的建立
        3.2.6 實驗分組及給藥
        3.2.7 血流動力學指標監(jiān)測
        3.2.8 冠脈流量的測定
        3.2.9 灌流液中cTnI含量和LDH、CK-MB活性的測定
        3.2.10 大鼠心肌組織中B淋巴細胞瘤-2 基因簡稱bcl-2（B-cell lymphoma-2）Bcl-2及Bcl-2相關X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,BAX)Bax的測定（免疫組化方法）
        3.2.11 心肌組織中RhoA活性測定
        3.2.12 大鼠心肌組織中UTR,ROCK1,ROCK2,RIP3和CaMKⅡ蛋白的表達的檢測
        3.2.13 心肌組織中ROCK和 RIP3 蛋白免疫共沉淀方法
    3.3 配對實驗設計
        3.3.1 實驗動物
        3.3.2 離體心臟模型
        3.3.3 心功能`指標的測定
        3.3.4 灌流液中cTnI含量和LDH,CK-MB活性的測定
        3.3.5 實驗分組及給藥
    3.4 統(tǒng)計學處理
4.實驗結果
    4.1 SB-706375 對小鼠心肌缺血性損傷的保護作用
        4.1.1 SB-706375 對小鼠缺血性心肌損傷后心電圖ST段的影響
        4.1.2 SB-706375 對小鼠缺血性心肌損傷后血清TnI含量及CK-MB,LDH的活性的影響
        4.1.3 SB-706375 對小鼠缺血心肌組織病理學的影響
    4.2 SB-706375 保護小鼠心肌缺血性損傷的作用機制
        4.2.1 SB-706375對小鼠缺血性心肌ROCK1,ROCK2 蛋白表達的影響
        4.2.2 SB-706375 對小鼠缺血心肌RIP3 蛋白表達的影響
    4.3 CSE KO對 SB-706375 保護小鼠缺血心肌損傷的影響
        4.3.1 CSE產生的H2S對 SB-706375 抑制小鼠缺血性心肌損傷后心電圖ST段變化的影響
        4.3.2 CSE產生的H2S對 SB-706375 抑制小鼠缺血性心肌損傷后心肌酶學指標的影響
        4.3.3 CSE產生的H2S對 SB-706375誘導小鼠缺血心肌ROCK1,ROCK2 蛋白表達的影響
        4.3.4 CSE產生的H2S對 SB-706375 誘導小鼠缺血心肌RIP3蛋白表達的影響
    4.4 SB-706375 對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的影響
        4.4.1 大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型的建立
        4.4.2 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R損傷血流動力學指標和冠脈流量的影響
        4.4.3 SB-706375 對大鼠離體心肌組織I/R損傷后病理學的影響
        4.4.4 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R灌流液中CK-MB,LDH的活性和cTnI含量的影響
        4.4.5 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中UTR蛋白表達的影響
        4.4.6 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中RhoA活性的影響
        4.4.7 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中ROCK1 和ROCK2 蛋白表達的影響
        4.4.8 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中RIP3 蛋白表達的影響
        4.4.9 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中CaMKII蛋白表達的影響
        4.4.10 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中Bcl-2 表達的影響
        4.4.11 SB-706375 對大鼠離體心肌I/R后心肌組織中Bax表達的影響
    4.5 阻斷ROCK對 SB-706375 改善大鼠離體心肌I/R損傷的影響
        4.5.1 阻斷ROCK對 SB-706375 改善大鼠離體心肌I/R損傷后血流動力學指標的影響
        4.5.2 阻斷ROCK對 SB-706375 改善大鼠離體心肌I/R損傷后灌流液中CK-MB,LDH活性和cTnI含量的影響
        4.5.3 阻斷ROCK對 SB-706375 改善大鼠離體心肌I/R損傷后RhoA活性的影響
        4.5.4 大鼠離體心肌組織中RIP3與ROCKs(ROCK1,ROCK2)蛋白之間的相互作用
5.討論
    5.1 SB-706375 對小鼠心肌缺血性損傷的保護作用
    5.2 SB-706375 通過抑制ROCK/RIP3 通路發(fā)揮小鼠心肌缺血性損傷的保護作用
    5.3 CSE產生的H2S參與小鼠缺血性心肌損傷的ROCK/RIP3 通路
    5.4 SB-706375 對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷的保護作用
    5.5 SB-706375 抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用機制
6.結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3842095